一、肝素防治局灶节段性肾小球硬化的实验研究（论文文献综述）
孙倩,李姗姗,杨少宁,于小勇[1]（2021）在《中医药调控Notch信号通路防治肾脏疾病研究进展》文中研究表明肾脏疾病是临床常见病、多发病,是指各种原因导致的肾脏结构和功能的破坏,可分为原发性、继发性及遗传性肾脏疾病。临床上,肾脏结构和功能的损害通常是一个慢性进展性过程,其导致的慢性肾脏病已成为全世界危害人类健康的重大公共卫生问题。Notch信号通路可影响细胞的增殖、分化、迁移、生长和凋亡等过程,决定细胞的命运,Notch的异常表达或基因突变会引起组织损伤导致各种肾脏疾病的发生和发展。中医药作为防治肾脏疾病的重要手段,具有多种成分作用于多个靶点和多条信号通路的特点,常被用作慢性肾脏病治疗的常规或潜在的补充疗法和丰富的新药发现来源。近年来,因西医治疗对肾脏疾病的局限性,越来越多的学者开始在中医药防治肾脏疾病领域中以Notch信号通路为切入点,进行对各种单味中药或其提取物、中成药及中药复方调控Notch信号通路的临床和实验性研究,并观测到中医药通过抑制Notch信号通路而发挥肾脏保护作用。文章通过收集中医药防治各种肾脏疾病的相关文献,重点对通过调控Notch信号通路发挥防治糖尿病肾病,免疫球蛋白A（IgA）肾病,肾纤维化,膜性肾病,局灶节段性肾小球硬化,肾细胞癌等慢性肾脏病作用的研究文献进行梳理,分析并总结目前研究现状,以期为临床防治各种肾脏疾病提供参考意见,同时为中医药的普遍运用增加事实依据。
毛竞宇,刘昊,檀金川[2]（2021）在《檀金川教授治疗局灶节段性肾小球硬化经验》文中研究表明介绍檀金川教授治疗局灶节段性肾小球硬化的诊疗经验,檀教授认为治疗该病应将中医理论与微观表现相结合,针对微观,分型论治,同时配合激素、免疫抑制剂及其他西药的应用,达到优势互补、标本兼治的作用,此外要注意预防感染、规律停药、合理饮食、避免劳累等以防止其复发,并附典型病案1例,以供参考。
付艺[3]（2020）在《JAML在糖尿病肾病足细胞脂质代谢稳态失衡中的作用及机制》文中研究说明足细胞是一种高度分化的肾小球上皮细胞,是维持肾小球滤过屏障结构和功能正常的重要组成部分。足细胞损伤是导致糖尿病肾病（diabetic kidney disease,DKD）、局灶性节段性肾小球硬化症（focal segmental glomurular sclerosis,FSGS）、膜性肾病（membranousnephropathy,MN）和微小病变肾病（Minimal-changedisease,MCD）等肾小球疾病的重要原因。尽管目前对于足细胞损伤的机制研究取得了一定的进展,但在临床治疗中仍然缺乏特异性的有效策略。越来越多的研究表明,肾脏足细胞区域内脂代谢稳态失衡是导致糖尿病肾病等肾小球疾病发生发展的主要机制,并已成为目前本领域的研究热点。JAML（junctional adhesion molecule-like protein,Amical,连接粘附分子样蛋白）是JAMs家族中新发现的一个成员,属于分泌性的I型跨膜糖蛋白。以往研究表明JAML主要分布于各种固有免疫和适应性免疫细胞中,在免疫、炎症和组织稳态中发挥重要作用。近期发现,它在内皮细胞和上皮细胞中也有表达,当细胞受损伤刺激后,JAML的表达水平可明显上调。本研究我们首次发现了JAML可介导足细胞的脂质代谢稳态调控。发现在DKD和其他肾小球疾病患者肾脏中JAML的表达显着升高,并与脂质过度沉积和肾小球滤过率降低有关。进一步实验发现,足细胞特异性敲除JAML可以明显改善DKD和阿霉素诱导的FSGS小鼠的足细胞损伤和脂代谢紊乱。在机制上,JAML通过调控Sirtl/AMPK信号通路,调节转录因子SREBP1及其下游与脂肪酸、胆固醇合成相关的靶基因,从而调控足细胞的脂质代谢。本研究进一步发展和充实了对JAML生物学功能的新认识,并为DKD等肾小球疾病的防治提供了新的靶点和思路,具有重要的理论意义和潜在的应用价值。研究目的（1）探究新型连接粘附分子样蛋白JAML在糖尿病肾病等肾小球疾病中的表达情况。（2）阐明JAML在糖尿病肾病肾小球损伤及足细胞脂质代谢紊乱中的作用。（3）探讨JAML在糖尿病肾病足细胞脂代谢紊乱中的作用机制,为阐明DKD足细胞损伤的信号转导机制增加新的研究基础,并为临床探索有效延缓DKD进展的干预策略提供新的思路。研究方法第一部分:JAML在糖尿病肾病中的表达模式1.1检测临床病人血清和肾组织标本中JAML的表达情况（1）收集DKD患者（病理学分型Ⅱ型～Ⅳ型）及其他伴有蛋白尿的肾小球疾病包括FSGS、MCD及MN患者的血清和肾穿刺活检标本的病理切片。（2）记录患者的血肌酐（SCr）、估算的肾小球滤过率（eGFR）和24小时尿蛋白定量等临床化验指标。（3）酶联免疫法（ELISA）检测患者血清中JAML的水平。（4）免疫组化染色检测JAML在肾脏中的分布和表达变化。（5）分析DKD患者不同病理学分型（病理损伤严重程度不同）JAML的表达水平与损伤严重程度的关系;分析肾脏中JAML表达水平与SCr,eGFR和24小时尿蛋白定量的相关性。1.2糖尿病肾病动物模型中JAML表达变化（1）构建DKD动物模型:①自发性2型糖尿病db/db（BKS）小鼠模型:杂合子BKS db小鼠（db/m小鼠）进行自交可获得纯合子小鼠（db/db小鼠）,以db/m小鼠作为阴性对照。20周雄性小鼠留取血清及肾脏标本。②低浓度STZ联合HFD制备小鼠模型:6周龄健康雄性C57BL/6J小鼠给予“高脂饮食”（high fat diet,HFD）4周,单肾摘除后1周后连续3天小鼠腹腔注射低剂量链脲佐菌素（STZ,50mg/kg）,继续高脂饮食喂养约12周留取肾脏标本。（2）ELISA法检测小鼠血清中JAML的水平。（3）检测肾脏中JAML的表达与定位情况:①RT-qPCR和Western blot检测肾皮质中JAML的mRNA和蛋白表达水平。②免疫组化染色检测JAML在肾脏中的分布和表达变化。③JAML和足细胞标志蛋白Synaptopodin免疫荧光双标,激光共聚焦技术观察肾小球中JAML的细胞定位和表达变化。1.3体外模拟糖尿病肾病条件检测足细胞中JAML的表达变化（1）体外模拟DKD条件建立细胞损伤模型:分别采用高糖（highglucose,HG）、糖基化终末产物（advanced glycation end products,AGEs）、棕榈酸（palmitic acid,PA）、胆固醇（cholesterol）、氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein,ox-LDL）以及 DKD 患者血清处理足细胞（mouse podocyte,MPC）,Western blot检测JAML蛋白水平变化。（2）给予HG及PA处理肾脏其他固有细胞包括肾小球内皮细胞（glomerular endothelial cell,GECs）、系膜细胞（ratmesangial cell,RMCs）及肾小管上皮细胞（human kidney 2,HK-2）,Western blot 实验检测 JAML 蛋白水平变化。1.4局灶性节段性肾小球硬化模型中JAML的表达变化（1）动物模型构建:为了验证JAML在足细胞中的作用是否具有广泛意义,给小鼠尾静脉注射阿霉素（adriamycin,ADR）（12 mg/kg）构建FSGS模型,于第5、10周取材。（2）Western blot和免疫组化染色验证JAML表达情况。（3）体外用 ADR（0.15μg/ml）刺激足细胞 24h,Western blot 及 RT-qPCR 检测JAML表达变化。第二部分:JAML在糖尿病肾病足细胞损伤中的作用2.1构建JAML足细胞特异性敲除小鼠的DKD模型（1）动物模型构建:采用Cre-Loxp重组系统制备Jaml-loxp（Jamlflox/+）小鼠,并与足细胞-Cre（Podocin-Cre）小鼠进行杂交,获得足细胞特异性JAML敲除 Podocin-Cre+/Jamlfl/fl简写为 Cre+/Jamlfl/fl)小鼠。构建 STZ/HFD 诱导的Cre+/Jamlfl/fl小鼠DKD模型。另外,将Cre+/Jamlfl/fl小鼠与db/m小鼠进行杂交,最终获得足细胞特异性JAML基因敲除db/db（db/db//Cre+/Jamlfl/fl）小鼠。（2）提取鼠尾DNA鉴定小鼠基因型（3）验证JAML在足细胞中的敲除效率:①JAML与Synaptopodin免疫荧光共定位;②用免疫磁珠法分离肾小球,Western blot检测Cre+/Jamlfl/fl及其对照组小鼠肾小球中JAML蛋白水平。2.2足细胞JAML缺失可减轻糖尿病肾病肾脏损伤2.2.1足细胞特异性敲除JAML可改善糖尿病肾病足细胞损伤、减轻蛋白尿（1）检测肾大体形态、血生化和肾功能等基本指标包括体重、肾重、血压、心率、尿白蛋白/肌酐比、空腹血糖、血脂等。（2）过碘酸雪夫氏染色（PAS）染色检测肾小球形态变化和硬化程度。（3）应用透射电镜观察足突数量、足突融合、基底膜厚度等。（4）免疫荧光染色足细胞损伤后的标志性分子包括肾小球足细胞裂孔隔膜蛋白Podocin和Nephrin。2.2.2足细胞特异性敲除JAML可减轻肾小球炎症反应分离STZ/HFD诱导的DKD及对照组小鼠肾小球,通过RT-qPCR检测肾小球中的炎症因子白介素-6（IL-6）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达变化。2.2.3足细胞中JAML基因沉默可改善高糖诱导的足细胞损伤利用慢病毒转染技术沉默足细胞中的JAML。（1）Western blot实验验证JAML沉默效率。（2）采用高糖（40mmol/L）刺激足细胞24h,RT-qPCR检测炎症因子变化。（3）流式细胞术检测足细胞死亡情况。（4）F-actin荧光染色激光共聚焦观察足细胞骨架重排。2.3足细胞JAML缺失可以减轻糖尿病肾病肾小球及足细胞内的脂质沉积2.3.1足细胞特异性敲除JAML可改善糖尿病肾病小鼠肾小球及足细胞内的脂质沉积。（1）肾脏组织冰冻切片进行油红O染色,检测两种模型小鼠肾小球的中性脂质沉积。（2）利用免疫荧光双标技术,synaptopodin标记足细胞、adipophilin标记脂滴,激光共聚焦观察肾脏足细胞中脂滴的沉积。2.3.2 JAML基因沉默可改善高糖诱导的足细胞脂质沉积利用慢病毒转染技术沉默足细胞中的JAML。（1）足细胞给予高糖（40mmol/L）刺激24h,以油红O染色和Nile Red荧光染色检测足细胞内的脂滴形成。（2）利用超高效液相色谱串联质谱（UPLC-MS/MS）技术进行足细胞脂质组学定量分析。2.3.3肾小球疾病患者肾活检样本中JAML与脂滴蓄积程度的相关性分析有研究表明,DKD、FSGS、MCD和MN的发病机制都与脂代谢紊乱密切相关。应用DKD、FSGS、MCD和MN患者肾活检样本的病理切片进行脂滴相关蛋白Adipophilin的免疫组化染色,分析肾脏中JAML表达水平与脂滴蓄积程度的相关性。2.4 JAML在局灶性节段性肾小球硬化足细胞脂代谢紊乱中的作用（1）采用Cre+/Jaml+/+和Cre+/Jamlfl/fl小鼠构建ADR模型,检测尿白蛋白肌酐比,PAS染色及TEM检测动物模型中肾脏形态学变化。（2）体外实验中,用ADR（0.15μg/ml）刺激足细胞24h,油红O染色检测足细胞中脂质沉积及基因沉默JAML对脂质沉积的影响。第三部分JAML在糖尿病肾病足细胞脂代谢稳态失衡中的作用机制3.1足细胞内JAML调控Sirt1的表达变化考虑到sirtuins是调节代谢、维持脂质和葡萄糖稳态的“主开关”,我们进一步检测了 sirtuins家族在DKD小鼠及足细胞中的表达变化,以及是否受JAML的调控。（1）Western blot检测SIRTs家族各亚型（Sirt1-7）在肾皮质中的蛋白水平变化。（2）免疫荧光双标SIRT1与足细胞标志蛋白Synaptopodin观察肾小球足细胞中SIRT1的表达变化。（3）体外实验中,用高糖（40mmol/L）刺激足细胞24h,Western blot检测Sirtl蛋白表达变化。同时,利用慢病毒转染过表达JAML检测Sirt1蛋白水平。3.2 JAML通过Sirt1调控AMPK的磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）是Sirt1信号通路重要的代谢整合因子,在细胞代谢和线粒体功能的调节和Sirt1有相似之处,所以我们进一步检测了 AMPK的活性。（1）Western blot检测肾皮质中p-AMPKα和AMPKα蛋白变化,验证JAML对AMPK磷酸化的调控。（2）利用JAML shRNA慢病毒转染足细胞沉默JAML,并同时转染Sirtl的小干扰RNA沉默Sirt1基因,检测高糖处理的足细胞中AMPK磷酸化的变化。3.3 JAML-Sirt1信号通路调控转录因子SREBP1及其下游靶基因的表达3.3.1利用转录组测序技术分析JAML下游信号通路安捷伦全基因组寡核苷酸测序用于分析组间差异表达基因,检测JAML基因沉默对高糖诱导的足细胞内下游基因的影响。3.3.2 JAML调控SREBP1及其下游信号通路（1）RT-qPCR验证足细胞中Srebp1,Srebp2及其下游靶基因如脂肪酸合成相关基因（Fasn,Acaca,Scd1）,胆固醇合成相关基因（Sqle）的mRNA水平变化。（2）Western blot 检测肾皮质 mSREBP1,FASN,ACC1,SCD1,SQLE 的蛋白表达。（3）RT-qPCR验证肾小球中Srebp1,Srebp2的mRNA水平。（4）Western blot检测肾小球中成熟体mSREBP1的蛋白表达变化。3.4 JAML-Sirt1-AMPK信号通路调控SREBP1的表达为了明确JAML是否通过Sirt1、AMPK调控SREBP1的表达,我们同时沉默足细胞中的JAML和Sirt1或者AMPK,给予高糖刺激后,Western blot检测成熟体mSREBP1的表达变化。3.5阿霉素诱导的足细胞损伤模型中JAML对Sirt1-AMPK-SREBP1信号通路的作用。慢病毒转染JAML shRNA的足细胞系,用ADR（0.15μg/ml）处理,,Western blot检测Sirt1、p-AMPKα及mSREBP1的表达变化。研究结果第一部分:JAML在糖尿病肾病中的表达模式1.1临床病人血清和肾组织标本检测JAML的表达情况（1）ELISA检测发现与健康受试者血清样本相比,DKD患者血清中JAML水平显着升高。（2）肾活检样本免疫组织化学结果显示,DKD、FSGS、MN和MCD患者的肾小球中JAML表达显着增加。（3）DKD患者肾小球中JAML表达水平与肾脏损伤严重程度呈正相关（4）在所有伴有蛋白尿的肾小球疾病患者的肾小球中JAML表达与血肌酐呈正相关,与eGFR呈负相关,而与24小时尿蛋白无相关性。1.2糖尿病肾病动物模型中JAML的表达变化（1）ELISA结果显示,db/db小鼠和STZ/HFD诱导的DKD小鼠血清中JAML含量显着升高。（2）Western blot、RT-qPCR及免疫组化结果显示,db/db小鼠和STZ/HFD诱导的DKD小鼠肾皮质中JAML的mRNA水平及蛋白表达均显着增多,且主要集中在肾小球。（3）JAML与Synaptopodin免疫荧光共定位结果显示,db/db小鼠足细胞中JAML表达显着升高。1.3体外模拟糖尿病肾病条件检测足细胞中JAML的表达变化HG、AGE、PA、胆固醇、ox-LDL以及DKD患者血清均可诱导足细胞内JAML的表达显着升高。然而,用HG刺激肾小球内皮细胞和系膜细胞,JAML未发生明显变化。1.4局灶性节段性肾小球硬化模型中JAML的表达变化（1）Western blot及免疫组化结果显示,ADR模型第5周JAML变化不显着,而第10周表达显着增加。（2）ADR刺激足细胞,JAML mRNA及蛋白表达均升高。第二部分:JAML在糖尿病肾病足细胞损伤中的作用2.1构建JAML足细胞特异性敲除小鼠的DKD模型（1）提取鼠尾DNA鉴定小鼠基因型,结果显示,Cre+/Jamlfl/fl即为足细胞Cre阳性且具有纯合Loxp-JAML小鼠,理论上可实现足细胞中特异性敲除JAML。（2）JAML与Synaptopodin免疫荧光双标共定位,发现足细胞中JAML表达水平显着降低。（3）免疫磁珠法分离肾小球,光学显微镜下观察具有代表性的肾小球样品纯度大于98%,肾小球样品纯度高且未被肾小管碎片污染。Western blot检测结果显示,Cre+/Jamlfl/fl小鼠肾小球中JAML蛋白表达降低,进一步证实JAML足细胞特异性敲除小鼠构建成功。2.2足细胞JAML缺失可减轻糖尿病肾病肾脏损伤2.2.1足细胞特异性敲除JAML可改善糖尿病肾病足细胞损伤、减轻蛋白尿（1）与正常对照组小鼠相比,STZ/HFD模型小鼠血糖、甘油三酯、胆固醇、高密度脂蛋白显着升高,体重降低,肾重体重比增加,而心率、血压未出现显着变化。JAML足细胞特异性敲除小鼠血压、心率未出现显着变化。STZ/HFD诱导的Cre+/Jamlfl/fl小鼠的尿白蛋白排泄明显减轻。（2）在2型DKD模型中,与db/+小鼠相比,db/db小鼠血糖、甘油三酯、胆固醇、高密度脂蛋白以及低密度脂蛋白显着升高,体重显着增加,而心率、血压无显着变化。而JAML足细胞特异性敲除的db/db小鼠以上生理生化指标无显着差异。从12周龄开始,db/db//Cre+/Jamlfl/fl小鼠尿蛋白显着降低,杂合基因型db/db//Cre +/Jamlfl/+小鼠尿蛋白也有所缓解。（3）DKD小鼠形态学实验显示,Cre+/Jamlfl/fl模型小鼠显着缓解肾小球系膜基质增生,基底膜增厚、足突数量减少及足突宽度增加,而杂合基因型db/db//Cre+/Jamlfl/+小鼠肾脏损伤也部分改善。（4）JAML足细胞特异性敲除小鼠显着恢复Nephrin和Podocin表达,杂合基因型小鼠db/db//Cre+/Jamlfl/+也能够部分改善Nephrin和Podocin损伤。2.2.2足细胞特异性敲除JAML可减轻肾小球炎症反应RT-qPCR检测结果表明,足细胞特异性敲除JAML可抑制STZ/HFD诱导的DKD小鼠肾小球中炎症因子IL-6、ICAM-1、MCP-1、TNF-α的表达升高。2.2.3足细胞中JAML基因沉默可改善高糖诱导的足细胞损伤JAML基因沉默明显减轻HG诱导的足细胞中炎症因子IL-6、ICAM-1、MCP-1、TNF-α的表达;减轻足细胞死亡和改善足细胞骨架重排。2.3足细胞JAML缺失可以减轻糖尿病肾病肾小球及足细胞内的脂质沉积2.3.1足细胞特异性敲除JAML可改善糖尿病肾病小鼠肾小球及足细胞内的脂质沉积。（1）油红O染色结果显示,足细胞特异性敲除JAML可减轻DKD小鼠肾小球中脂质沉积。（2）免疫荧光标记Adipophilin和Synaptopodin,结果表明,足细胞特异性敲除JAML可显着减少DKD小鼠的足细胞内脂质沉积。2.3.2 JAML基因沉默可改善高糖诱导的足细胞脂质沉积（1）油红O染色和Nile Red荧光染色结果显示,HG可诱导足细胞中性脂质和脂滴增加,而JAML基因沉默可减少HG刺激下足细胞中脂质沉积。（2）脂质组学定量分析结果表明,JAML基因沉默能够降低HG诱导的足细胞内胆固醇酯（CE）、游离脂肪酸（FFA）、神经酰胺,磷脂酰乙醇胺（PE）,磷脂酰胆碱（PC）和鞘磷脂（SM）的水平。2.3.3肾小球疾病患者肾活检样本中JAML与脂滴蓄积程度的相关性分析免疫组化检测结果表明,在DKD、FSGS、MN和MCD患者肾小球中,Adipophilin的表达与JAML表达水平呈正相关。2.4 JAML在局灶性节段性肾小球硬化足细胞脂代谢紊乱中的作用（1）足细胞特异性JAML敲除能够减轻ADR模型小鼠的蛋白尿;PAS染色及TEM结果显示,足细胞特异性JAML敲除小鼠可减轻ADR诱导的肾脏损伤。（2）体外油红O染色结果显示,基因沉默JAML可以减少ADR诱导的足细胞中脂质沉积。第三部分JAML在糖尿病肾病足细胞脂代谢稳态失衡中的作用机制3.1足细胞内JAML调控Sirt1的表达变化（1）Western blot 结果显示,Sirt1、Sirt3、Sirt6 和 Sirt7 在 Cre+/Jaml+/+DKD小鼠肾皮质中显着降低,而Cre+/Jamlfl/fl小鼠中Sirt1的表达可明显恢复,Sirt7的表达也有部分恢复。（2）Sirt1和Synaptopodin的免疫荧光双标结果显示,STZ/HFD模型小鼠足细胞中Sirt1表达显着降低,而Cre+/Jamlfl/fl小鼠Sirt1表达明显恢复。（3）Western blot实验结果显示,足细胞中沉默JAML可恢复HG诱导的Sirt1蛋白水平降低;足细胞中过表达JAML,可抑制Sirt1的蛋白水平。3.2 JAML通过Sirt1调控AMPK的磷酸化（1）DKD小鼠模型的肾小球中p-AMPKα水平降低,而Cre+/Jamlfl/flDKD小鼠肾小球中p-AMPKα水平恢复。（2）Western blot实验验证Sirt1沉默效率,结果显示Sirt1沉默效果显着。进一步实验同时沉默JAML和Sirt1,发现HG和Sirt1基因沉默都能诱导AMPKα活性降低,而JAML沉默能够显着恢复p-AMPKα水平。3.3 JAML-Sirt1信号通路调控转录因子SREBP1及其下游靶基因的表达3.3.1利用转录组测序技术分析JAML下游信号通路通过分析转录组测序结果,我们发现足细胞内JAML的缺失可显着抑制HG诱导的转录因子Srebp1及其调控靶基因（Fasn、Acaca、Scd1和Sqle）的水平升高。3.3.2 JAML调控SREBP1及其下游信号通路（1）RT-qPCR及Western blot检测结果表明,足细胞中沉默JAML可显着降低HG诱导的Srebp1及其下游Fasn、Acaca、Scd1 和Sqle脂肪酸和胆固醇合成基因的mRNA和蛋白表达,而Srebp2虽然在HG条件下表达升高,但JAML基因沉默对其无明显作用。（2）DKD小鼠模型的肾小球中Srebp1和Srebp2的mRNA和蛋白水平均明显升高,足细胞特异性敲除JAML可抑制DKD小鼠肾小球中Srebp1的表达。3.4JAML-Sirt1-AMPK信号通路调控SREBP1的表达Western blot检测结果显示,HG处理的足细胞中沉默Sirt1或者AMPK均可抵消JAML基因缺失所引起的SREBP1表达的降低。说明JAML通过Sirt1和AMPK调控mSREBP1蛋白水平。3.5阿霉素诱导的足细胞损伤模型中JAML对Sirt1-AMPK-SREBP1信号通路的作用。Western blot实验结果显示,JAML基因沉默可恢复ADR诱导的Sirt1和p-AMPKα蛋白水平的降低,同时抑制ADR诱导的mSREBP1表达水平的升高。结论及创新性1.JAML在足细胞损伤肾病患者血清及肾脏中显着升高,相关性分析发现JAML蛋白水平与患者血肌酐呈正相关,和eGFR呈负相关。2.特异性敲除足细胞内的JAML显着抑制DKD小鼠足细胞损伤及蛋白尿生成,进一步发现基因沉默JAML可以抑制高糖诱导的足细胞脂质代谢紊乱。3.本实课题首次发现JAML通过调控Sirt1/AMPK/SREBP1信号通路作用于DKD足细胞脂代谢紊乱,为DKD的防治提供了新的治疗靶点与实验基础。4.JAML在足细胞损伤中的作用可能具有广泛意义。我们发现在阿霉素诱导的FSGS模型中,JAML在足细胞中表达升高,足细胞特异性敲除JAML可减轻足细胞损伤及脂代谢紊乱,可能也通过调节Sirt1/AMPK/SREBP1信号通路发挥作用。
秦田雨[4]（2020）在《肾康注射液对慢性肾脏病和肾纤维化的作用及机制研究》文中提出[目的]从整体动物、细胞和分子水平,结合系统药理学靶点预测,研究中药复方肾康注射液（Shenkang,SK）对慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）和肾纤维化的保护作用和机制,为SK对CKD及肾纤维化的临床治疗提供更多的数据支持及科学依据。[方法]1.系统药理学:首先通过数据挖掘和文献查阅构建SK分子数据库,并通过药物相似性和药物半衰期评估来筛选活性分子;使用WES药物靶向模型来预测生物活性成分的直接药物靶向;使用Cytoscape 3.2软件构建复合物-靶标,靶标-通路和靶标-疾病网络,并根据BioGPS数据库确定靶标在组织和器官中的分布。2.整体动物:C57BL/6小鼠36只,采用随机对照设计法将小鼠按体重随机分为:假手术组,模型组,阳性药（ARB）组,SK高剂量组,SK中剂量组,SK低剂量组（n=6）。对模型组、ARB组、SK各剂量组小鼠实施UUO手术,制备肾纤维化模型,假手术组分离左输尿管但不结扎输尿管。术后第一天开始给药,共计14天。假手术组和模型组:尾静脉注射生理盐水0.13 mL/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,ARB组:尾静脉注射生理盐水0.13 mL/10g,灌胃氯沙坦钾溶液0.15 mL（生药0.13 g）/10 g,SK高剂量组:尾静脉注射SK 0.13 mL（生药0.08 g）/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,SK中剂量组:尾静脉注射SK 0.13 mL（生药0.04 g）/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,SK低剂量组:尾静脉注射SK 0.13 mL（生药0.02 g）/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,实验过程中观察记录小鼠体重等一般情况,给药第13天行MRI扫描测定FA值明确活体肾纤维化程度,给药14天后摘眼球取血,称量肾脏重量,分别冻存固定肾脏。比色法测定血肌酐、血尿素氮、血CysC水平,行HE和天狼星红染色观察患侧肾脏病理形态学和纤维化程度,透射电镜观察超微结构情况,Western Blot检测各组小鼠肾脏肌成纤维细胞标志物α-SMA,ECM成分Col Ⅰ,JAK2/STAT3通路分子蛋白磷酸化水平,Real-time PCR检测假手术组、UUO组和SK中剂量组肾脏肌成纤维细胞标志物α-SMA,FSP-1、ECM成分(Col Ⅲ,JAK2、STAT3、TGF-β1和负调节分子SOCS1,SOCS3 mRNA水平。3.细胞:NRK-49F细胞进行复苏传代培养,以10 ng/mL 的TGF-β1刺激48 h诱导NRK-49F细胞增殖活化,不同浓度SK（0,1,2,4mg/mL）干预后,观察细胞形态、Western Blot检测NRK-49F细胞成纤维细胞标志物α-SMA,ECM成分Col Ⅲ,JAK2/STAT3通路分子蛋白磷酸化水平和负调节分子Prdx5的表达,Real-time PCR检测NRK-49F细胞肌成纤维细胞标志物α-SMA,JAK2、STAT3 mRNA 水平。[结果]1.系统药理学部分:以DL≥0.6为筛选标准,“HL=long”用于定义适当的HL范围。最终选出88种化合物作为活性分子。利用WES算法和CTD、TTD筛选结果,确定了 85个与治疗CKD相关的潜在化合物作用靶点,包括STAT3。通过KEGG数据库映射获得关键通路,包括NF-κB、MAPK、TRP离子通道和VEGF通路,结合CKD病理机制的相关进展,构建了 CKD治疗模块的通路,包括炎症、增殖、分化、迁移、通透性、降解等模块。对靶标-疾病相互作用网络的深入分析表明,SK治疗CKD主要通过影响6种疾病发挥作用:泌尿生殖系统疾病、代谢性疾病、内分泌疾病、心血管疾病,病理过程和免疫疾病。组织定位结果显示SK通过包括肾脏、肝脏、肺和心脏在内的组织模块发挥作用。2.整体动物部分:（1）肾功能检测:与假手术组比较,UUO组小鼠肾脏血CREA、BUN、Cys-C水平显着性升高（p<0.01）;与UUO组相比,ARB和高剂量SK组小鼠血CREA水平显着降低（p<0.01）;与UUO组相比,ARB和SK各剂量组小鼠血BUN水平显着降低（p<0.05或p<0.01）;与UUO组相比,SK高剂量组小鼠血Cys-C水平显着降低（p<0.05）。（2）肾脏重量和病理检测:与假手术组相比,UUO模型组的患侧肾质量/体重、患侧肾/对侧肾质量、对侧肾质量/体重均显着增加（p<0.05或p<0.01）。但各药物治疗后对UUO小鼠肾脏重量各指标没有产生影响。与假手术组比较,UUO组小鼠肾脏FA值显着性升高（p<0.01）;与UUO组相比,ARB阳性药组、SK高中低剂量组FA值显着降低（p<0.01或p<0.001）,其中以SK中剂量组最为显着（p<0.001）。与假手术组比较,UUO组小鼠肾脏病理损伤明显;与UUO组比较,各治疗组肾脏损伤情况均有不同程度缓解,细胞外基质积聚、炎性细胞浸润、肾小管扩张和/或萎缩减轻,以SK中剂量组和高剂量组较好。与假手术组比较,UUO组小鼠天狼星红面积极显着增加（p<0.001）;与UUO组比较,ARB组、SK高、中、低剂量组小鼠患侧肾脏天狼星红染色红色面积显着减少（p<0.05或p<0.01）。电镜下观察各浓度SK对UUO所致的细胞器丰富的成纤维细胞增多,间质局灶胶原纤维增生和肾小管凋亡均有一定的改善作用。（3）Western blot检测:与假手术组相比,UUO组α-SMA蛋白水平显着增加（p<0.01）,与UUO比较,SK中剂量组和低剂量组显着下调了 UUO状态下的α-SMA蛋白水平升高（p<0.05）;与假手术组相比,UUO组Col Ⅰ蛋白水平显着增加（p<0.01）,与UUO 比较,SK中剂量组显着下调了 Col Ⅰ蛋白水平升高（p<0.05）;与假手术组相比,UUO组p-STAT3（Try705位点）/STAT3比例显着增加（p<0.01）,与UUO比较,SK中（p<0.01）、低剂量（p<0.001）组显着下调了 Try705位点的STAT3磷酸化程度;与假手术组相比,UUO组p-JAK2（Try1007位点）/JAK2比例有上升趋势,但无统计学差异,与UUO 比较,SK高剂量组显着下调了 Try1007位点的JAK2磷酸化程度（p<0.05）,（4）PCR检测:与假手术组相比,UUO组小鼠患侧ECM成分Col Ⅰ、Col Ⅲ、FN,成纤维细胞活化标志物α-SMA、FSP-1,以及 JAK2、STAT3、TGF-β、JAK2/STAT3 通路负调节因子SOCS1、SOCS3 mRNA水平显着上升（p<0.05或p<0.01或p<0.001）;与UUO组相比,SK中剂量组显着降低了 Col Ⅰ、ColⅢ、FN,α-SMA、FSP-1,JAK2、TGF-β、SOCS1、SOCS3 mRNA 水平（p<0.05 或p<0.01）。3.细胞实验:TGF-β1诱导后,NRK-49F细胞的细胞骨架显示出内部微丝束,并逐渐增厚和伸长,丧失纺锤形或星形成纤维细胞外观。不同浓度的SK一定程度上逆转了TGF-β1诱导的形态变化和增殖。与空白对照组比较,模型对照组成纤维细胞p-STAT3（Try705位点）/STAT3、Prdx5蛋白水平显着性升高（p<0.05）,p-JAK2（Try1007位点）/JAK2有一定程度升高但未达统计学意义（p>0.05）;与模型对照组相比,4 mg/mL SK组和2 mg/mL SK组细胞的STAT3蛋白Try705位点的磷酸化水平显着降低（p<0.05）,1 mg/mL SK组和2 mg/mL SK组细胞的JAK2蛋白Try1007位点的磷酸化水平显着降低（p<0.05）,4 mg/mL SK组细胞的Prdx5蛋白表达水平显着降低（p<0.05）。与空白对照组比较,模型对照组成纤维细胞α-SMA、JAK2、STAT3 mRNA水平显着升高（p<0.05或p<0.001）;与模型对照组相比,ARB及不同浓度SK均极显着地降低了α-SMA mRNA 水平（p<0.001）,与模型对照组相比,ARB、1mg/mL、2 mg/mL SK（p<0.05）及 4 mg/mL SK（p<0.01）显着降低了 STAT3 mRNA 水平,与模型对照组相比,ARB及4 mg/mL SK显着降低了 JAK2 mRNA水平（p<0.05）。[结论]（1）系统药理学预测显示SK中多种化合物可能通过作用于与炎症、凋亡、增殖等相关的NF-κB、MAPK、TRP离子通道和VEGF等多通路的靶点分子治疗CKD。（2）SK有效改善UUO小鼠肾功能指标和肾间质纤维化,其机制可能是通过调节JAK2/STAT3信号通路抑制成纤维细胞活化实现的,验证了系统药理学结果。（3）SK还能够抑制TGF-β1诱导NRK-49F增殖活化以及ECM产生,其作用机制可能是通过抑制JAK2/STAT3通路的激活介导的。
左沙沙[5]（2020）在《白头翁皂苷B4基于足细胞p53凋亡通路干预大鼠局灶节段性肾小球硬化的作用机制研究》文中提出目的:以白头翁皂苷B4为研究对象,通过建立体外阿霉素（ADR）诱导小鼠足细胞（MPC-5）凋亡模型观察白头翁皂苷B4抗足细胞凋亡作用及机制;建立体内阿霉素诱导大鼠局灶节段性肾小球硬化（FSGS）模型,观察白头翁皂苷B4对FSGS的干预作用,明确白头翁皂苷B4干预FSGS是否与白头翁皂苷B4抗足细胞凋亡有关。方法:1.采用阿霉素诱导建立足细胞凋亡模型,CCK-8法检测细胞活性;采用荧光定量PCR检测足细胞相关蛋白nephrin和podocin的表达水平;采用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法检测足细胞p53、Bcl-2、Bax及Caspase-3 m RNA和蛋白的表达水平。2.采用单侧肾摘除联合分两次尾静脉注射剂量为2.5mg·kg-1的阿霉素诱导建立FSGS模型。造模2周后,白头翁皂苷B4连续给药干预6周,每周测定血清尿素氮（BUN）、血肌酐（Cre）、血清总蛋白（TP）、血清白蛋白（ALB）、总胆固醇（TCHOL）、总甘油三酯（TG）,尿蛋白含量;糖原染色（PAS）检查肾脏病理学变化;马松染色（Masson）检测肾脏组织纤维化情况以及肾小球硬化程度;透视电镜检查足细胞超微结构变化。免疫组化检测肾脏固有细胞凋亡情况;Western Blot法检测肾脏组织中和尿液中足细胞相关蛋白nephrin和podocin的表达水平以及足细胞中p53、Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白的表达水平。结果:1.白头翁皂苷B4有保护足细胞的作用,能提高ADR诱导足细胞损伤中足细胞特异表达蛋白nephrin和podocin m RNA的表达水平;能显着下调足细胞中p53、Caspase-3 m RNA和蛋白的表达,上调Bcl-2/Bax m RNA和蛋白比值。2.白头翁皂苷B4在给药第3、4、5周时能明显升高血清中TP和ALB的含量;有降低BUN、Cre、TCHOL、TG含量的趋势;白头翁皂苷B4中剂量和高剂量在给药第2、3、4、5、6周能明显降低蛋白尿,低剂量在第3、4周明显降低蛋白尿;白头翁皂苷B4能明显减轻FSGS管型蛋白,减轻肾小管损伤等病变。肾小球局灶性、阶段性硬化也明显减轻;白头翁皂苷B4能明显改善足细胞超微结构变化,减少足细胞足突融合、减轻肾小球基底膜不规则增厚;提高FSGS大鼠肾脏足细胞nephrin、podocin和降低尿液中足细胞nephrin、podocin蛋白表达;白头翁皂苷B4能明显降低肾脏固有细胞Caspasse-3表达;白头翁皂苷B4能显着下调足细胞中p53、Caspase-3蛋白的表达,上调Bcl-2/Bax蛋白比值。结论:1.白头翁皂苷B4在一定剂量范围内对正常MPC-5细胞无毒性,对ADR诱导的凋亡MPC-5细胞有保护作用,其保护作用可能与下调p53、Caspase-3因子和升高Bcl-2/Bax比值有关。2.白头翁皂苷B4对ADR所致FSGS有干预作用。可通过降低BUN、Cre、TCHOL、TG和尿蛋白含量以及升高TP、ALB含量来改善肾功能,其保护FSGS的作用机制可能与降低肾组织p53、Caspase-3因子和升高Bcl-2/Bax比值,改善足细胞超微结构以及减轻肾脏固有细胞凋亡程度有关。
潘雅婧[6]（2020）在《肾康注射液调节UUO小鼠肾纤维化及HUVEC血管生成的机制研究》文中研究指明目的:以VEGF为切入点,在动物和细胞实验探讨肾康注射液对UUO小鼠肾纤维化和HUVEC血管生成的调控作用及作用机制。方法:1.动物实验:将雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组（sham）、单侧输尿管梗阻组（UUO）、氯沙坦钾组（ARB）及高、中、低剂量肾康组（SKI-H、SKI-M、SKI-L）。除sham组外的各组行UUO手术;次日ARB组予氯沙坦钾（13 mg/kg·d）灌胃;SK]-H、SKI-M、SKI-L 组分别予 7.8 g/kg·d、3.9 g/kg·d、1.95 g/kg·d SKI 尾静脉注射。观察小鼠一般状态、记录体重变化。给药14天后检测血Scr、BUN、CysC水平;micro-CT检测肾脏血管分布;HE染色观察肾组织形态改变;天狼星红染色观察胶原沉积;IHC染色观察VEGF、VEGFR-2表达。2.细胞实验:将HUVEC分为空白组（CON）、SKI高剂量组（SKI-11）、SKI-低剂量组（SKI-L）、VE GF 沉默组（Si）、VEGF 沉默-SKI 高剂量组（Si-SKI-H）、VEGF 沉默-SKI 低剂量组（Si-SKI-L）。SKI-H、SKI-L 组分别予 8 mg/ml、2 mg/ml SKI干预 24 h;Si组通过RNAi转染沉默VEGF基因;Si-SKI-H、Si-SKI-L组在转染同时分别予8 mg/ml、2 mg/ml SKI干预24 h。观察血管生成情况,计算血管生成参数;real-time PCR和western blot法分别检测VEGF通路重要靶点基因和蛋白表达。结果:1.动物实验:给药14天后UUO组体重较sham组减轻（P<0.01）;ARB、SKI-H、SKI-M组体重较UUO组增高（P<0.05）。UUO组Scr、BUN、CysC水平较sham组升高（P<0.05,P<0.01）;ARB、SKI-H 组 Scr、BUN、CysC 水平较 UUO 组降低（P<0.05,P<0.01）。肉眼观察sham组双肾无明显异常改变;UUO组患侧肾脏表面粗糙、膨大、积水,肾盂肾盏扩张,实质变薄;SKI组患肾结构破坏较UUO组减轻。micro-CT见sham组肾血管密集,走向清晰;UUO组患肾血管疏松,分支减少、曲度下降;SKI组患肾血管损伤较UUO组减轻。HE染色见sham组肾脏结构完整,无明显病理损害;UUO组肾小管扩张,上皮细胞肿胀坏死,间质增宽伴炎性浸润;SKI组肾脏损伤较UUO组减轻。天狼星红染色（光镜）见sham组肾脏几乎无红染胶原;UUO组肾间质大量红色胶原聚集;SKI组红染程度较UUO组减轻。偏振光镜荧光信号变化与普通光镜所见大体一致。IHC示UUO组患肾VEGF、VEGFR-2表达较sham组降低（P<0.01）;SKI 组 VEGF、VEGFR-2 表达较 UUO 组降低（P<0.01）。剂量方面,SKI 减轻肾脏纤维化损伤和促进血管生成,以中、高剂量效果更优。2.细胞实验:沉默VEGF 24 h后Si组VEGF基因表达较CON组显着降低（P<0.01）,阴性对照组与CON组VEGF无显着差异（P>0.05）,验证转染稳定可行。血管生成方面,SKI组血管连接较CON组增多、血管网密度增大,血管生成参数提高,SKI促进HUVEC血管生成（P<0.01,P<0.05）。基因表达方面,与CON组相比,SKI-H 组 VEGF、VEGFR-2、eNOS 水平升高（P<0.05,P<0.01）;与 Si 组相比,Si-SKI-H 和 Si-SKI-L 组 VEGF、eNOS 水平升高（P<0.05,P<O.01）,SKI 上调 VEGF 通路靶点基因,且该效应在VEGF沉默时更突出。蛋白表达方面,在正常培养及VEGF沉默状态,SKI 均提高 VEGFR-2、p-VEGFR-2、eNOS、p-eNOS 表达水平（P<0.05,P<0.01）。结论:1.肾康注射液可改善UUO小鼠肾功能,缓解肾纤维化病理改变,减轻纤维化损伤;可缓解肾脏微血管网损伤,上调VEGF、VEGFR-2表达,促进患侧肾脏血管生成。2.肾康注射液可促进HUVEC血管生成;可上调HUVEC的VEGF、VEGFR-2基因表达;可提高VEGFR-2、eNOS总蛋白水平及磷酸化蛋白水平。3.肾康注射液可能通过调节VEGF/VEGFR-2及下游eNOS来改善肾纤维化损伤和促进血管生成。
周燕琳[7]（2020）在《成人原发肾病综合征并发急性肾损伤危险因素分析及预测模型建立》文中研究指明目的:急性肾损伤为肾病综合征常发生的并发症,可影响患者预后。因此,本研究通过探讨成人原发肾病综合征患者继发急性肾损伤（AKI）的危险因素,并构建AKI发生的预测模型,对于临床早期发现肾病综合征继发AKI并及早防治,无疑具有重要的临床价值。方法:纳入符合标准的185例成人原发性肾病综合征患者作为研究对象,按照是否合并急性肾损伤分为AKI组（n=51）和非AKI组（n=134）。通过比较AKI组和非AKI组患者入院时的一般情况、合并疾病、用药情况、实验室指标、病理类型及特征等临床病理资料,再通过多因素logistics回归分析来评价患者发生AKI的独立风险因素,建立AKI发生的预测模型,并用ROC曲线下面积来评价模型的预测效能。结果:51例原发肾病综合征并发AKI的患者中,发生AKI的病理类型最多的依次为肾小球轻微病变（29.4%）,IgA肾病（25.5%）,膜性肾病（17.6%）,在肾脏病理中,AKI组出现肾小管蛋白管型、上皮细胞空泡变性显着高于对照组（P<0.05）。与女性相比,男性肾病综合征患者更易发生AKI（P=0.000）。与非AKI组比较,AKI组患者白蛋白水平更低,血尿酸、甘油三酯水平更高（均P<0.05）,随机尿蛋白定性（4+）出现比例更高（P=0.003）,且更易伴随多浆膜腔积液、少尿表现（P<0.05）,高血压及感染（P=0.035,P=0.000）。多因素logistics回归分析显示,入院时白蛋白（<25g/L）、血尿酸（≥400μmol/L）、肾脏病理伴肾小管蛋白管型、多浆膜腔积液表现、合并感染或糖尿病是影响AKI发生的独立危险因素,将上述指标纳入原发肾病综合征的预测模型,建立风险预测模型:P=1/(1+exp（-6.428+2.194X1+2.878X2+1.722X3+1.617X4+2.832X5+1.960X6）,联合预测因子的ROC曲线下面积为0.909,95%置信区间（0.867-0.952）,最佳临界值为0.697,此时其预测原发肾病综合征AKI发生的敏感性为0.780,特异性为0.917。结论:成人原发肾病综合征并发AKI与多种因素相关,其中入院时白蛋白<25g/L、血尿酸水平≥400μmol/L、多浆膜腔积液、感染、糖尿病、肾小管蛋白管型为其独立危险因素,以此为基础建立的logistics回归模型具有较高的灵敏度和特异性,对原发肾病综合征患者并发AKI发生风险的预测具有一定的临床价值。
王新斌[8]（2020）在《基于miRNA探讨右归丸对激素抵抗型肾病综合征大鼠的增敏作用及机制研究》文中研究表明研究背景与目的:激素抵抗型肾病综合征（SRNS）致病因素复杂,临床治疗较为棘手,疗效不尽如人意,随着病情的变化,常易发展为终末期肾病而危及患者的生命。足细胞损伤与慢性肾病发生、发展密切关联,足细胞相关蛋白、基因突变及表达异常是SRNS发生的关键环节。有研究表明,miRNA表达失调与肾病有关,成熟的Dicer酶可以通过一些非编码的微小RNA来介导调节SD分子的应答。故调控Dicer-miRNA通路,使SD分子的表达得以改善,减少蛋白尿。右归丸可通过减毒增敏来减缓SRNS肾病足细胞的损伤,发挥减少尿蛋白和保护肾脏的作用,其分子机制尚未完全阐明。方法:1.64只雄性SPF级Wistar大鼠适应性饲养1周,按体重随机分为空白组（Control,12只）和造模组（52只）。造模成功后随机分为模型组（Model）;泼尼松组（PAT）;泼尼松+右归丸高、中、低组（PAT+YGh、PAT+YGm、PAT+YGl）。一次性尾静脉注射阿霉素6mg/kg（10mg/支,用0.9%氯化钠溶液2ml稀释成浓度为5mg/ml）,同时给予臀部肌肉注射氢化可的松25mg/kg/d（50mg/支,用0.9%氯化钠2ml溶液稀释成浓度为25mg/ml）,2周,复制阿霉素肾病肾阳虚证模型。空白组大鼠左右后肢交替肌注等剂量生理盐水。2.各组大鼠成功造模2周后,固定时间灌胃,持续6周。分别于造模前、造模后14天、药物干预后14、28、42天代谢笼收集各实验大鼠24小时尿液标本,记录尿量。实验第55天晚上8点测定大鼠自主活动,开启自主活动仪测定5min的活动次数与抬头次数。第56天各组实验大鼠心脏采血,全自动生化分析仪检测血生化指标。3.实验第56天,局麻摘取双肾,将大鼠左侧肾脏切除取上下级分别加入4%戊二醛、4%多聚甲醛固定液固定组织,用于电镜、光镜、免疫荧光镜;右肾储存于-70oC冰箱,肾小球cRNA提取,用于基因芯片检测及RT-PCR相互验证。4.HE、PAS、PASM-Masson观察肾组织病理变化;免疫组化、western-blotting、real-time PCR等方法检测肾组织中dicer、nephrin、podocin、CD2AP、synaptopodin、Bax?Bcl-2?caspase-3蛋白及mRNA的表达。结果:1.大鼠一般状态造模后第7d大鼠腹腔中出现少量腹水,同时每日排出尿量减少,精神状态欠佳,食量减少,体重停止增长且下降。2周大鼠腹水明显增多,出现大量尿蛋白,且24h尿蛋白定量>100mg/kg,同时大鼠出现嗜睡、反应迟钝,有弓背耸肩现象,蜷卧少动,体毛发灰发暗,大便稀溏等中医阳虚体征。提示SRNS模型大鼠复制成功。2.血肌酐、血尿素氮、总蛋白、白蛋白、24h尿蛋白、血脂检测结果各干预组均有不同程度的改善,右归丸中剂量组减少尿蛋白量、降低血脂疗效优于各干预组,各治疗组血肌酐、血尿素氮降低有统计学意义（p<0.05）。3.肾小球病理形态改变光镜下空白组肾小球结构形态稳定;模型组肾小球略显肿胀,基底膜不规则增厚,系膜细胞轻度增生,肾小管内出现透明的管型;各治疗组肾小球病理形态的改变介于空白组与模型组之间。电镜下发现足细胞有足突融合、消失的改变,空白组足细胞未发现异常改变;且在电镜下,右归丸中剂量组对减轻足细胞融合,足细胞恢复效果明显。4.miRNA芯片分析结果模型组与空白组相比较,差异表达的miRNA 23个,且高表达miRNA 15个、低表达miRNA 8个;与模型组比较,右归丸干预组中高表达的miRNA9个,低表达miRNA 6个,其中SRNS肾病大鼠模型组织中rno-mir-29b-3P、rno-mir-26b-5P表达上调,rno-mir-205表达下调,经右归丸治疗后,上调的rno-mir-29b-3P、rno-mir-26b-5P得到抑制,而下调的rno-mir-205得到增强。通过real-time PCR对特异基因相互验证结果显示:模型组rno-mir-29b-3P、rno-mir-26b-5P与空白组rno-mir-29b-3P、rno-mir-26b-5P表达量比分别为1.94、2.53倍;rno-mir-205表达量其模型组与空白对照组的比值为0.28,所得结果与基因芯片接近,证实以上所筛选miRNA是SRNS最有代表性的miRNA。5.Dicer酶、SD蛋白分子的检测结果SRNS大鼠肾组织中Dicer酶免疫荧光强度、蛋白与mRNA表达均上调,而nephrin、podocin、CD2AP与synaptopodin结果相反,二者呈负相关。提示dicer酶通过Dicer-miRNA负向调控足细胞裂隙孔膜相关蛋白分子,同时骨架蛋白表达减少及足细胞的凋亡与miRNA有一定的相关性。6.右归丸干预后dicer、nephrin、podocin、CD2AP免疫荧光、蛋白与核酸的表达结果与模型组比较,右归丸组肾组织Dicer酶免疫荧光强度减弱,呈线状分布,核酸与蛋白表达下降,而SD相关分子免疫荧光表达增强,呈颗粒状分布,mRNA与蛋白表达量均升高。7.细胞凋亡相关因子免疫荧光、蛋白与mRNA的表达检测结果与空白组比较,模型组Bax、caspase-3免疫荧光强度均增强,蛋白及mRNA表达均升高（p<0.05）,而Bcl-2表达降低（p<0.05）,各干预组对Bax/Bcl-2、caspase-3表达水平均有改善,但右归丸干预各组Bax、caspase-3蛋白及mRNA表达下调,Bcl-2蛋白和mRNA表达明显上升（p<0.01）。说明右归丸通过骨架蛋白及细胞凋亡因子发挥保护足细胞作用,这一作用与右归丸对类固醇激素的增敏作用有关。结论:1.本实验在复制激素抵抗型肾病综合征动物模型时采用“病证结合”的方式,即单次尾静脉注射阿霉素6mg/kg建立FSGS肾病模型,同时肌注氢化可的松25mg/kg,造成肾阳虚证,成功地模拟典型的SRNS临床病证,效果确切。2.基因芯片对SRNS大鼠肾组织中miRAN筛选显示,SRNS肾病大鼠皮质中23个miRNAs特异性表达,其中15个高表达,8个低表达,Fold Change从0.3到3.4。筛选出SRNS特征性miRNA:rno-mir-29b-3P、rno-mir-26b-5P的表达显着上调,提示这些miRNA可能参与足细胞损伤。rno-mir-205在激素抵抗型肾病综合征模型大鼠中低表达,提示miRNA可能通过抑制足细胞凋亡和增强激素对药物的敏感性而发挥作用。3.SRNS肾病大鼠足细胞裂孔隔膜分子及骨架蛋白的表达是通过Dicer酶介导miRNA负向来调控。足细胞的损伤及足细胞的凋亡还可能通过Dicer-miRNA来参与。提示Dicer-miRNA是防治SD蛋白分子与尿蛋白异常的靶向点。4.右归丸可下调激素抵抗型肾病综合征模型大鼠Dicer表达,同时右归丸对SRNS肾病大鼠足细胞裂孔隔膜分子nephrin、CD2AP、podocin及骨架蛋白synaptopodin表达的影响可能是通过Dicer-miRNA途径来调控。提示Dicer、rno-mir-29b-3P、rno-mir-26b-5P可能是右归丸治疗SRNS肾病,维护保护肾小球滤过屏障,保护足细胞,减少蛋白尿的靶点。5.右归丸可抑制SRNS大鼠肾组织中Bax升高,Bcl-2的下降,修复足细胞Bax/Bcl-2平衡态,降低凋亡标志性蛋白caspase-3活性,改善足突融合,从而维持足细胞数目的稳定,保护足细胞免于凋亡。6.右归丸各剂量组均可改善激素抵抗型肾病综合征蛋白尿、改变低蛋白血症、降低胆固醇和甘油三酯的水平,减轻足细胞足突融合、降低或减少细胞膜外基质积聚、肾小球系膜增生及肾小管上皮细胞变性等发挥减毒增敏作用。然右归丸中剂量组疗效显着。
唐建[9]（2020）在《补肾活血祛风中药复方对阿霉素肾病大鼠的实验研究及基于p38MAPK信号转导通路研究治疗阿霉素肾病大鼠的分子机制》文中进行了进一步梳理目的:中药复方是目前临床上治疗肾病综合征的重要方式,其在临床上的功效显着。本课题通过动物实验旨在研究补肾活血祛风中药复方（BSHXQF）对阿霉素肾病大鼠肾脏病理组织结构及p38MAPK信号转导通路的影响;研究BSHXQF中药复方单用和（或）联合糖皮质激素对阿霉素肾病大鼠干预的差异性,进一步探讨BSHXQF中药复方提高肾病综合征治疗效果可能的作用机制,为临床中西医结合治疗肾病综合征提供生物依据。方法:筛选健康雄性Spraque-Dawley（SD）大鼠140只,测定24时尿蛋白定量后（小于10mg）,随机分为空白对照组（A组）20只,造模组120只。造模组采用阿霉素（adriamycin,ADR）尾静脉注射方式（分两次注射）建立肾病综合征大鼠模型,3周后检测24小时尿蛋白定量大于100mg者即为肾病综合征模型复制成功。再将成模大鼠随机分为模型组（B组）、泼尼松组（C组）、中药组（D组）、中药+泼尼松组（E组）,每组各18只。各组大鼠给予相应的干预:空白对照组不干预,模型组予以蒸馏水灌胃,泼尼松组予以醋酸泼尼松片溶液,中药组予以补肾活血祛风方中药复方汤剂,中药+泼尼松组予以补肾活血祛风方中药复方汤剂和醋酸泼尼松片溶液,各组大鼠干预8周。分别在干预4周、8周末时每组随机抽取9只大鼠观察治疗效果,收集尿、血标本检测24h尿蛋白定量、肾功、凝血、血脂和白蛋白等相关指标,取肾脏组织观察病理变化,采用Real-time PCR技术和免疫组织化学法检测肾组织p38MAPK信号通路中的蛋白及m RNA表达量。结果:（1）.大鼠一般情况:A组一般情况良好;B组大鼠皮毛松散,活动下降,尾部出现不同程度的水肿和溃烂,饮食量减少,体重增加缓慢,部分大鼠出现门齿松动和脱落的情况;C、D、E组较模型组大鼠均有不同程度的好转。（2）.各组大鼠24小时尿蛋白定量和生化指标改变:与A组比较,B、C、D、E组大鼠24h尿蛋白量明显升高、血清白蛋白降低、总胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）升高（P<0.05）;与B组比较,C、D、E组24h尿蛋白均降低（P<0.05）,C组TC、TG升高,而D组TC、TG明显降低（P<0.05）,C、D、E组白蛋白差异无统计学意义（P>0.05）;各组组间比较发现所有组别大鼠血肌酐和尿素氮无明显差异（P>0.05）。（3）.各组大鼠肾脏病理组织结构改变:A组大鼠肾脏结构正常,各造模组大鼠肾脏病理可见肾小球肿大、肾小管上皮细胞变性肿胀、间质纤维组织增生及肾小球基底膜增厚等改变,且电镜可见足细胞排列紊乱和局部融合,肾小管上皮细胞核染色质聚集,胞浆内线粒体肿胀;与B组比较,各干预组肾脏病理损害不同程度的改善,其中E组大鼠肾脏病理病变最轻。（4）.各组大鼠肾组织p38MAPK表达的改变:与A组比较,B组大鼠肾脏组织p38MAPK蛋白和m RNA的表达明显增加（P<0.05）;与B组比较,各干预组表达有所下降（P<0.05）,C、D、E三组组间比较发现表达无明显差异（P>0.05）。结论:（1）.补肾活血祛风中药复方可改善阿霉素肾病大鼠一般情况,降低24小时尿蛋白定量,减轻或者延缓阿霉素肾病大鼠的肾脏病理损害,且当与糖皮质激素类药物联用时具有增强疗效的作用。（2）.补肾活血祛风中药复方可以下调阿霉素肾病大鼠肾组织p38MAPK的表达,提示BSHXQF中药复方减轻阿霉素肾病大鼠的肾脏病理损害的作用机制可能与干预p38MAPK信号通路有关。（3）.补肾活血祛风中药复方和糖皮质激素均对阿霉素肾病大鼠具有明显疗效,但在调节血脂代谢上BSHXQF中药复方明显优于糖皮质激素。（4）.与单用糖皮质激素治疗阿霉素肾病大鼠相较,BSHXQF中药复方+糖皮质激素对阿霉素肾病大鼠的综合治疗更优,体现了目前中西医结合治疗肾病综合征的优势。
刘娜,王立范,杨馨,李倩[10]（2019）在《水蛭对以血管内皮生长因子为介导的局灶节段性肾小球硬化足细胞损伤的干预作用》文中研究说明目的:通过实验研究观察水蛭对局灶节段性肾小球硬化（FSGS）模型大鼠24h尿蛋白定量,肾脏病理及肾组织Podacalyxin、血管内皮生长因子（VEGF）的影响,探讨水蛭对肾小球足细胞的影响,及其减少尿蛋白,控制足细胞病变,干预其进展的作用机理,为水蛭治疗FSGS提供理论依据。方法:采用单侧肾切除术后两次尾静脉注射阿霉素建立FSGS模型。实验动物分为假手术组、空白组、治疗组和模型组四组。在给药后4周末、8周末动态观察实验大鼠的一般状态、24h尿蛋白定量和血浆白蛋白的变化;将肾脏病理切片进行MASSON染色,观察FSGS模型大鼠肾组织的病理改变情况;电镜观察肾脏的超微结构;采用免疫组化二步法分别检测肾组织中的Podacalyxin、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达情况,采用实时荧光定量PCR检测肾组织Podacalyxin、VEGF的表达水平。结果:1.水蛭能改善FSGS模型大鼠一般状态;治疗组大鼠24h尿蛋白定量低于模型组,血浆白蛋白高于模型组,与模型组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;2.水蛭能够减轻FSGS病理改变;3.免疫组化结果显示:治疗组与模型组相比,各时间点,podocalyxin蛋白表达增多,与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05）;VEGF蛋白表达减少,与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05）;结论:1.水蛭可降低FSGS大鼠24h尿蛋白定量,升高血浆白蛋白,改善一般状态;2.减轻肾脏病理改变,保护肾脏;3.水蛭可能通过调节FSGS模型大鼠肾组织中podocalyxin和VEGF蛋白表达,维持足细胞结构和功能正常,延缓了FSGS发展进程。
二、肝素防治局灶节段性肾小球硬化的实验研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肝素防治局灶节段性肾小球硬化的实验研究（论文提纲范文）
（1）中医药调控Notch信号通路防治肾脏疾病研究进展（论文提纲范文）
| 1 Notch信号通路 |
| 2 Notch信号通路在肾脏疾病中的作用 |
| 3 中医药调控Notch信号通路治疗肾脏疾病 |
| 3.1 糖尿病肾病 |
| 3.2 Ig A肾病 |
| 3.3 肾纤维化 |
| 3.4 膜性肾病 |
| 3.5局灶节段性肾小球硬化 |
| 3.6肾细胞癌 |
| 3.7 其他肾脏疾病 |
| 4 小结 |
（2）檀金川教授治疗局灶节段性肾小球硬化经验（论文提纲范文）
| 1 针对微观，五法论治 |
| 1.1 塌陷型与扶正补络法 |
| 1.2 尖端型与清热利湿法 |
| 1.3 细胞型与化浊解毒法 |
| 1.4 门部型与散瘀通络法 |
| 1.5 非特异型与化症消积法 |
| 2 中西结合，优势互补 |
| 2.1 中药与激素结合应用 |
| 2.1.1 激素起始期 |
| 2.1.2 激素减量期 |
| 2.1.3 激素维持期 |
| 2.2 中药与免疫抑制剂结合应用 |
| 3 未病先防，调护得当 |
| 4 典型病案 |
（3）JAML在糖尿病肾病足细胞脂质代谢稳态失衡中的作用及机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号缩略 |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 1、实验动物 |
| 2、药品和试剂 |
| 3、药品及试剂配制方法 |
| 4、实验器材 |
| 第一部分: JAML在糖尿病肾病中的表达模式 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附录 |
| 第二部分: J JAML在糖尿病肾病足细胞损伤中的作用 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附录 |
| 第三部分: JAML在糖尿病肾病足细胞脂代谢稳态失衡中的作用机制 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表论文 |
| 原始条带 |
| 外文论文一 |
| 外文论文二 |
| 附件 |
（4）肾康注射液对慢性肾脏病和肾纤维化的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 慢性肾脏病肾纤维化的现代研究进展 |
| 1 病因研究 |
| 2 发病机制研究 |
| 3 治疗与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医药防治慢性肾脏病研究进展 |
| 1 病名研究 |
| 2 病因病机研究 |
| 3 防治研究 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 实验一 肾康注射液治疗慢性肾脏病的系统药理学分析 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果和讨论 |
| 3 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 肾康注射液对UUO小鼠肾间质纤维化的保护作用及机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 肾康注射液对NRK-49F人鼠肾间质成纤维细胞活化的作用及机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 主要研究成果 |
| 个人简历 |
（5）白头翁皂苷B4基于足细胞p53凋亡通路干预大鼠局灶节段性肾小球硬化的作用机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| abstract |
| 注释表 |
| 引言 |
| 第一章 白头翁皂苷B4对ADR诱导足细胞凋亡的抑制作用及相关作用机制研究 |
| 前言 |
| 1 白头翁皂苷B4对ADR诱导凋亡MPC-5 细胞活性的影响 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 2 白头翁皂苷B4对ADR诱导足细胞凋亡相关作用机制研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 第二章 白头翁皂苷 B4 对 ADR 诱导大鼠 FSGS 模型的干预作用及相关机制研究 |
| 前言 |
| 1 白头翁皂苷 B4对ADR诱导大鼠FSGS模型的干预作用 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验材料 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 实验结果 |
| 2 白头翁皂苷 B4干预 ADR诱导大鼠 FSGS 模型相关机制研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 结论 |
| 文献综述 足细胞凋亡与慢性肾病研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附图1:FSGS大鼠肾脏病理切片PAS染色 |
| 附录2 :FSGS大鼠肾脏病理切片Masson染色 |
| 附录3 :FSGS大鼠肾脏足细胞超微结构 |
| 附录4 :FSGS大鼠肾脏Caspase-3 蛋白免疫组化 |
| 个人简介 |
（6）肾康注射液调节UUO小鼠肾纤维化及HUVEC血管生成的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药防治慢性肾脏病肾纤维化研究进展 |
| 1. 病名 |
| 2. 病因病机 |
| 3. 临床治疗 |
| 4. 实验研究 |
| 参考文献 |
| 综述二 肾康注射液治疗肾脏疾病研究概述 |
| 1. 药物基本情况 |
| 2. 临床疗效研究 |
| 3. 基础药理机制研究 |
| 4.发展前景 |
| 参考文献 |
| 综述三 血管生成在肾纤维化发生发展中作用的研究进展 |
| 1. 血管生成发生发展 |
| 2. 肾纤维化发生发展 |
| 3. 血管生成障碍与肾纤维化密切相关 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 肾康注射液对UUO小鼠肾纤维化和血管生成的影响 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 肾康注射液对HUVEC血管生成和VEGF/VEGFR-2/eNOS的影响 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 在学期间主要成果 |
（7）成人原发肾病综合征并发急性肾损伤危险因素分析及预测模型建立（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 研究对象与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述:成人原发肾病综合征继发急性肾损伤早期防治研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 发表文献 |
（8）基于miRNA探讨右归丸对激素抵抗型肾病综合征大鼠的增敏作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语 |
| 前言 |
| 第一章 研究背景 |
| 1 SRNS现代医学研究 |
| 2 足细胞损伤是导致SRNS的关键环节 |
| 3 miRNA诱导SRNS的作用机制 |
| 3.1 miRNA与足细胞 |
| 3.2 miRNA与足细胞相关基因的表达 |
| 4 传统医学对激素抵抗型肾病综合征的研究 |
| 4.1 SRNS病因病机 |
| 4.2 右归丸治疗肾病综合征的新机制 |
| 5 戴恩来教授“病证结合”以“益火之源,以消阴翳”立论 |
| 6 建立假说 |
| 第二章 右归丸治疗SRNS肾病减毒增敏机制实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物、试剂与器材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 复制SRNS肾病大鼠模型 |
| 2.3 给药的剂量及方法 |
| 2.4 标本的采集及检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 右归丸对SRNS大鼠一般状态的影响 |
| 3.2 右归丸对模型大鼠体重质数的影响 |
| 3.3 各组大鼠24 小时尿蛋白定量结果 |
| 3.4 右归丸对SRNS大鼠自主活动的影响 |
| 3.5 各组大鼠总蛋白、白蛋白、血脂指标变化 |
| 3.6 各组大鼠肾功能指标的变化 |
| 3.7 光镜观察各组大鼠肾组织病理变化 |
| 3.8 电镜观察各组大鼠肾组织超微结构变化 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三章 激素抵抗型肾病综合征大鼠肾皮质miRNA的差异性表达 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验的主要药物、试剂与器材 |
| 1.3 实验分组和动物模型的复制 |
| 1.4 指标检测及方法 |
| 1.5 基因芯片检测肾皮质miRNA的表达 |
| 1.6 Real-time PCR验证候选miRNAs |
| 2 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 SRNS模型大鼠一般情况 |
| 3.2 用药前后各组大鼠尿蛋白定量变化 |
| 3.3 各组大鼠肾组织HE染色(光镜) |
| 3.4 透射电镜观察足细胞微结构变化 |
| 3.5 各组大鼠肾皮质miRNA芯片检测 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第四章 基于Dicer-microRNA对 SRNS大鼠足细胞SD分子调控及右归丸的干预作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物与分组 |
| 1.2 实验的主要药物、试剂与器材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 SRNS大鼠模型制备 |
| 2.2 给药的方法和剂量 |
| 2.3 指标检测及方法 |
| 2.4 肾皮质dicer、nephrin、podocin、CD2AP、synaptopodin免疫荧光染色 |
| 2.5 肾组织Dicer与 SD分子蛋白检测(Western Blotting) |
| 2.6 肾皮质Dicer与 SD分子mRNA检测(RT-PCR) |
| 2.7 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 SRNS大鼠一般情况 |
| 3.2 用药前后各组大鼠尿蛋白定量变化 |
| 3.3 光镜观察各组大鼠肾脏病理改变(PASM染色) |
| 3.4 肾皮质Dicer与 SD分子免疫荧光染色变化 |
| 3.5 肾皮质Dicer与 SD蛋白表达 |
| 3.6 各组大鼠肾皮质Dicer与 SD分子mRNA表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第五章 右归丸对SRNS大鼠足细胞凋亡因子Bax、Bcl-2、caspase-3 的干预作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验主要试剂与药物 |
| 1.2 动物与分组 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 SRNS大鼠模型的建立 |
| 2.2 24h-upr及血清生化指标的检测 |
| 2.3 肾小球微结构检查(透射电镜) |
| 2.4 免疫荧光法检测肾组织Bax?Bcl-2?caspase-3 的表达 |
| 2.5 肾皮质Bax?Bcl-2?caspase-3 蛋白检测(Western Blotting法) |
| 2.6 大鼠肾皮质Bax?Bcl-2?caspase-3 mRNA表达检测(RT-PCR法) |
| 2.7 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠24h尿蛋白量变化 |
| 3.2 足细胞电镜观察结果 |
| 3.3 各组大鼠肾组织Bax?Bcl-2?baspase-3 免疫荧光染色 |
| 3.4 肾皮质Bax?Bcl-2?caspase-3 蛋白表达 |
| 3.5 肾皮质Bax?Bcl-2?caspase-3 mRNA表达水平 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 创新点 |
| 结语 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 附录 |
（9）补肾活血祛风中药复方对阿霉素肾病大鼠的实验研究及基于p38MAPK信号转导通路研究治疗阿霉素肾病大鼠的分子机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写词表 |
| 前言 |
| 第一部分 补肾活血祛风中药复方对阿霉素肾病大鼠的实验研究 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验药物和试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 阿霉素肾病大鼠模型制备及分组 |
| 2.2 实验药物溶液的制备方法 |
| 2.3 实验给药方法 |
| 2.4 实验标本采集 |
| 2.5 检测指标和方法 |
| 2.5.1 大鼠一般情况观察 |
| 2.5.2 大鼠24h尿蛋白检测 |
| 2.5.3 大鼠血清生化指标 |
| 2.5.4 大鼠肾脏组织病理结构观察 |
| 2.6 统计学处理 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 大鼠一般情况 |
| 3.2 24h尿蛋白情况 |
| 3.3 大鼠血清生化指标 |
| 3.4 各组大鼠肾脏病理变化 |
| 3.4.1 HE染色肾组织病理光镜观察 |
| 3.4.2 电镜观察 |
| 4 讨论 |
| 4.1 关于模型的建立和认识 |
| 4.2 现代医学对肾病综合征的认识 |
| 4.3 祖国医学对肾病综合征的认识 |
| 4.4 补肾活血祛风中药复方评价 |
| 4.5 补肾活血祛风中药复方对阿霉素肾病大鼠的干预作用 |
| 第二部分 基于p38MAPK信号转导通路研究补肾活血祛风中药复方治疗阿霉素肾病大鼠分子机制 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验药物和试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 阿霉素肾病大鼠模型制备及分组 |
| 2.2 实验药物溶液的制备方法 |
| 2.3 实验给药方法 |
| 2.4 实验标本采集 |
| 2.5 检测指标和方法 |
| 2.5.1 免疫组织化学法检测肾组织p-p38MAPK蛋白表达 |
| 2.6 统计学处理 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 PCR检测各组大鼠肾组织p38MAPKm RNA表达量结果 |
| 3.2 各组大鼠肾组织免疫组化法检测p38MAPK的实验结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 补肾活血祛风中药复方调控阿霉素肾病大鼠肾组织p38MAPK信号转导通路分子机制的探讨 |
| 4.2 p38MAPK信号转导通路激活后肾脏损害的关系 |
| 4.3 抑制p38MAPK信号转导通路表达与肾脏损害的关系 |
| 结论 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 一、中医药治疗肾病综合征的临床研究进展 |
| 1.肾病综合征的中医病名 |
| 2.肾病综合征的中医病因病机 |
| 3.肾病综合征中医证型分布 |
| 4.现代中医药治疗肾病综合征的进展 |
| 二、p38MAPK信号通路与肾病综合征等肾脏疾病关系的研究进展 |
| 1.p38MAPK信号通路的简介 |
| 2.p38MAPK信号通路与肾病综合征的关系 |
| 3.p38MAPK信号通路与其他肾脏疾病的关系 |
| 4.小结 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间公开发表的文章 |
（10）水蛭对以血管内皮生长因子为介导的局灶节段性肾小球硬化足细胞损伤的干预作用（论文提纲范文）
| 1 研究方法 |
| 1.1 动物模型的制备及分组 |
| 1.2 给药方法 |
| 1.3 实验取材 |
| 1.4 观察项目与方法 |
| 1.5 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 大鼠一般状态 |
| 2.2 大鼠24h尿蛋白定量变化情况 |
| 2.3 大鼠血浆白蛋白变化情况 |
| 2.4 大鼠肾脏病理改变 |
| 2.4.1 光镜MASSON染色可见 |
| 2.4.2 |
| 2.5 免疫组化检测结果 |
| 2.5.1 肾组织podocalyxin的表达 |
| 2.5.2 肾组织VEGF的表达 |
| 3 讨论 |
四、肝素防治局灶节段性肾小球硬化的实验研究（论文参考文献）
- [1]中医药调控Notch信号通路防治肾脏疾病研究进展[J]. 孙倩,李姗姗,杨少宁,于小勇. 中国实验方剂学杂志, 2021(24)
- [2]檀金川教授治疗局灶节段性肾小球硬化经验[J]. 毛竞宇,刘昊,檀金川. 天津中医药, 2021(07)
- [3]JAML在糖尿病肾病足细胞脂质代谢稳态失衡中的作用及机制[D]. 付艺. 山东大学, 2020(01)
- [4]肾康注射液对慢性肾脏病和肾纤维化的作用及机制研究[D]. 秦田雨. 北京中医药大学, 2020(04)
- [5]白头翁皂苷B4基于足细胞p53凋亡通路干预大鼠局灶节段性肾小球硬化的作用机制研究[D]. 左沙沙. 江西中医药大学, 2020(05)
- [6]肾康注射液调节UUO小鼠肾纤维化及HUVEC血管生成的机制研究[D]. 潘雅婧. 北京中医药大学, 2020(04)
- [7]成人原发肾病综合征并发急性肾损伤危险因素分析及预测模型建立[D]. 周燕琳. 重庆医科大学, 2020(12)
- [8]基于miRNA探讨右归丸对激素抵抗型肾病综合征大鼠的增敏作用及机制研究[D]. 王新斌. 甘肃中医药大学, 2020(08)
- [9]补肾活血祛风中药复方对阿霉素肾病大鼠的实验研究及基于p38MAPK信号转导通路研究治疗阿霉素肾病大鼠的分子机制[D]. 唐建. 成都中医药大学, 2020(02)
- [10]水蛭对以血管内皮生长因子为介导的局灶节段性肾小球硬化足细胞损伤的干预作用[J]. 刘娜,王立范,杨馨,李倩. 黑龙江中医药, 2019(06)