一、纤维蛋白原凝块对HBsAg的影响分析(论文文献综述)
王景,王万宇骥,张怡,马亚萍,王信[1](2022)在《白细胞介素6参与成骨及骨修复的一系列反应过程》文中指出背景:大节段骨缺损的愈合一直是临床难题,虽然已经发现多种促进成骨的物质,但炎症因子对骨愈合影响的研究还需要继续深入,特别是其在骨愈合早期影响成骨的重要因素还需要继续研究。目的:综述目前已知相关文献,总结白细胞介素6与骨代谢之间的关系,了解白细胞介素6在成骨中的作用机制,为新的成骨方案提供理论参考。方法:由第一作者于2021年7-8月进行检索,检索1990年1月至2021年7月Pub Med数据库及1979年1月至2021年7月CNKI数据库相关文献,英文检索词为"Interleukin 6" or"bone metabolism"or"osteoblast"or"osteoclast"or"bone regeneration"or "Mesenchymal stemcells"or"Vascularization",中文检索词为"白细胞介素6"and"骨再生","白细胞介素6"and"成骨细胞","白细胞介素6"and"破骨细胞","白细胞介素6"and"骨代谢"。初检得到中英文文章903篇,按纳入排除标准共纳入88篇文献进行综述分析。结果与结论:白细胞介素6作为体内作用十分广泛的细胞因子,在成骨的各个阶段发挥着重要的作用。(1)研究发现白细胞介素6对于骨修复阶段的各种细胞(如间充质干细胞、成骨细胞、破骨细胞)以及骨缺损处的血管生成都有着重要的作用。(2)白细胞介素6在体内与多种成骨因素串扰,在庞大的骨修复网络中发挥效应。(3)血凝块作为促进早期骨愈合的重要因素,白细胞介素6除了可以调控血凝块的生成,还可以通过调节γ纤维蛋白影响血凝块的结构;而血凝块的结构对成骨早期有着重要影响,故白细胞介素6可以通过调节血凝块的结构进而影响骨愈合早期阶段。(4)该文深入综述白细胞介素6影响成骨的具体机制,有望进一步深入了解骨再生愈合,为成骨提供新的治疗策略和治疗方案。
王磊[2](2019)在《不同途径应用氨甲环酸在多节段腰椎减压融合术中的疗效分析》文中提出背景介绍:随着人口年龄的增加,退变性腰椎管狭窄症(DLSS)和退变性脊柱侧弯(Degeneratice scoliosis)的发病率逐年上升。腰椎减压融合术一直是治疗退变性脊柱疾病及多种复杂脊柱疾病常用的一种术式。多节段脊柱减压融合术需要较长的手术时间,同时伴有大量的软组织剥离和失血,常需输血。出血量会影响到并发症的处理以及住院时间和费用。临床中控制围手术期出血的措施非常有限,仍需要寻找更新的技术和方法。术前自体血留存、术中自体血回输等是目前常用的方法,止血药的应用也有助于出血量的控制。此外,在各项研究中也证实了抗纤溶药物可控制急性出血和减少外科治疗患者的输血需求。氨甲环酸(TXA)是临床上重要的一种抗纤溶药物,能够减少围手术期的出血且不会增加并发症的风险,这对于经常需要输血的脊柱外科手术尤为重要。部分研究中报告了局部应用TXA具有类似静脉的效果。本文主要评估不同方法应用氨甲环酸在多节段腰椎减压融合术中的效果。目的:本文旨在根据我院在多节段腰椎减压融合中应用氨甲环酸的经验,对TXA减少围手术期失血量的临床疗效及安全性进行评价。为氨甲环酸应用于多节段腰椎减压融合术提供理论依据。方法:选取本科室2016年10月-2018年6月入院诊断为退变性腰椎管狭窄症(DLSS)和退变性腰椎侧弯的患者资料。依据设定的纳入标准收集240例患者资料,男113例,女127例,年龄49~78岁,平均年龄65.6±10.3岁;体质指数(BMI)21.37~32.06kg/m2,平均BMI为23.8±4.6kg/m2。所有患者拟行三节段以上脊柱后路椎板减压融合术,其中拟融合三节段141例,四节段72例,五节段仅有20例。完全随机化将240例患者分成A,B,C,D四组,每组60例。其中A组为联合组(术前静脉和术后切口局部均应用TXA);B组为静脉组(单纯于术前静脉应用TXA);C组为局部组(单纯术后切口应用TXA);D组为对照组(不应用TXA)。A组患者于手术切皮前15min静脉推注TXA1g,关闭切口后注入引流管20mlNS+1gTXA,引流管在夹紧2h后放开;B组患者于手术开始前15min静脉推注TXA1g,关闭切口后注入引流管20mlNS,引流管在夹紧2h后放开;C组患者于术前不使用TXA,关闭切口后注入引流管20mlNS+1gTXA,引流管在夹紧2h后放开;D组患者术前不使用TXA,关闭切口后注入引流管20m1NS,引流管在夹紧2h后放开。收集数据用SPSS19.0软件进行分析,以p<0.05表示具有统计学意义。结果:入组后患者均进行有效统计,各组患者一般资料比较,差异无统计学意义,p值>0.05。三节段融合手术中静脉组术中出血量(296ml±46ml)低于对照组术中出血量(296ml±54ml),p值<0.05;局部组术后出血量(198ml±30ml)低于静脉组和对照组,p值<0.05;联合组总出血量(390ml±54ml)低于其他三组,差异均有统计学意义,P值均小于0.05;术后出血量与局部组相当,差异无统计学意义。四节段和五节段融合手术的各组出血量比较结果与三节段结果相同。联合组术后输血率为5%明显低于其他三组,差异有统计学意义,P值<0.05。各组术后DVT、PE等严重并非症和常见并发症发生率及分布差异无统计学意义,P值>0.05。结论:腰椎减压融合术中静脉联合局部应用氨甲环酸可有效控制围手术期失血量,作用明显优于单纯静脉或局部应用氨甲环酸,且不会增加手术并发症的发生几率。
卞丛燕[3](2019)在《冠心病合并肺动脉高压的凝血功能研究》文中进行了进一步梳理[目的]临床工作中发现冠心病合并肺动脉高压患者的发病率呈逐年增加的趋势。关注冠心病合并肺动脉高压的凝血功能变化,对指导临床治疗和手术中使用抗凝药剂量非常重要,本研究着重探讨冠心病伴有肺动脉高压患者的凝血功能异常情况。[方法]本研究共收集2018年10月-2019年8月于苏州大学附属第二医院心内科住院,择期行造影手术的患者共146例,根据冠脉造影结果和肺动脉压力水平分组,A组为对照组:冠脉正常,且无肺动脉高压,35例;B组肺动脉高压组:冠状动脉正常,但是有肺动脉高压,30例;C组冠心病组:有冠心病,但是无肺动脉高压50例;D组冠心病伴肺动脉高压组:有冠心病合并肺动脉高压组31例。观察各组患者肝素前活化凝血时间(ACT)、血栓弹力图(TEG)各参数的差异,给予普通肝素后比较各组活化凝血时间(ACT)、血栓弹力图(TEG)各参数的变化。[结果]1.各组人群在年龄、性别、吸烟史、高血压、糖尿病、高脂血症等基本资料的比较,无明显差异(P>0.05)。2.各组人群肝素前、后ACT、TEG各参数R值、K值、Angle角、MA值、CI值相比较,冠心病伴肺动脉高压组ACT、TEG-R、TEG-K值小于冠心病组,冠心病及肺动脉高压组ACT、TEG-R、TEG-K值小于对照组,TEG-Angle、TEG-MA、TEG-CI值冠心病伴肺动脉高压组大于冠心病组,冠心病组及肺动脉高压组大于对照组,且比较有统计学差异(P<0.05),多重比较采用LSD法,两两相比,显着性均小于0.05,比较有统计学意义。3.各组人群血栓弹力图中高凝图形的比较,冠心病伴肺动脉高压组中高凝图形占45.2%,冠心病组中高凝图形者占24.0%,对照组无高凝图形,且三组比较,P<0.05。4.给予各组患者3000单位普通肝素后,各凝血指标的变化中,冠心病伴肺动脉高压组中变化小于冠心病组,冠心病组小于正常对照组,且三组各凝血指标变化值相比有统计学意义,多重比较采用LSD法,两两相比,显着性均小于0.05,比较有统计学意义。5.ACT、TEG各参数与肺动脉压力的pearson相关性分析如下:ACT、TEG-R、TEG-K与肺动脉压力相关性分别为:r=-0.750,P<0.05;r=-0.770,P<0.05;r=-0.812,P<0.05,Angle、MA、CI 与肺动脉压力分别为 r=0.738,P<0.05;r=0.423,P<0.05;r=0.556,P<0.05。6.多因素回归分析:把ACT、TEG各参数与一般资料各指标进行线性分析后,将ACT、TEG作为因变量,把与之存在相关性的因子作为自变量做多元回归分析发现,影响ACT、TEG的因素有肺动脉压力、白蛋白。[结论]冠心病患者血浆凝血状态较对照组高,冠心病合并肺动脉高压组凝血较冠心病组及肺动脉高压组高;在各组同时给予普通肝素3000单位后,冠心病合并肺动脉高压组凝血指标变化较小;多因素回归分析发现凝血指标ACT,TEG与肺动脉压力相关,可能还有其它因子相关,如白蛋白等。
白龙[4](2018)在《钛种植体表面多功能生物活性涂层的构建及其促进骨整合机制的研究》文中认为医用钛(Ti)及其合金因具有良好的机械性能、耐腐蚀性和生物相容性等优点,已作为牙科种植体材料在临床上得到广泛应用。然而,Ti种植体本身是一种生物惰性材料,直接植入人体后存在由骨整合不佳引起的松动和感染两大并发症,最终导致种植失败。诸多研究表明,通过对Ti种植体表面改性能够赋予其生物活性,因此已被广大科研和临床工作者公认为是解决上述问题的有效手段。截止目前,虽然有大量的生物活性涂层被研究者开发和报道,但真正用于临床且起到积极效果的却屈指可数。究其原因,可能是在种植体表面设计时没有统筹考虑其对骨整合各个阶段的影响。骨整合是一个随时间动态变化的复杂的生物学过程,主要涉及术后出血、血凝块形成、炎症反应、血管新生和新骨生成等。种植体植入后对每个阶段的调控均会影响后续的生物学事件,并最终决定种植的成败。本论文基于前期研究基础,采用物理/化学改性方法,制备出五种不同的Ti种植体表面,并系统地研究了其对骨整合中涉及的至少两个阶段的影响,以期对每个阶段产生正向调控,并最终促进种植体骨整合,提高种植成功率。结果表明,五种涂层结构均可正向调控骨整合过程的多个阶段,且体外实验结果得到了体内实验的验证,文中对相关机制也进行了深入探讨。综合本论文工作,所取得的主要研究结果如下:(1)通过磁控溅射镀膜工艺,在纯Ti基体上获得五种银(Ag)含量不同的Ti-Ag复合涂层。随着Ag含量的升高(1.2 at.%-21.6at.%),Ti-Ag涂层既能长期有效抗菌,又能促进成骨细胞的增殖和分化。此外,该研究表明通过简便经济的磁控溅射技术可以在Ti基体表面载入各种活性元素,且活性元素能通过缓释的过程影响细菌和细胞的长期行为。(2)在上述研究基础上,首先通过磁控溅射在Ti基体上制备五种硅(Si)含量不同的Ti-Si涂层,随后采用阳极氧化得到含Si的TiO2纳米管。研究发现,随着Si含量的升高(1.2 wt.%-10.7wt.%),Ti-Si纳米管既能促进成骨细胞的增殖和分化,又能增强内皮细胞的功能。此外,该技术解决了纳米管阵列非金属Si元素的载入问题,并构建出可以长期缓释Si离子的纳米管阵列,将纳米管的形貌因素与Si的生物功能性有机结合起来,使Ti种植体兼具成骨和血管新生诱导能力。(3)通过微弧氧化在纯Ti基体上制备出微米多孔涂层,随后采用蒸汽水热处理制备出表面负载纳米级羟基磷灰石(HA)颗粒/柱的微纳复合结构。研究发现,负载纳米HA颗粒的微纳复合结构既能通过刺激巨噬细胞营造有利的骨免疫微环境,又能促进成骨/内皮细胞的增殖和分化。此外,上述骨免疫微环境协同表面理化性质的影响通过多重信号通路(TGF-β、OPG/RANKL和VEGF)进一步促进成骨/内皮细胞的功能,最终促进骨整合。相反的是,负载纳米HA柱的微纳复合结构则抑制上述细胞的功能,进而抑制骨整合。(4)在上述研究基础上,因此我们进一步探索纳米HA颗粒的尺寸对骨整合的影响。同样地,首先通过微弧氧化在纯Ti基体上得到微米多孔涂层,随后采用退火处理得到负载不同尺寸纳米级HA颗粒的微纳复合结构。研究发现,该微纳复合结构既能通过刺激巨噬细胞营造有利的骨免疫微环境,又能促进成骨/内皮细胞的增殖和分化,且这种影响与纳米HA颗粒的尺寸呈正相关。此外,上述骨免疫微环境协同表面理化性质的影响能够通过多重信号通路(TGF-β、OPG/RANKL和VEGF)进一步促进成骨/内皮细胞的功能,最终促进骨整合。(5)通过阳极氧化在纯Ti基体上制备出不同直径(15 nm、60nm和120 nm)的TiO2纳米管涂层。研究发现,直径为15 nm的纳米管既能通过上调血小板活化水平来介导纤维蛋白原键合形成致密纤细的血凝块结构,又能促进对骨整合有正向作用的活性因子(PDGF-AB和TGF-β1)的释放;此外,直径15 nm的纳米管能协同上述血凝块结构,通过刺激巨噬细胞营造有利的骨免疫微环境,最终促进骨整合。
张艳红[5](2018)在《血栓弹力图在神外手术患者及肝病患者凝血功能检测中的应用》文中指出研究背景凝血功能是指:使血液由流动的状态变成不能流动的凝胶状态的过程的一种能力,其实质就是血浆中的可溶性纤维蛋白原转变为不溶性的纤维蛋白的功能。狭义上就是指机体在血管受到损伤时所具有的由血液中的凝血因子按照一定顺序惯续激活生成凝血酶最终使纤维蛋白原变成纤维蛋白从而促使血液凝固的能力。广义上的凝血功能还包括血小板活性。临床上会有多种因素如创伤、炎症反应、凝血因子消耗、纤溶异常、血液稀释、应用抗凝药物、低体温等常影响病人的出凝血功能,导致临床难以控制的出血、血栓形成以及继发器官功能障碍,严重影响病人诊疗及预后。手术刺激导致血浆炎症因子高表达与凝血功能变化一致。手术刺激致血浆内炎症因子IL-6和IL-1β升高,炎症因子通过不同的机制影响凝血与纤溶。神经组织本身对局部的凝血与纤溶有一定的影响,如正常脑组织和星形胶质肿瘤细胞都会表达大量的组织因子(TF)启动凝血。胶质母细胞瘤和脑转移瘤患者血浆组织因子抑制因子有所增高,可能会引起轻度的血管内弥散性凝血功能障碍。另外,脑肿瘤通过影响凝血和纤溶,最终导致神经外科患者深静脉血栓和肺栓塞发生率较高。肝脏是人体内最大的代谢器官,当肝脏发生病变时,某些凝血物质尤其是维生素K依赖性凝血因子及纤维蛋白原合成减少,清除功能障碍,抗凝血酶m及纤溶酶原合成减少,严重肝病及肝功能衰竭时可发生DIC和原发性纤溶亢进;门脉高压、充血性脾大时,血小板减少等均可导致凝血功能异常,甚至增加出血或血栓的风险。近几年,血栓弹力图已被逐渐应用到产科和泌尿外科,作为临床诊断和指导治疗的工具之一。目前血栓弹力图已被广泛应用,如:临床肝移植、心血管手术、肾移植、肿瘤、输血治疗等,但目前血栓弹力图检测神外手术患者及肝病患者凝血功能,反映其出凝血状态的具体改变并未有详细探讨,因此本文主要应用血栓弹力图检测神外手术患者及肝病患者凝血功能,探讨其改变意义,从而为临床诊断患者出凝血状态提供有用的信息及依据。第一部分血栓弹力图在神外手术患者凝血功检测中的应用目的:探讨血栓弹力图(TEG)对神经外科患者手术前后凝血功能检测的意义,分析血栓弹力图参数与常规凝血功能试验指标的相关性。方法:选取100例神经外科手术患者为研究对象,于术前进行TEG(R值、K值、α值、MA值)和常规凝血功能检测(PT、APTT、TT、FIB),分析血栓弹力图参数与常规凝血功能试验指标的相关性;其中50例患者于术后再次进行TEG检测,比较手术前后TEG各指标的变化。结果:与术前相比,患者术后MA均值增高,差异有统计学意义(P<0.01)。相关性分析中,R值与APTT成正相关(r=0.271,p=0.006);K值与FIB成负相关(r=-0.446,p=0.000)、与PLT成负相关(r=-0.417,p=0.000);α值与 FIB 成正相关(r=0.423,p=0.000)、与 APTT 成负相关(r=0.211,p=0.035)、与 PLT 成正相关(r=0.375,p=0.000);MA 与 PLT 成正相关(r=0.555,p=0.000)、与 FIB 成正相关(r=609,p=0.000)。结论:TEG检测能反映神经外科患者手术前后凝血功能的变化,与常规凝血功能试验有互补作用。TEG各参数与常规凝血功能试验指标之间存在一定的相关性。第二部分血栓弹力图在肝病患者凝血功能检测中的应用目的:研究肝病患者凝血功能的改变,探索血栓弹力图(TEG)在肝病患者凝血功能检测中的意义,指导肝病患者的临床诊疗。方法:选取本院2017年8月~2017年9月收治的54例各种肝病患者作为观察组,54例健康体检者作为对照组,两组均进行血栓弹力图检测,比较两组TEG指标的差异。观察组同时进行传统凝血功能检测,探索其改变的意义。探索TEG检测参数与传统凝血功能指标之间的相关性。结果:血栓弹力图检测中,与对照组相比,观察组R值降低(P<0.01),MA值降低,差异有统计学意义(P<0.01),K值、α值、LY30、EPL差异无统计学意义(P>0.05)。观察组中肝病各组与对照组相比,肝功能不全(A组)R值降低,差异有统计学意义(P<0.01),K值、α值、MA值LY30、EPL差异无统计学意义(P>0.05);乙型病毒性肝炎(B组)、肝硬化(C组)R值和MA值均降低,差异有统计学意义(P<0.01),K值、α值、LY30、EPL差异无统计学意义(P>0.05);肝衰竭(D组)MA值降低,差异有统计学意义(P<0.01),R值、K值、α值、LY30、EPL差异无统计学意义(P>0.05)。传统凝血功能检测中,观察组PT、APTT、TT延长,差异有统计学意义(P<0.01);FIB、抗凝血酶Ⅲ减低,差异有统计学意义(P<0.01),Ⅷ因子活性增强,差异有统计学意义(P<0.01)。相关性分析中:APTT与R值成正相关(r=0.271,P=0.000);PLT 与 K 值成负相关(r=-0.388,P=0.005)、与 α 值成正相关(r=0.391,P=0.005)、与 MA 成正相关(r=0.549,P=0.000);FIB 与 K值成负相关(r=-0.466,P=0.000)、与 α值成正相关(r=0.432,P=0.000)。结论:血栓弹力图检测肝病患者凝血功能的变化,与传统凝血功能试验有互补作用,对指导肝病患者的临床诊疗有重要意义。TEG各参数与传统凝血功能试验指标之间存在一定的相关性。
牟琼瑶[6](2018)在《血栓弹力图形与凝血过程的研究》文中认为随着现代科技和医学的不断发展,医学检验水平也随之提高,在目前大的市场背景下,各临床科室已开始广泛地利用凝血功能障碍检查来协助判断和诊疗,临床医生和研发人员也逐渐意识到了这项常规检查的重要性和必要性,特别是心脑血管疾病、抗凝及溶栓检测、术前检查、出血性疾病的诊断与治疗监测作用。目前,临床上常规的凝血功能检测项目主要包括以下几个试验:血浆凝血酶原时间的测定(PT)、凝血酶时间的测定(TT)、部分活化凝血活酶时间的测定(APTT)、血浆纤维蛋白原的测定(Fib)、单个凝血因子测定、血小板技术(PLT)以及D-二聚体(D-Dimer)测定等。上述凝血检测内容具有非动态性,而血栓弹力图仪则是使用物理方法模拟人体内环境下凝血的整个过程,是从血液开始凝固、凝固以及纤溶过程的整个动态变化,因此血栓弹力图在临床凝血检测中更具有参考意义和研究价值。血栓弹力图仪的测量是利用动态描记的方法,从而得到血液在凝固的过程中杯盖探针所受到的切应力随时间变化的一条曲线。这条曲线是一条上下基本对称且密集振荡的曲线,通常取其外轮廓线作为研究对象,便是熟悉的血栓弹力图曲线,根据这条曲线的特征描述参数可以来分析血液从凝固到纤溶整个过程的粘弹性变化,是凝块形成、溶解以及凝块质量的动力学的量度,从而判断出患者是否患有与凝血功能障碍相关的疾病。血栓弹力图(Thrombelastography)图形的分析一直都是利用TEG图形包络线的性质来描述凝血特性的,随着时间的推移,评价TEG的临床参数越来越多。从临床诊断流程来看,判断研究病因时需结合曲线中多个参数的取值特征,实行多个步骤,才能得到患者的凝血功能特性,判断起来尤为复杂,另外这些参数也并未完全反映出血栓形成的动态过程,需要进一步验证分析。本课题提出用频域分析的方法直接分析血栓弹力图采集的数据信号,从而得到血栓弹力图的频谱参数来描述血栓弹力图凝固过程的特性,其范围能有效地区分不同凝固状态的特征,大大地简化了凝固过程的评价参数,为临床医师节省了判断时间。另外,在血栓弹力图纤溶过程中,本课题通过大量的的实验观察,提出一个新的纤溶参数——血块保持时间(CRT),此参数能快速判断样本是否有纤溶亢进的迹象,补充了血栓弹力图纤溶过程的评估。使用本课题提出的血液凝固因子,能反映血液凝固过程的相关特征;通过实验数据得出的三种典型凝固状态的取值范围,能直观地判断出患者的凝血状态,有效地减少了凝固过程的判断参数;血块保持时间参数能在血液凝固到达最大值后10min内判断出样本是否有纤溶亢进迹象,缩短了纤溶亢进样本的判断时间。
郭积芳[7](2015)在《中介蝮蛇毒中Intobin1和Intobin2基因Kex2位点突变体在毕赤酵母中的表达及生物活性研究》文中指出蛇毒类凝血酶(Snake venom thrombin-like enzyme,SVTLEs),属于胰蛋白酶家族中的丝氨酸蛋白酶,主要存在于蝰科蝮亚科蛇的蛇毒中。它在体外能够直接作用于纤维蛋白原,催化纤维蛋白原分子的特定部位Arg-Gly肽键的裂解,释放血纤肽,从而导致纤维蛋白的单体首尾聚合形成凝块;但在体内不激活凝血因子,由它水解生成的纤维蛋白凝块不产生侧链交联,很容易被天然网状内皮系统或正常的纤溶作用所清除,表现降纤、抗凝的效果。临床上,蛇毒类凝血酶已成为防治血栓栓塞性疾病的有效药物,但是由于蛇毒资源有限、分离纯化成本高,难以保证产量,因此利用基因工程手段获得重组蛇毒类凝血酶是满足需求的有效途径。巴斯德毕赤酵母表达系统作为一种成熟的真核表达系统,已经成功表达了多种蛋白,许多蛇毒类凝血酶也已经在毕赤酵母中得到了表达,但是关于中介蝮蛇毒类凝血酶在毕赤酵母中表达的报道却很少。因此,本研究以来自中介蝮毒腺cDNA文库的两个类凝血酶基因为材料,将密码子优化,并突变掉2个Kex2位点,然后采用毕赤酵母GS115菌株进行基因工程表达,对其活性进行分析,有望为该酶的进一步研究奠定基础。本研究的内容:1.对本实验室前期建立的中介蝮毒腺cDNA文库中的两个类凝血酶基因序列进行初步的生物信息学分析。并根据分析结果将其命名为Intobin1和Intobin2。2.根据毕赤酵母密码子偏爱性对Intobin1和Intobin2基因进行密码子优化;为避免毕赤酵母分泌的Kex2蛋白酶对发酵液中所表达的目的蛋白的降解,将Intobin1和Intobin2基因编码的氨基酸中的Arg突变为Lys;同时在Intobin1和Intobin2序列的C末端引入6个His标签,方便后期目的蛋白的纯化。将优化后的Intobin1和Intobin2基因序列送至南京金斯瑞生物科技有限公司全序列合成,并将优化后的突变型(Mutant)基因 Intobin1 命名为 mIntobin1,突变型(Mutant)基因 Intobin2命名为 mIntobin2。3.将突变型基因mIntobin1和mIntobin2克隆于分泌型表达载体pPIC9K,构建重组载体 pPIC9K/mIntobin1 和 pPIC9K/mIntobin2。4.将线性化的重组载体pPIC9K/mIntobin1和pPIC9K/mIntobin2电转入毕赤酵母GS115菌株中,并通过不同浓度的抗生素G418和MD平板筛选阳性克隆;利用试剂盒法提取重组后的 GS115/pPIC9K/mIntobin1 和 GS115/pPIC9K/mlntobin2 的基因组,并用PCR法验证其表型;鉴定正确的阳性克隆进行初步诱导表达,诱导产物用SDS-PAGE和Western-blot进行分析。5.采用单因素实验方法,从诱导时间、甲醇浓度、温度、pH值、抗氧化剂五个方面对诱导表达菌株进行发酵条件优化。以最优的发酵条件进行大规模诱导表达,并采用Ni-NTA纯化柱对目的蛋白进行纯化。6.采用Bradford法计算优化后诱导上清的总蛋白浓度以及纯化后mIntobin1和mIntobin2蛋白的浓度,并采用Gel-Pro软件分析纯化后mIntobin1和mIntobin2蛋白的纯度。7.对纯化后的重组蛋白mIntobin1和mIntobin2进行生物学活性测定。利用BApNA测定mIntobin1和mIntobin2的酰胺水解活性;利用纤维蛋白平板法测定其纤溶活性;采用SDS-PAGE法测定其纤维蛋白原水解活性。实验结果:1.对Intobin1和Intobin2基因序列进行生物信息学分析。结果表明Intobin1基因包含一个长度为789 bp的开放阅读框,编码262个氨基酸,信号肽为1~18位氨基酸(MVLIKVLANLLILQLSYA);成熟肽分子量为26.9kDa,理论等电点为6.76;活性位点为His67、Asp112、Ser208;N-糖基化位点为105位和124位;Intobin1编码的氨基酸序列与Pallabin-2(Gloydius halys,Q9YG16.1)的同源性最高(达94%)。Intobin2基因包含一个长度为783 bp的开放阅读框,编码260个氨基酸,信号肽为1~18位氨基酸(MVLIRVLANLLILQLSYA);成熟肽分子量为26.55 kDa,理论等电点为8.43;活性位点为His67、Asp112、Ser208;N-糖基化位点为123和124 位;Intobin2 编码的氨基酸序列与 Gloshedobin(Gloydius Shedaoensis P0C5B4.2)的同源性最高(达99%)。2.密码子优化结果表明,优化后的Intobin1和Intobin2基因的氨基酸序列与原基因的氨基酸序列一致,优化后Intobin1基因编码的氨基酸中有18个氨基酸的密码子进行了替换,共计72个位点,GC含量由45.61%调整到42.89%。优化后Intobin2基因编码的氨基酸中有17个氨基酸的密码子进行了替换,共计100个位点,GC含量由47.23%调整到43.71%。为防止Kex2对目的蛋白的降解,将Intobin1基因编码的氨基酸中的第138位的Arg突变为Lys,Intobin2基因编码的氨基酸中的第26、48位的Arg突变为Lys。3.优化后的基因克隆于分泌型表达载体pPIC9K,经PCR验证、测序鉴定表明重组载体 pPIC9K/mIntobin1 和 pPIC9K/mIntobin2 已构建成功。4.利用电穿孔仪将线性化的表达载体pPIC9K/mIntobin1和pPIC9K/mIntobin2电转入毕赤酵母GS115中,获得了重组的转化子;通过不同G418浓度的YPD平板筛选,获得了高抗性转化子;MM和MD平板筛选结果表明转化子全为甲醇快速利用型(Mut+);PCR 结果表明 pPIC9K/mIntobin1 和 pPIC9K/mIntobin2 已成功整合入GS115的基因组中;初步诱导表达的上清经SDS-PAGE和Western-blot分析,表明重组蛋白mIntobin1和mIntobin2已获得表达,分子量约为35.0 kDa。5.优化 GS115/pPIC9K/mIntobin1 和 GS115/pPIC9K/mIntobin2 在毕赤酵母中的发酵条件,得到了最佳的诱导表达条件。GS115/pPIC9K/mIntobin1的最佳表达条件为:诱导时间为120 h、甲醇浓度为1%、温度为30℃、pH为6.0,添加褪黑素和抗坏血酸能提高mIntobin1蛋白在毕赤酵母中的表达;GS115/pPIC9K/mIntobin2的最佳表达条件为:诱导时间为96h、甲醇浓度为1%、温度为28℃、pH为6.0,添加抗氧化剂褪黑素和抗坏血酸可以提高mIntobin1在毕赤酵母中的表达。经Ni-NTA柱纯化,在分子量为35.0 kDa处得到了 mIntobin1和mIntobin2蛋白的单一条带。6.按优化后得到的最佳诱导条件进行诱导,结果表明优化后GS115/pPIC9K/mIntobin1 诱导的上清总蛋白含量为 265 μg/ml,GS115/pPIC9K/mInt-bin2诱导的上清总蛋白含量为225 μg/ml,与未优化时的初步表达相比,分别提高了 48.5%和47.3%。纯化后mIntobin1和mIntobin2蛋白的浓度分别为75μg/ml和60μg/ml,与未突变的Intobin1和Intobin2(纯化后)的含量相比无明显变化。Gel-Pro软件分析发现,纯化后mIntobin1的纯度达到80%,mIntobin2的纯度达到70%。7.对纯化后的mIntobin1和mIntobin2蛋白进行相关生物活性鉴定,结果表明mIntobin1和mIntobin2不具有酰胺水解活性和纤溶活性,但具有纤维蛋白原水解活性,mIntobin1从2 h起对牛纤维蛋白原的Aα和Bβ链有微弱的水解作用,将Aα和Bβ链降解成小的片段;而mIntobin2与牛纤维蛋白原保温30 min时,水解牛纤维蛋白原的Bβ链,将Bβ链降解成小的片段,并且随着保温时间的延长水解作用明显加强;但mIntobin1和mIntobin2对牛纤维蛋白原的γ链均没有水解作用。结论:本研究通过一系列实验方法,确立了有效表达mIntobin1和mIntobin2基因的体系,为mIntobin1和mIntobin2基因的深入研究奠定了一定的基础。
侯满意,朱金女,熊少欢[8](2015)在《冷沉淀的制备与临床应用》文中提出冷沉淀富含Ⅷ因子、纤维蛋白原、血管性血友病因子、纤维结合蛋白等成分,是重要的血液成分之一。随着对冷沉淀研究的不断深入,其临床应用也越来越广泛,不再单一地用于治疗甲型血友病。
王莎莎[9](2014)在《尖吻蝮蛇中一种新的丝氨酸蛋白酶的纯化、性能及ACF II降血压机理的研究》文中提出全文由两个部分组成。第一部分的研究内容:从尖吻蝮蛇粗毒中提取出一种新的纤维蛋白原溶解酶,并将其命名为DAnase,研究了DAnase提纯方法并对其相关理化性质进行了检测。第二部分的研究内容:研究了尖吻蝮蛇蛇毒中抗凝血因子II (ACFII)的降血压作用。文献报道静脉注射一定剂量的ACFII能够引起大鼠血压降低,说明其具有降血压作用,但是ACFII的降血压作用机理目前尚不清楚。在这部分中对ACFⅡ的降血压机理进行了研究。全文分为如下三章。第一章:我们分别介绍了纤维蛋白(原)溶解酶、蛇毒金属蛋白酶、蛇毒丝氨酸蛋白酶、血液凝固过程、高血压、一氧化氮(NO)和一氧化氮合成酶(NOS)和ACFII的相关知识。第二章:通过阴阳离子交换层析的方法从尖吻蝮蛇蛇毒中提取出一种新的纤维蛋白原酶,并将其命名为DAnase o纤维蛋白原酶通常只有一条链,与其它纤溶酶不同,DAnase是一个由二硫键连接两条链的二聚体。在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)上DAnase的表观分子量为25kDa,通过毛细管等点聚焦的方法检测出其等电点为6.03。 DAnase具有纤维蛋白原酶活性,但不具有水解纤维蛋白的活性。它优先水解纤维蛋白原的Aα链,接着水解Bp链,但对Y链没什么影响。DAnase也展示出了精氨酸酯酶活性,并且其水解纤维蛋白原能力和精氨酸酯酶活性都会被苯甲基磺酰氟(PMSF)和三-(2-甲酰乙基)膦盐酸盐(TCEP)抑制,但EDTA对其活性却没有任何影响,说明DAnase是一种丝氨酸蛋白酶,且其活性依赖于二硫键。DAnase强烈抑制ADP诱导的血小板聚集,但不具有水解ADP能力,说明DAnase对ADP诱导的血小板聚集的抑制作用与其纤维蛋白原酶水解活性有关。DAnase不具有出血活性,也不具有活化凝血因子XIII (FXIII)的能力。第三章:通过阴阳离子交换层析的方法从尖吻蝮蛇蛇毒中纯化出ACF II, ACF II是一种凝血因子IX/X结合蛋白,同时具有抗凝血作用和降血压作用。在本章中,我们研究了ACFII对小鼠血清中一氧化氮含量的影响。结果表明,ACF II会引起血清中NO含量增加,并且存在剂量依赖性。但是NO浓度会随着时间增加而逐渐减少,并最终稳定下来。ACFII对血清中NO含量的影响作用会被一氧化氮合成酶抑制剂N-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)、钙调蛋白抑制剂N-6(氨基己烷基)-5-氯-1-磺胺(W-7)抑制,而心钠素抑制剂靛红(Isatin)对其没什么影响,表明ACFII的降血压作用可能与一氧化氮合成酶或是钙调蛋白有关。为了进一步探索,我们从鼠脑中提取出钙调蛋白,但是ACFII与钙调蛋白没有发生结合反应,表明钙调蛋白不是ACFⅡ的降血压作用靶点。虽然ACFⅡ的降血压作用靶点还未确定,但本文结果表明,ACFⅡ通过激活一氧化氮信号途径,产生降血压作用。ACFⅡ降血压作用靶点可能是一氧化氮合成酶或是位于NO信号传导途径中一氧化氮合成酶上游的蛋白质。
李斌[10](2013)在《人纤维蛋白原分离纯化工艺研究》文中指出人纤维蛋白原(human fibrinogen, Fg)是血浆中的蛋白成分,含量高达2~4g/L,在人凝血系统中发挥着关键作用,凝血的最后阶段是Fg在凝血酶的作用下转变为纤维蛋白,纤维蛋白和其他血细胞成分聚集成不溶性团状物达到止血的目的。Fg除直接参与凝血过程外,还在血小板聚集,血液粘度方面起着重要作用,是心、脑血管病发病的重要原因。Fg缺乏常见的相关疾病包括:先天性纤维蛋白原减少或缺乏症,由于肝损伤严重、肝硬化、弥散性血管内凝血、外伤、产后大出血、大手术、内出血等导致的获得性纤维蛋白原缺少症。由于先天因素引起的减少或缺乏症,补充Fg是目前唯一可靠的治疗方法,而对于后天不同因素引起的减少或缺乏症,根据病因的不同,也需要输注不同剂量的Fg制剂,另外,Fg还是一种止血用的军事战略储备药品,每年必须有一定的储备量。然而,目前我国只有少数几个血液制品单位具备Fg制剂生产能力,2008到2010年间正在生产的几家企业的产量也非常有限,3年间全国总产量不足10万瓶。使Fg制剂在临床上一直处于供不应求状态。故本课题拟利用公司现有的血浆来开发Fg制剂生产工艺,制备出符合中国药典要求的产品,缓解临床急需的局面。本课题的研究内容和取得的成果有以下几方面:1通过对现有血液制品工艺各组分研究,确定了制备Fg的原料我们对该产品的生产用原料进行了详细的研究,通过对多批次原料血浆、冷沉淀、酸沉淀和Cohn氏组分Ⅰ+Ⅲ进行了蛋白质含量、Fg纯度、Fg凝固活力进行了实验分析,同时评估了原料的选择对公司现有产品线的影响,最终选定酸沉淀为Fg制备工艺的原料。酸沉淀是生产人凝血因子Ⅷ (human coagulation factor Ⅷ,FⅧ)过程中产生的富集Fg的酸性沉淀,该沉淀在现有生产体系中作为废弃物处理,选择酸沉淀作为Fg制备原料能够进一步提高人血浆的综合利用率,产生更大的经济效益和社会效益。2确定了Fg工艺路线,得到了高纯度的Fg原液经研究确定了Fg制备工艺路线:健康人新鲜冰冻血浆经离心制取冷沉淀,再经酸沉淀、DEAE-650M柱层析分离纯化,然后经过S/D法灭活脂包膜病毒,之后经过两步甘氨酸/氯化钠沉淀去除S/D,超滤获得Fg原液,经检定,Fg原液纯度大于90%,凝固时间小于30s。该工艺没有选取国内常用的低温乙醇法,避免了乙醇对蛋白变性的影响,同时降低了工艺本身对温度精度的要求。3选取了适合Fg生产工艺的的病毒灭活方法,并对病毒灭活效果进行了验证在制品安全性上,2005版《中国药典》颁布之后,新的标准要求血液制品特别是凝血因子类制品要经过针对脂包膜病毒和非脂包膜病毒的有效病毒灭活步骤。我们在病毒灭活工艺上做了详细而且可靠的试验,确定使用有机溶剂/去污剂法(solvent/detergent, S/D)和干热法,分别灭活脂包膜病毒和非脂包膜病毒。我公司委托中国军事医学科学院对我公司生产的三批人Fg进行病毒灭活验证。批号分别为:200908S01、200909S02、200909S03。验证结果显示:三批人Fg中间品溶液经过S/D法灭活后,均无可以检测到的HIV、PRV和Sindbis,即可使HIV、PRV和Sindbis的滴度下降4个log以上。同时对EMCV的干热灭活病毒效果进行了验证,病毒灭活效果符合国家要求。4通过中试放大,制备了样品,进行了稳定性研究,获得了临床试验批件本课题对中试制备的规格为0.5g/瓶,批号分别为:201001S02、201002S03、201003S04的Fg制剂进行25℃的加速试验和2~8℃的长期稳定性研究,产品的外观、真空度、复溶时间、可见异物、pH和稳定性(复溶后37℃温育60min无凝块或纤维蛋白析出)、Fg含量、凝固活力等与上市的产品进行了质量对照比较研究。结果表明:我公司试制的3批制品的各项指标全部合格;与对照品的对比研究表明,我公司试制品和上市对照品的各项指标都在合格范围之内,部分指标的检定结果还要优于对照品。2012年3月已获得国家食品药品监督管理局的临床试验批件,临床试验正进行中。
二、纤维蛋白原凝块对HBsAg的影响分析(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、纤维蛋白原凝块对HBsAg的影响分析(论文提纲范文)
(2)不同途径应用氨甲环酸在多节段腰椎减压融合术中的疗效分析(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
符号说明 |
前言 |
1 资料与方法 |
1.1 一般资料 |
1.2 患者入组标准 |
1.2.1 病例纳入标准 |
1.2.2 病例排除标准 |
1.2.3 受试者终止试验标准 |
1.3 手术方法 |
1.3.1 术前处理及分组 |
1.3.2 手术处理 |
1.3.3 术后处理 |
1.4 统计指标及评价方法 |
2 结果 |
2.1 试验流程图 |
2.2 试验结果比较 |
2.2.1 患者一般临床资料比较 |
2.2.2 各组间围手术期资料比较 |
2.2.3 各组间实验室资料比较 |
2.2.4 各组并发症和不良反应发生情况比较 |
3 讨论 |
3.1 脊柱椎板减压融合术 |
3.1.1 脊柱减压融合术手术节段定位 |
3.1.2 关于植骨融合的选择 |
3.2 氨甲环酸在腰椎减压融合术中的应用 |
3.2.1 氨甲环酸的作用机制 |
3.2.2 氨甲环酸在多节段腰椎减压融合手术中应用的有效性 |
3.2.3 氨甲环酸在多节段腰椎减压融合手术中剂量 |
3.2.4 氨甲环酸在多节段腰椎减压融合手术中应用的安全性 |
3.2.5 TXA对新型抗凝药物的影响 |
3.3 本研究存在的问题 |
4 小结 |
附图 附表 |
参考文献 |
综述 |
参考文献 |
致谢 |
学位论文评阅及答辩情况表 |
(3)冠心病合并肺动脉高压的凝血功能研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
第一章 前言 |
第二章 材料和方法 |
2.1 研究对象 |
2.2 主要仪器 |
2.3 研究方法 |
2.4 统计学处理 |
第三章 实验结果 |
3.1 各组资本资料的比较 |
3.2 各组肝素前活化凝血时间(ACT)、血栓弹力图(TEG)各参数的比较 |
3.3 各组患者肝素后ACT、TEG各参数的变化 |
3.4 各组患者高凝图形的比例比较 |
3.5 各组患者在肝素前、后ACT值及变化的比较 |
3.6 各组TEG-R肝素前、后及变化的比较 |
3.7 计算TEG ACT与肺动脉压力的相关性 |
3.8 分析计算TEG、ACT是由哪些因子决定的数值 |
第四章 讨论 |
第五章 结论 |
参考文献 |
综述 肺动脉高压的血栓栓塞的机制 |
参考文献 |
本人在校期间发表的文章 |
中英文对照缩略词表 |
致谢 |
(4)钛种植体表面多功能生物活性涂层的构建及其促进骨整合机制的研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
第一章 绪论 |
1.1 钛种植体的应用现状及存在问题 |
1.2 骨整合的过程 |
1.2.1 血凝块形成 |
1.2.2 巨噬细胞的免疫响应 |
1.2.3 血管新生 |
1.2.4 新骨生成 |
1.3 Ti种植体的表面改性 |
1.3.1 磁控溅射 |
1.3.2 等离子喷涂 |
1.3.3 离子注入 |
1.3.4 溶胶-凝胶法 |
1.3.5 酸碱处理 |
1.3.6 热处理 |
1.3.7 阳极氧化 |
1.3.8 微弧氧化 |
1.4 本论文的主要研究内容及方案 |
第二章 Ti-Ag涂层的构建及其抗菌/成骨性能的研究 |
2.1 引言 |
2.2 主要实验设备 |
2.3 主要实验材料及试剂 |
2.4 样品制备及表征 |
2.4.1 磁控溅射镀膜工艺 |
2.4.2 涂层表面形貌及组分确定 |
2.4.3 润湿性测试 |
2.4.4 Ag~+的析出 |
2.4.5 涂层抗菌性能评价 |
2.4.6 成骨细胞培养 |
2.4.7 成骨细胞毒性 |
2.4.8 成骨细胞增殖 |
2.4.9 成骨细胞黏附及骨架 |
2.4.10 成骨细胞形态 |
2.4.11 ALP活性 |
2.4.12 胶原分泌 |
2.4.13 细胞外基质矿化 |
2.4.14 统计分析 |
2.5 实验结果 |
2.5.1 涂层表面形貌及组分表征结果 |
2.5.2 Ag+释放结果和抗菌性能评估 |
2.5.3 细胞黏附 |
2.5.4 细胞骨架复染和形貌 |
2.5.5 细胞毒性和增殖 |
2.5.6 成骨分化结果 |
2.6 讨论 |
2.7 本章小结 |
第三章 Ti-Si纳米管的构建及其对内皮/成骨细胞的影响 |
3.1 引言 |
3.2 主要实验设备 |
3.3 主要实验材料及试剂 |
3.4 样品制备及表征 |
3.4.1 磁控溅射镀膜工艺 |
3.4.2 Ti-Si复合涂层的阳极氧化 |
3.4.3 涂层表面形貌及组分确定 |
3.4.4 润湿性测试 |
3.4.5 含Si~(4+)的培养基浸提液的制备及Si~(4+)的析出测定 |
3.4.6 细胞培养 |
3.4.7 细胞毒性 |
3.4.8 细胞增殖 |
3.4.9 细胞黏附及骨架 |
3.4.10 细胞形态 |
3.4.11 ALP活性 |
3.4.12 胶原分泌 |
3.4.13 细胞外基质矿化 |
3.4.14 成血管化实验 |
3.4.15 NO测定 |
3.4.16 VEGF酶联免疫测定 |
3.4.17 统计分析 |
3.5 实验结果 |
3.5.1 涂层表面形貌及组分表征结果 |
3.5.2 纳米管对成骨细胞功能的影响 |
3.5.3 纳米管对内皮细胞功能的影响 |
3.6 讨论 |
3.7 本章小结 |
第四章 微弧氧化TiO_2表面负载HA纳米颗粒/纳米柱复合结构的构建及其对骨整合过程的影响 |
4.1 引言 |
4.2 主要实验设备 |
4.3 主要实验材料及试剂 |
4.4 样品制备及表征 |
4.4.1 样品前处理 |
4.4.2 样品表面改性 |
4.4.3 涂层表面形貌及组分确定 |
4.4.4 样品表面羟磷灰石的沉积 |
4.4.5 润湿性测试 |
4.4.6 测定Ca和P离子析出 |
4.4.7 成骨细胞在样品表面的成骨能力评估 |
4.4.8 内皮细胞在样品表面上和样品-成骨浸提液中的内皮新生能力评估 |
4.4.9 巨噬细胞在样品表面的极化和免疫、成骨、破骨和自噬相关基因的表达 |
4.4.10 在样品-巨噬培养基中成骨/内皮细胞的活性评估 |
4.4.11 骨整合能力评估 |
4.4.12 统计学分析 |
4.5 实验结果 |
4.5.1 微纳复合涂层表面形貌及组分表征结果 |
4.5.2 负载纳米颗粒/棒微纳复合结构对成骨细胞的影响 |
4.5.3 负载纳米颗粒/棒微纳复合结构及成骨细胞-样品浸提液对内皮细胞的影响 |
4.5.4 负载纳米颗粒/棒微纳复合结构及巨噬细胞的免疫调节的作用 |
4.5.5 骨免疫、成骨和血管新生之间的相互联系 |
4.5.6 种植体在体内的骨整合 |
4.6 讨论 |
4.7 本章小结 |
第五章 微弧氧化TiO_2表面负载不同尺寸HA纳米颗粒复合结构的构建及其对骨整合过程的影响 |
5.1 引言 |
5.2 主要实验设备 |
5.3 主要实验材料及试剂 |
5.4 样品制备及表征 |
5.4.1 样品前处理 |
5.4.2 样品表面改性 |
5.4.3 涂层表面形貌及组分确定 |
5.4.4 样品表面羟磷灰石的沉积 |
5.4.5 润湿性测试 |
5.4.6 测定Ca和P离子析出 |
5.4.7 成骨细胞在样品表面的成骨能力评估 |
5.4.8 内皮细胞在样品表面上和样品-成骨浸提液中的内皮新生能力评估 |
5.4.9 巨噬细胞在样品表面的极化和免疫、成骨、破骨和自噬相关基因的表达 |
5.4.10 骨整合能力评估 |
5.4.11 统计学分析 |
5.5 实验结果 |
5.5.1 涂层表面形貌及组分表征结果 |
5.5.2 样品表面理化性质对成骨细胞功能的影响 |
5.5.3 样品表面理化性质对内皮细胞功能的影响 |
5.5.4 样品表面理化性质对巨噬细胞免疫响应的影响 |
5.5.5 成骨/内皮功能与骨免疫调节之间的关系 |
5.5.6 种植体在体内的骨整合 |
5.6 讨论 |
5.6.1 样品表面形貌形成机理 |
5.6.2 样品表面理化性质对成骨细胞功能的影响 |
5.6.3 样品表面理化性质对内皮细胞功能的影响 |
5.6.4 样品表面理化性质对巨噬细胞功能的影响 |
5.6.5 成骨/内皮功能与骨免疫调节之间的关系 |
5.6.6 样品表面骨整合的机制研究 |
5.7 本章小结 |
第六章 不同尺寸TiO_2纳米管的构建及其对血凝块结构、巨噬细胞和体内成骨的影响 |
6.1 引言 |
6.2 主要实验设备 |
6.3 主要实验材料及试剂 |
6.4 样品制备及表征 |
6.4.1 表面改性及组分 |
6.4.2 体外血凝块的形成及表征 |
6.4.3 巨噬细胞对血凝块的免疫相应 |
6.4.4 体内血凝块和骨整合能力评估 |
6.4.5 统计学分析 |
6.5 实验结果 |
6.5.1 涂层表面形貌及组分表征结果 |
6.5.2 样品表面的凝块特性 |
6.5.3 巨噬细胞的在样品上和凝块浸提液中的免疫响应 |
6.5.4 巨噬细胞在血凝块上的免疫响应 |
6.5.5 种植体表面的血凝块特性 |
6.5.6 种植体在体内的骨整合 |
6.6 讨论 |
6.6.1 种植体表面纳米尺寸对血凝块特性的影响 |
6.6.2 血凝块的结构对巨噬细胞免疫响应的影响 |
6.6.3 血凝块对骨整合的影响 |
6.7 本章小结 |
第七章 结论 |
参考文献 |
致谢 |
攻读博士期间发表的学术论文 |
攻读博士期间参与撰写的专着 |
攻读博士期间主持的项目 |
攻读博士期间参与的专利 |
攻读博士期间参加的学术会议 |
攻读博士期间获得的荣誉 |
博士学位论文独创性说明 |
(5)血栓弹力图在神外手术患者及肝病患者凝血功能检测中的应用(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
前言 |
参考文献 |
第一部分 血栓弹力图在神外手术患者凝血功检测中的应用 |
1.1 材料与方法 |
1.2 结果 |
1.3 讨论 |
参考文献 |
第二部分 血栓弹力图在肝病患者凝血功能检测中的应用 |
2.1 材料和方法 |
2.2 结果 |
2.3 讨论 |
参考文献 |
全文总结 |
综述 血栓弹力图检测妊娠期糖尿病患者凝血功能的研究进展 |
参考文献 |
中英文对照表 |
攻读学位期间成果与论文 |
致谢 |
(6)血栓弹力图形与凝血过程的研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
1 绪论 |
1.1 课题研究背景及意义 |
1.1.1 课题研究背景 |
1.1.2 课题研究意义 |
1.2 凝血功能检测方法 |
1.3 血栓与凝血检测仪器 |
1.3.1 自动血凝分析仪 |
1.3.2 血栓弹力测量仪 |
1.4 课题研究内容及创新点 |
1.5 论文结构安排 |
2 血凝机理及血栓弹力图仪相关介绍 |
2.1 血凝机理 |
2.1.1 血液凝固 |
2.1.2 纤维蛋白的溶解 |
2.2 血栓弹力图仪 |
2.2.1 TEG测量原理介绍 |
2.2.2 TEG曲线参数 |
2.2.3 TEG诊断流程 |
2.2.4 血栓弹力图的用途及特点 |
2.3 本章小结 |
3 血栓弹力图凝固过程的频域参数研究 |
3.1 血栓弹力图采集信号的特点及原理 |
3.1.1 血液弹性测量原理 |
3.1.2 血栓弹力图信号特点 |
3.2 频域分析方法 |
3.2.1 时域与频域 |
3.2.2 信号的频域分析 |
3.2.3 离散时间周期信号的频域分析 |
3.3 血栓弹力图频域参数的提出 |
3.3.1 血栓弹力图信号的频谱图 |
3.3.2 不同凝固状态下的频谱图 |
3.3.3 频域参数的提出 |
3.4 频域参数与临床参数之间的关系 |
3.4.1 凝固过程主要的临床参数介绍 |
3.4.2 血栓弹力图实验介绍 |
3.4.3 频谱最大幅值Fm与临床参数的关系 |
3.4.4 频带宽Δf与临床参数的关系 |
3.5 血液凝固因子的提出 |
3.6 本章小结 |
4 频域参数的评价和正常范围的确定 |
4.1 频谱参数Fm和Δf正常范围值的确定 |
4.2 血液凝固因子BCI正常范围值的确定 |
4.3 本章小结 |
5 血栓弹力图纤溶过程的研究 |
5.1 纤溶过程现有评价参数体系 |
5.1.1 纤溶过程的描述参数 |
5.1.2 纤溶参数的特征 |
5.2 血块保持时间参数的提出 |
5.3 本章小结 |
6 血块保持时间(CRT)的评估 |
6.1 CRT实验测定 |
6.2 正常与纤溶样本的CRT分布 |
6.3 CRT正常范围的确定 |
6.4 本章小结 |
7 总结与展望 |
7.1 工作总结 |
7.2 展望 |
致谢 |
参考文献 |
个人简历、在学期间发表的学术论文及取得的研究成果 |
(7)中介蝮蛇毒中Intobin1和Intobin2基因Kex2位点突变体在毕赤酵母中的表达及生物活性研究(论文提纲范文)
摘要 |
AbsTract |
第1章 绪论 |
1.1 蛇毒丝氨酸蛋白酶概述 |
1.2 蛇毒类凝血酶概述 |
1.2.1 SVTLEs的结构 |
1.2.2 SVTLEs的理化性质 |
1.2.3 SVTLEs的药理学作用 |
1.2.4 SVTLEs的作用机制 |
1.2.5 SVTLEs的应用 |
1.3 巴斯德毕赤酵母表达系统 |
1.3.1 毕赤酵母表达系统的基本体系 |
1.3.2 影响外源蛋白表达的因素 |
1.4 基因工程技术重组表达SVTLEs |
1.4.1 SVTLEs的原核表达 |
1.4.2 SVTLEs的真核表达 |
1.5 本文的选题依据及研究内容 |
第2章 基因序列的生物信息学分析及密码子优化 |
2.1 实验材料 |
2.2 实验方法 |
2.2.1 生物信息学分析 |
2.2.2 毕赤酵母密码子偏爱性分析 |
2.2.3 密码子优化 |
2.3 实验结果 |
2.3.1 基因及氨基酸序列分析 |
2.3.2 氨基酸序列同源性分析 |
2.3.3 毕赤酵母密码子偏爱性分析结果 |
2.3.4 密码子优化结果 |
第3章 真核表达载体的构建 |
3.1 实验材料 |
3.1.1 实验菌株及载体 |
3.1.2 实验仪器 |
3.1.3 主要实验试剂 |
3.2 实验方法 |
3.2.1 目的基因与引物的合成 |
3.2.2 目的基因mIntobin1和mIntobin2的获得 |
3.2.3 pPIC9K载体的获得 |
3.2.4 目的基因与表达载体双酶切 |
3.2.5 目的基因与载体连接 |
3.2.6 TOP10感受态细胞的制备 |
3.2.7 重组质粒的转化 |
3.2.8 质粒DNA的提取 |
3.2.9 重组载体的鉴定 |
3.3 实验结果 |
3.3.1 目的基因的PCR扩增 |
3.3.2 pPIC9K载体双酶切 |
3.3.3 重组载体的鉴定 |
第4章 重组载体电转化入毕赤酵母及高抗性转化子的筛选及阳性克隆的鉴定 |
4.1 实验材料 |
4.1.1 实验菌种和载体 |
4.1.2 实验仪器 |
4.1.3 实验主要试剂 |
4.2 实验方法 |
4.2.1 重组载体线性化 |
4.2.2 毕赤酵母GS115感受态细胞的制备 |
4.2.3 重组质粒的电转化 |
4.2.4 重组菌株的筛选与鉴定 |
4.2.5 阳性克隆的鉴定 |
4.2.6 目的蛋白的初步诱导表达 |
4.2.7 SDS-PAGE初步检测目的蛋白 |
4.2.8 目的蛋白的WesteRN-blot鉴定 |
4.3 实验结果 |
4.3.1 重组载体线性化 |
4.3.2 重组载体电转入GS115 |
4.3.3 高抗性转化子的筛选 |
4.3.4 高抗性转化子整型鉴定 |
4.3.5 高抗性转化子基因组DNA的鉴定 |
4.3.6 SDS-PAGE初步鉴定目的蛋白 |
4.3.7 WesteRN-blot鉴定 |
第5章 重组蛋白发酵条件优化及其纯化 |
5.1 实验材料 |
5.1.1 菌株 |
5.1.2 实验仪器 |
5.1.3 实验试剂 |
5.2 实验方法 |
5.2.1 Bradford法测定蛋白浓度 |
5.2.2 发酵条件的优化 |
5.2.3 重组蛋白的纯化 |
5.2.4 目的蛋白的定量分析 |
5.3 实验结果 |
5.3.1 Bradford法测定蛋白浓度 |
5.3.2 发酵条件优化 |
5.3.3 重组蛋白的纯化 |
5.3.4 目的蛋白的定量分析 |
第6章 重组蛋白的生物学活性检测 |
6.1 实验材料 |
6.2 实验仪器 |
6.3 实验试剂 |
6.4 实验方法 |
6.4.1 酰胺水解活性的测定 |
6.4.2 纤溶活性测定 |
6.4.3 纤维蛋白原水解活性测定 |
6.5 结果 |
6.5.1 酰胺水解活性的测定 |
6.5.2 纤溶活性测定 |
6.5.3 纤维蛋白原水解活性的测定 |
第7章 讨论 |
7.1 密码子优化 |
7.2 mIntobin1/ mIntobin2在毕赤酵母中的分泌表达 |
7.3 发酵条件优化及纯化情况 |
7.4 相关活性的探讨 |
第8章 结论 |
参考文献 |
附录 |
致谢 |
攻读硕士期间研究成果 |
(8)冷沉淀的制备与临床应用(论文提纲范文)
1制备方法 |
1.1常规手工方法(冷藏融化离心法) |
1.2改良后方法(水浴融化虹吸法) |
2作用机制 |
2.1冷沉淀的规格及有效期 |
2.2冷沉淀的作用机制 |
3临床应用 |
3.1血液病方面的应用 |
3.2外科方面的应用 |
3.3肿瘤患者和DIC病人的应用 |
3.4传染病方面的应用 |
3.5冷沉淀在临床中的联合应用 |
3.6其他应用 |
4注意事项 |
5应用进展 |
(9)尖吻蝮蛇中一种新的丝氨酸蛋白酶的纯化、性能及ACF II降血压机理的研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
第一章 绪论 |
1.1 引言 |
1.1.1 金属蛋白酶 |
1.1.2 丝氨酸蛋白酶 |
1.2 血液凝固的生理过程 |
1.3 ACFⅡ降血压作用的研究进展 |
1.3.1 高血压的现状 |
1.3.2 一氧化氮合成酶和一氧化氮 |
1.3.3 ACFⅡ的研究进展 |
参考文献 |
第二章 尖吻蝮蛇毒中一种新的纤维蛋白原酶的分离纯化 |
2.1 引言 |
2.2 实验相关仪器和材料 |
2.2.1 实验仪器 |
2.2.2 实验材料 |
2.3 实验方法 |
2.3.1 DAnase的分离纯化 |
2.3.2 紫外吸收系数测定 |
2.3.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定DAnase的分子量和纯度 |
2.3.4 毛细管等点聚焦实验 |
2.3.5 DAnase中金属离子的测定 |
2.3.6 DAnase水解纤维蛋白原活性 |
2.3.7 各种抑制剂对DAnase水解纤维蛋白原活性的影响 |
2.3.8 DAnase的纤维蛋白水解活性 |
2.3.9 精氨酸酯酶活性 |
2.3.10 凝血活性 |
2.3.11 血小板聚集实验 |
2.3.12 ADPase活性 |
2.3.13 出血活性 |
2.4 实验结果 |
2.4.1 尖吻蝮蛇中DAnase的分离纯化 |
2.4.2 紫外吸收光谱 |
2.4.3 SDS-PAGE测定DAnase的分子量和纯度 |
2.4.4 毛细管等点聚焦测得DAnase的等电点和纯度 |
2.4.5 DAnase中金属离子测定 |
2.4.6 水解纤维蛋白原实验 |
2.4.7 水解纤维蛋白实验 |
2.4.8 精氨酸酯酶活性 |
2.4.9 凝血活性 |
2.4.10 血小板聚集实验 |
2.4.11 ADPase活性 |
2.4.12 出血活性 |
2.5 讨论 |
2.6 小结 |
参考文献 |
第三章 抗凝血因子ACFⅡ的降血压作用机理 |
3.1 引言 |
3.2 实验仪器和材料 |
3.2.1 实验仪器 |
3.2.2 实验相关材料 |
3.3 实验部分 |
3.3.1 ACFⅡ的分离纯化 |
3.3.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定ACFⅡ的分子量和纯度 |
3.3.3 血清中NO含量的检测 |
3.3.4 ACFⅡ降血压效果与剂量的关系 |
3.3.5 ACFⅡ降血压效果与时间的关系 |
3.3.6 L-NAME、Isatin和W-7对ACFⅡ降血压作用的影响 |
3.3.7 血小板聚集实验 |
3.3.8 钙调蛋白的分离纯化 |
3.3.9 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定钙调蛋白的分子量和纯度 |
3.3.10 ACFⅡ和钙调蛋白的结合反应实验 |
3.4 实验结果 |
3.4.1 ACFⅡ的纯化 |
3.4.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定ACFⅡ的分子量 |
3.4.3 ACFⅡ对血清中NO浓度影响与其剂量之间的关系 |
3.4.4 ACFⅡ对血清中NO浓度影响与时间之间的关系 |
3.4.5 L-NAME,Isatin和W-7对ACFⅡ降血压作用的影响 |
3.4.6 钙调蛋白的分离纯化 |
3.4.7 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定钙调蛋白的分子量及纯度 |
3.4.8 ACFⅡ与钙调蛋白的结合 |
3.4.9 ACFⅡ对血小板聚集的影响 |
3.5 实验讨论 |
3.6 小结 |
参考文献 |
致谢 |
在读期间发表的论文与取得的其他研究成果 |
(10)人纤维蛋白原分离纯化工艺研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
ABSTRACT |
符号说明 |
第一部分 前言 |
1 人纤维蛋白原(Fg) |
1.1 Fg的结构特征 |
1.2 Fg的生理功能 |
2 Fg相关疾病 |
2.1 先天性Fg缺乏 |
2.2 获得性Fg缺乏 |
3 Fg的产品开发与现状 |
3.1 国内Fg产品生产情况 |
3.2 国外Fg生产现状 |
4 本课题主要研究内容 |
第二部分 Fg生产工艺研究 |
1 设计思路 |
1.1 起始原料 |
1.2 病毒灭活 |
1.3 质量控制 |
2 工艺研究 |
2.1 起始原料的选择 |
2.2 纯化工艺研究 |
3 中试放大 |
3.1 冷沉淀收集 |
3.2 酸沉淀制备 |
3.3 酸沉淀溶解 |
3.4 Toyopeal DEAE-650M柱层析 |
3.5 S/D法病毒灭活处理 |
3.6 甘氨酸沉淀去除S/D试剂 |
3.7 超滤 |
3.8 半成品配制 |
3.9 除菌过滤和分装 |
3.10 冷冻干燥 |
3.11 干热病毒灭活 |
3.12 包装,入库 |
第三部分 中试研究结果分析 |
1 原液生产工艺条件研究 |
1.1 原材料研究 |
1.2 有机溶剂/去污剂病毒灭活工艺验证 |
1.3 原液标准要求及中试批次原液检定数据 |
2 处方依据及处方制剂工艺研究 |
3 中试产品试制及检定结果 |
4 稳定性试验 |
4.1 影响因素的确定 |
4.2 加速试验 |
4.3 长期稳定性研究 |
4.4 结果分析 |
5 质量对比研究 |
5.1 外观、溶解时间、可见异物和稳定性等物理检查 |
5.2 pH、纯度和Fg总量等化学检定 |
5.3 凝固活力测定 |
5.4 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)图谱分析 |
5.5 其他质量研究 |
5.6 质量研究总结 |
第四部分 全文总结 |
1 取得的成果与结论 |
2 存在的问题 |
参考文献 |
致谢 |
攻读学位期间发表的学术论文目录 |
附录 |
学位论文评阅及答辩情况表 |
四、纤维蛋白原凝块对HBsAg的影响分析(论文参考文献)
- [1]白细胞介素6参与成骨及骨修复的一系列反应过程[J]. 王景,王万宇骥,张怡,马亚萍,王信. 中国组织工程研究, 2022(18)
- [2]不同途径应用氨甲环酸在多节段腰椎减压融合术中的疗效分析[D]. 王磊. 山东大学, 2019(03)
- [3]冠心病合并肺动脉高压的凝血功能研究[D]. 卞丛燕. 苏州大学, 2019(03)
- [4]钛种植体表面多功能生物活性涂层的构建及其促进骨整合机制的研究[D]. 白龙. 太原理工大学, 2018(08)
- [5]血栓弹力图在神外手术患者及肝病患者凝血功能检测中的应用[D]. 张艳红. 南方医科大学, 2018(01)
- [6]血栓弹力图形与凝血过程的研究[D]. 牟琼瑶. 重庆理工大学, 2018(12)
- [7]中介蝮蛇毒中Intobin1和Intobin2基因Kex2位点突变体在毕赤酵母中的表达及生物活性研究[D]. 郭积芳. 陕西师范大学, 2015(04)
- [8]冷沉淀的制备与临床应用[J]. 侯满意,朱金女,熊少欢. 现代医院, 2015(04)
- [9]尖吻蝮蛇中一种新的丝氨酸蛋白酶的纯化、性能及ACF II降血压机理的研究[D]. 王莎莎. 中国科学技术大学, 2014(10)
- [10]人纤维蛋白原分离纯化工艺研究[D]. 李斌. 山东大学, 2013(05)