一、实验性脾虚大鼠下丘脑SS、MOT、CCK样免疫反应神经元的变化（论文文献综述）
范梦男[1]（2020）在《胃痛消痞方对FD大鼠脑肠肽相关受体影响的实验研究》文中研究指明目的:观察胃痛消痞方对功能性消化不良（functional dyspepsia,FD）大鼠行为学、胃内残留率、小肠推进率、胃窦及下丘脑组织脑肠肽（brain-gut peptide,BGP）)相关受体表达的影响,从脑肠轴（brain-gut axis,BGA）及BGP途径探讨胃痛消痞方治疗FD的可能的分子机制,为临床治疗FD探索新方法,为FD的中医临床治疗提供理论基础与实验依据。材料与方法:健康SPF级SD雄性大鼠48只,随机分为空白对照组（空白组）、模型空白组（模型组）、胃痛消痞方组（中药组）、莫沙必利组（西药组）,每组各12只。除空白组外,其他各组大鼠采用改良郭氏夹尾刺激法联合张氏不规则喂食法复制FD大鼠模型,连续刺激21d。造模成功后,观察各组大鼠一般情况及行为学表现,且解剖胃窦显示并无实质性损伤;治疗期间,空白组、模型组大鼠灌胃生理盐水。实验干预的胃痛消痞方由免煎中药配方颗粒剂组成:党参10g、柴胡12g、白芍20g、延胡索20g、白术20g、砂仁15g、枳实12g、炒麦芽20g、炙甘草6g、焦山楂10g、鸡内金10g。西药药选用枸橼酸莫沙必利片（10mg/片）。中药组和西药组大鼠根据人与大鼠等效剂量换算后给予相应药物灌胃,每日2次,连续给药21d。治疗结束后,观察各组大鼠的一般情况评分;禁食不禁水24小时后,将混有墨水的营养性半固体糊灌胃各组大鼠,麻醉后处死各组大鼠,测定胃内残留率和小肠推进率;免疫组化法检测各组大鼠胃窦及下丘脑五-羟色胺（5-Hydroxytryptamine,5-HT）、脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）的表达;实时荧光定量PCR法（quantitative Real-time PCR）及蛋白印记（western Blot,WB）法检测各组大鼠胃窦及下丘脑组织中BDNF、五-羟色胺3a受体（5-Hydroxytryptamine 3a receptors,5-HT3aR）、α型降钙素基因相关肽（α-calcitonin gene-related peptide,α-CGRP）、G蛋白偶联受体39（G protein-coupled receptor 39,GPR39）基因及蛋白表达。结果:1.各组大鼠一般状态比较造模后,空白组大鼠皮毛光泽,精神状态良好,活动度良好,饮水量及进食量正常,体质量增加,肌肉结实,二便正常,全程无死亡;各造模组大鼠均出现毛色光泽度差、精神萎靡、活动度差、进食量及饮水量减少、体质量增加缓慢或减少等现象。治疗3周之后,模型组大鼠一般情况及行为表现仍然不佳,中药组及西药组上述情况均有不同程度的好转,但无明显差异。2.各组大鼠胃肠动力改变与空白组比较,模型组大鼠小肠推进率降低（P<0.05）;与模型组比较,中药组和西药组大鼠小肠推进率增高（P<0.05）,且中药组较西药组增加明显（P<0.05）,差异显着。与空白组比较,模型组大鼠胃内残留率明显升高（P<0.05）;与模型组比较,中药组和西药组大鼠胃内残留率降低（P<0.05）,且中药组较西药组降低明显（P<0.05）,差异显着。3、各组大鼠胃窦及下丘脑组织5-HT、BDNF蛋白表达与空白组比较,模型组大鼠胃窦及下丘脑组织中5-HT、BDNF表达降低（P<0.05）;与模型组比较,中药组和西药组大鼠胃窦及下丘脑组织中5-HT、BDNF表达增高（P<0.05）,且中药组较西药组效果更好（P>0.05）,但差异没有统计学意义。4、各组大鼠胃窦组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP、GPR39 mRNA表达与空白组比较,模型组大鼠胃窦组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP mRNA相对表达量减少（P<0.05）;与模型组比较,中药组及西药组大鼠胃窦组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP mRNA相对表达量均增加（P<0.05）;与西药组相比较,中药组大鼠胃窦组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP mRNA增加明显,差异显着（P<0.05）。与空白组比较,模型组大鼠胃窦组织中GPR39 mRNA表达增加（P<0.01）;与模型组比较,中药组和西药组大鼠胃窦组织中GPR39 mRNA表达降低（P<0.05）;与西药组比较,中药组大鼠胃窦组织GPR39 mRNA表达降低不明显,差异显着（P<0.05）。5、各组大鼠下丘脑组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP、GPR39 mRNA表达与空白组比较,模型组大鼠下丘脑组织中BDNF、5-HT3aR、α-CGRP mRNA表达降低（P<0.05）;与模型组比较,中药组和西药组大鼠下丘脑组织中BDNF、5-HT3aR、α-CGRP mRNA表达增高（P<0.05）;与西药组相比较,中药组大鼠下丘脑组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP mRNA增加明显,差异显着（P<0.05）。与空白组比较,模型组大鼠下丘脑组织中GPR39 mRNA表达增加（P<0.01）;与模型组比较,中药组和西药组大鼠下丘脑组织中GPR39 mRNA表达降低（P<0.05）;且中药组较西药组效果更好（P>0.05）,但差异没有统计学意义。6、各组大鼠胃窦组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP、GPR39蛋白表达与空白组比较,模型组大鼠胃窦组织中BDNF、α-CGRP蛋白表达降低（P<0.05）,其中5-HT3aR蛋白表达明显降低（P<0.01）;与模型组比较,中药组和西药组大鼠胃窦组织中BDNF、5-HT3aR、CGRP蛋白表达增高（P<0.05）;与西药组比较,中药组大鼠下丘脑组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP增加明显,差异显着（P<0.05）。与空白组比较,模型组大鼠胃窦组织中GPR39蛋白表达增加（P<0.01）;与模型组相比较,中药组和西药组大鼠胃窦组织中GPR39蛋白表达降低（P<0.05）;与中药组相比较,西药组大鼠胃窦组织GPR39蛋白降低明显,差异显着（P<0.05）。7、各组大鼠下丘脑组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP、GPR39蛋白表达与空白组比较,模型组大鼠下丘脑组织中BDNF、5-HT3aR蛋白表达降低（P<0.05）,其中α-CGRP蛋白表达明显降低（P<0.01）;与模型组比较,中药组和西药组大鼠下丘脑组织中BDNF、5-HT3aR、α-CGRP蛋白表达明显增高（P<0.05）;与西药组相比较,中药组大鼠下丘脑组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP蛋白增高明显,差异显着（P<0.05）。与空白组比较,模型组大鼠下丘脑组织中GPR39蛋白表达增加（P<0.01）;与模型组比较,中药组和西药组大鼠下丘脑组织中GPR39蛋白表达均降低（P<0.05）;且中药组较西药组效果更好（P>0.05）,但差异没有统计学意义。结论:1.改良郭氏夹尾刺激法联合张氏不规则喂食法能够复制FD大鼠模型。2.胃痛消痞方可以改善FD大鼠毛色、改善活动灵活度、增加进食量、提高体重以及缓解暴躁易激惹行为学症状,从而证明胃痛消痞方对FD有治疗作用。3.胃痛消痞方能减少FD大鼠胃内残留率、增加小肠推进率,改善胃肠动力是胃痛消痞方治疗FD的机制之一。4.胃痛消痞方治疗FD的机制是通过上调5-HT、BDNF的表达,从精神心理因素方面实现FD的治疗,是其作用机制之一。5.胃痛消痞方对FD的治疗过程中存在BDNF、5-HT3aR、a-CGRP、GRP39 mRNA脑肠互动正反馈机制。6.胃痛消痞方治疗FD的机制是通过BGA上调5-HT、BDNF、α-CGRP,下调GPR39的表达实现的。
桑小普[2]（2020）在《慢性胃炎脾虚证相关lncRNA-miRNA-mRNA调控网络研究》文中提出脾虚证本质的研究是中医现代化研究的重要内容之一。随着研究的深入,人们发现脾虚证的致病机理涉及消化系统、免疫系统、内分泌系统、神经系统、血液系统、肠道菌群和能量代谢等多个方面。近年来,系统生物学的方法开始应用于脾虚证本质研究,但尚处于初步阶段。目前已有学者分别使用iTRAQ技术、16S rDNA测序技术和基因芯片技术对脾虚证的蛋白组学、微生物组学和转录组学进行了探索,但是,应用RNA-seq或Small RNA-seq技术进行脾虚证研究的相关报道较少。本论文共分为两部分。由于气虚体质是脾虚证的前驱状态,研究健康人气虚体质的生物学机制将有助于理解脾虚证的早期发生状态。论文的第一部分研究了健康人气虚体质相关差异表达lncRNA、miRNA和mRNA并构建了 ceRNA网络调控。论文第二部分研究了慢性胃炎脾虚证相关差异表达lncRNA、miRNA和mRNA并构建了 ceRNA网络调控,从病证结合的角度,研究脾虚证的病理机制。目的:在本次研究中我们以健康人气虚体质、慢性浅表性胃炎（Chronic Superficial Gastritis,CSG）脾虚证和慢性萎缩性胃炎（Chronic Atrophic Gastritis,CAG）脾虚证人群为研究对象,应用最前沿的RNA-seq技术和ceRNA理论,从转录组学水平上进行了脾虚证内在生物学机制的研究。综合两部分的研究结果,我们试图从体质、证候、疾病的自然进展方向,研究健康人气虚体质、CSG脾虚证和CAG脾虚证内在转录调控机制的相互关联,找到“气虚体质—脾虚证”相关的生物标志物或标志网络,以期阐释脾虚证的生物学基础。本研究也有助于预测疾病的发生与发展,从而为明确脾虚证自身特点及与其他因素（如体质、证候、疾病等）的关系提供了可能。方法:2016年6月～2018年12月期间,在北京中医药大学附属东方医院通过广告或电话进行健康受试者招募,包括健康人平和体质、气虚体质和湿热体质。同期进行慢性胃炎患者招募,包括慢性浅表性胃炎（脾虚证、湿热证）,慢性萎缩性胃炎（脾虚证、湿热证）患者。采集临床研究受试者外周血,分离白细胞后提取总RNA,分别进行RNA-seq和Small RNA-seq分析。获得的测序数据用生物信息学方法进行分析,筛选出差异表达的mRNA、lncRNA和miRNA,对差异表达基因进行生物功能与信号通路富集分析。对差异表达的mRNA、lncRNA和miRNA进行ceRNA网络构建,获得脾虚证相关的ceRNA调控网络关系。本研究经北京中医药大学东方医院临床研究伦理委员会审查,伦理审批号:JDF-IRB-2016031002临床研究注册号:NCT02915393。结果:第一部分:1、在本研究中,我们总共纳入病例25例,分别为健康人平和体质13例、气虚体质7例、湿热体质5例。随机选择了健康人平和体质5例、气虚体质5例、湿热体质4例的外周血白细胞样本的总RNA进行了 RNA-seq和Small RNA-seq分析。2、通过对测序数据的生物信息学分析,我们获得了健康人气虚体质相关的差异表达mRNA60个、lncRNA76个、miRNA42个。功能分析发现,细胞质膜组成成分和细胞质膜在差异表达mRNA和miRNA的GO富集中出现。蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性在差异表达lncRNA和miRNA的GO富集中出现。在对健康人气虚体质相关差异基因的通路分析中发现,赖氨酸降解在差异表达lncRNA和miRNA的KEGG富集中出现。3、通过对健康人气虚体质的差异表达miRNA、mRNA和lncRNA进行ceRNA分析,共获得3182个miRNA-lncRNA对,955个miRNA-mRNA对,最终筛选到9514对ceRNA。这些ceRNA调控网络涉及了 36个GO功能和31个KEGG信号通路。4、从健康人气虚体质差异表达的mRNA中筛选出99个免疫相关的基因,涉及了11个GO功能和8个KEGG信号通路。第二部分:1、在本研究中,我们总共纳入病例70例,分别为CSG脾虚证28例、湿热证21例;CAG脾虚证7例、湿热证14例。随机选择了CSG脾虚证6例、CSG湿热证5例、CAG脾虚证5例,CAG湿热证5例的外周血白细胞样本的总RNA进行了 RNA-seq和Small RNA-seq建库和测序。2、通过对测序数据的生物信息学分析,我们获得了CSG脾虚证患者相关的差异表达mRNA7个、lncRNA 103个、miRNA4个。在对CSG脾虚证相关的差异基因的功能分析中发现,细胞质膜在差异表达mRNA和miRNA的GO分析中均显着富集。在对CSG脾虚证相关的差异基因的功能分析中发现,胰岛素分泌以及胰岛素信号通路分别在差异表达mRNA和miRNA的KEGG分析中显着富集。通过对CSG脾虚证的差异表达 miRNA、mRNA 和 lncRNA 进行 ceRNA 分析,共获得 433 个 miRNA-lncRNA 对,226个miRNA-mRNA对,最终筛选到548对ceRNA。这些ceRNA调控网络涉及了10个GO功能和11个KEGG信号通路。从CSG脾虚证差异表达的mRNA中筛选出89个免疫相关的基因,涉及了 66个GO功能和15个KEGG信号通路。3、我们获得了 CAG脾虚证患者相关的差异表达mRNA 20个、lncRNA 79个、miRNA 29个。在对CAG脾虚证相关的差异基因的功能分析中发现,细胞质膜和细胞质膜的组成成分在差异表达mRNA和miRNA的GO分析中均显着富集。通过对CAG脾虚证的差异表达miRNA、mRNA和lncRNA进行ceRNA分析,共获得1028个miRNA-lncRNA对,1123个miRNA-mRNA对,最终筛选到3625对ceRNA。这些ceRNA调控网络涉及了 59个GO功能和34个KEGG信号通路。从CAG脾虚证差异表达的mRNA中筛选出139个免疫相关的基因,涉及了 20个GO功能和28个KEGG信号通路。4、从上述测序结果中进一步挖掘,获得脾虚证相关的差异表达mRNA 570个、lncRNA2009个、miRNA 303个,这些差异基因涉及了 9个GO功能和4个KEGG信号通路。通过对CAG脾虚证的差异表达miRNA、mRNA和lncRNA进行ceRNA分析,共获得6个miRNA-lncRNA对,9个miRNA-mRNA对,最终筛选到4对ceRNA,其中的关键基因CD300H的mRNA水平在气虚体质和脾虚证中显着降低（P=0.03）。从CAG脾虚证差异表达的mRNA中筛选出84个免疫相关的基因,涉及了 9个GO功能和18个KEGG信号通路。结论:健康人气虚体质与慢性胃炎脾虚证存在特异的转录组表达谱,且气虚体质与脾虚证的差异基因表达谱具有一定的相似性,尤其体现在免疫相关的基因表达方面。功能分析提示“气虚体质—脾虚证”涉及多种免疫相关功能异常,此外在激素分泌、细胞质膜、信号转导、物质代谢等多种生命活动中存在差异。转录组学的联合分析揭示了CD300H基因的ceRNA参与“气虚体质—脾虚证”相关的转录调控网络。本研究的结果为挖掘脾虚证潜在的生物学基础提供了重要参考。
戴宁[3]（2020）在《功能性消化不良脾虚证证候及香砂六君子加减方的作用机理研究》文中研究表明目的功能性消化不良是以餐后饱胀不适、早饱感不适、上腹痛、上腹部烧灼感为主要临床表现的一种功能性胃肠病。本病的患病率较高,缺乏特效药物。虽然功能性消化不良的发病机制尚不清楚,但是有研究表明与脑肠肽密切相关。在辨证论治和病证结合思想的指导下,中医治疗本病具有较好疗效。因此,本研究将探讨功能性消化不良脾虚证的中医证候及香砂六君子加减方干预作用的机理,为功能性消化不良的机制和新药开发提供参考,丰富中医辨证论治和整体观的内涵。方法理论研究:通过检索中国知网和“北京中医药大学古籍及民国图书数字化平台”,整理功能性消化不良相关的中医名词术语,运用比较分析法探讨功能性消化不良这一西医疾病对应的中医病名;同时,分析功能性消化不良的中医病因病机。应用文献计量的方法,分析功能性消化不良的主要中医证型;同时,在辨证论治思想的指导下,分析中医方剂治疗功能性消化不良这一证型的理论依据。文献研究:对香砂六君子汤治疗功能性消化不良的综合疗效（症状改善情况、有效率、不良事件发生率等）进行系统评价和meta分析,为临床应用提供依据,为实验研究阳性药物和疗程的选择奠定基础。实验研究:首先,采用碘乙酰胺复合水环境小平台站立法复制功能性消化不良脾虚证大鼠模型,通过观察大鼠的一般情况及胃肠动力情况来评价模型。此后,给予香砂六君子加减方和多潘立酮进行药物干预,通过上述指标评价药物疗效,反证模型成功。同时,建立功能性消化不良脾虚证大鼠胃窦平滑肌细胞的分离培养方法,筛选香砂六君子加减方药物血清的最佳干预条件,评价其对胃窦平滑肌细胞的影响。在此基础上,从整体水平和离体细胞水平两个方面,采用分子生物学实验技术检测血清、组织和胃窦平滑肌细胞中脑肠肽（SP,SS,Ghrelin,VIP,GAS,CCK,CGRP）。结果理论研究:（1）中医理论中“痞满”、“嘈杂”、“胃脘痛”与功能性消化不良最为接近。功能性消化不良的中医病因包括先天禀赋不足、外感邪气、饮食、痰湿、气郁、瘀血等,核心病机为脾气虚弱、中焦气机阻滞,病位在脾,但与心、肝、肺、肾具有一定的关系。（2）功能性消化不良的中医证型主要为脾气虚证、肝胃不和证、肝脾不和证、脾胃湿热证和寒热错杂证,其中脾气虚证的比例最高。在中医病证结合观念的指导下,从脾论治功能性消化不良脾虚证既符合病机特点,也满足辨证论治的要求。因此,具有补脾理脾作用的香砂六君子加减方治疗功能性消化不良脾虚证在理论层面是可行的、科学的。文献研究:对香砂六君子汤治疗功能性消化不良的随机对照试验的研究进行系统评价和meta分析,发现香砂六君子汤可以改善功能性消化不良患者的症状、提高其生活质量,同时降低复发率和不良事件发生率。不论是单独使用香砂六君子汤,还是将香砂六君子汤与常规治疗药物合用,有效率均显着高于常规治疗。在纳入的27项研究中,有26项研究比较了有效率。在这26项研究中,不论疗程是14天、28天,还是30天,试验组的有效率均显着高于对照组。此外,这26项研究中,有16项研究仅使用多潘立酮作为对照药,针对这16项研究进行了亚组分析,结果显示不论单独使用香砂六君子汤,还是将香砂六君子汤与多潘立酮联合使用,有效率均高于多潘立酮对照组。这为实验研究的药物选择和疗程提供参考。实验研究:（1）采用碘乙酰胺复合水环境小平台站立法成功制备了功能性消化不良脾虚证大鼠模型。与对照组相比,模型组大鼠大鼠的毛发疏松不泽、神疲乏力、倦卧怠动,进食量和饮水量增长缓慢,体重显着降低,胃肠动力下降。胃部病理结果显示两组大鼠胃部均未出现病理改变。（2）给予药物干预后,与模型组大鼠相比,给药组大鼠的一般情况、进食量、饮水量、体重有所改善,胃肠动力有所恢复,且各组大鼠胃部和下丘脑均未出现病理改变。（3）大鼠整体水平的生物学基础研究:与对照组相比,模型组大鼠血清和胃中SP、GAS、Ghrelin含量均显着降低,SS、VIP、CCK、CGRP含量显着增加。与模型组相比,多潘立酮和中、高剂量的香砂六君子加减方显着增加了大鼠血清和中SP、GAS、Ghrelin含量,多潘立酮和中剂量的香砂六君子加减方显着降低了大鼠血清中SS、VIP和CGRP含量,同时多潘立酮还降低了大鼠胃中VIP、CCK和CGRP的含量,低剂量的香砂六君子加减方降低了大鼠胃中SS、VIP和CCK的含量,中剂量的香砂六君子加减方降低了大鼠胃中CGRP的含量。与多潘立酮组相比,低剂量的香砂六君子加减方组大鼠血清中SP含量显着降低,血清中的CCK和CGRP含量显着升高,三个剂量的香砂六君子加减方组大鼠胃中VIP含量均显着高于多潘立酮组。与对照组相比,模型组大鼠胃和下丘脑中 SP mRNA、GAS mRNA、Ghrelin mRNA 表达量显着降低,SS mRNA、VIP mRNA、CCK mRNA、CGRP mRNA表达量显着增加。与模型组相比,多潘立酮显着增加了大鼠胃和下丘脑中SP mRNA、GAS mRNA、Ghrelin mRNA表达量,降低了大鼠胃和下丘脑中SS mRNA、VIP mRNA、CCK mRNA、CGRP mRNA表达量。与模型组相比,中剂量的香砂六君子加减方显着上调了胃中SP mRNA表达量,上调了胃和下丘脑中GAS mRNA、Ghrelin mRNA表达量,同时下调了胃和下丘脑中SS mRNA、VIP mRNA、CCK mRNA、CGRP mRNA表达量。与多潘立酮组相比,低剂量的香砂六君子加减方组大鼠胃和下丘脑中GAS mRNA和Ghrelin mRNA表达量显着降低,SS mRNA、VIP mRNA、CCK mRNA表达量显着升高。与对照组相比,模型组大鼠胃和下丘脑中SP、GAS、Ghrelin蛋白表达量显着降低,SS蛋白表达量显着增加。与模型组相比,多潘立酮和中剂量的香砂六君子加减方显着上调了胃和下丘脑中SP、GAS、Ghrelin蛋白表达量,同时下调了胃和下丘脑中SS蛋白表达量。与多潘立酮组相比,低剂量的香砂六君子加减方组大鼠胃和下丘脑中SP蛋白表达量和Ghrelin蛋白表达量显着降低。（4）采用酶消化法成功分离培养功能性消化不良脾虚证大鼠胃窦平滑肌细胞,用CCK-8法筛选药物血清干预胃窦平滑肌细胞的最佳条件,发现10%浓度药物血清、干预24h为最佳条件,与模型组相比,阳性药组和高剂量的香砂六君子加减方均可以显着促进细胞增殖。（5）细胞水平的生物学基础研究:与对照组相比,模型组大鼠胃窦平滑肌细胞上清中SP、GAS、Ghrelin含量显着降低、SS含量显着升高。与模型组相比,多潘立酮、中、高剂量的的香砂六君子加减方均可以增加胃窦平滑肌细胞上清中SP含量、GAS含量和Ghrelin含量,降低SS含量。与对照组相比,模型组大鼠胃窦平滑肌细胞的SP mRNA含量显着下降,SS mRNA含量显着升高。与模型组相比,多潘立酮、中、高剂量的香砂六君子加减方均上调胃窦平滑肌细胞SP mRNA表达量,中剂量的的香砂六君子加减方下调胃窦平滑肌细胞SS mRNA表达量。结论（1）《中医内科学》仅依据功能性消化不良的主要症状将其归属于痞满、嘈杂、胃脘痛的范畴,但并没有分析FD的中医病因病机。此外,笔者在阅读文献的过程中,发现研究者们不仅将FD归属于痞满、嘈杂、胃脘痛,还将其归属于反胃、厌食、纳呆等范畴,由此可见中医对FD的认识尚不明确。因此,本研究通过系统地查阅现代文献和工具书,同时梳理古代文献,对FD的定义和临床表现进行分析,发现中医理论中“痞满”、“嘈杂”、“胃脘痛”与FD较为对应,FD的主要中医病因为外邪侵袭、饮食不节、情志不畅、思虑过度等,病机以脾气虚弱、中焦气机阻滞为核心,病位主要在脾,与肝、心、肺、肾具有一定的关系。在功能性消化不良的辨证分型中,脾气虚证位居首位。香砂六君子加减方治疗功能性消化不良具有理论可行性。（2）临床中,可以使用香砂六君子汤治疗功能性消化不良,改善症状,提高有效率。（3）功能性消化不良脾虚证大鼠出现胃肠动力下降,且大鼠血清、胃窦和下丘脑中SP、GAS、Ghrelin表达下降,SS、VIP、CCK、CGRP上升,表明脑肠肽表达异常可能是功能性消化不良脾虚证的重要发病机制之一。给予香砂六君子加减方干预后,发现功能性消化不良脾虚证大鼠的症状体征有所改善,胃动力增强,其药物血清可以促进胃窦平滑肌细胞的增殖,香砂六君子加减方可以上调大鼠血清、胃窦和下丘脑中SP、GAS、Ghrelin的表达,下调大鼠血清、胃窦和下丘脑中SS、VIP、CCK、CGRP的表达,表明调节脑肠肽异常、恢复胃动力可能是香砂六君子加减方的药效作用机制之一。
南梦蝶,程诺,贺倩,刘远欧,刘玥芸[4]（2020）在《脾气虚证与神经内分泌相关的生化指标的关联性研究概述》文中提出脾气虚证是中医常见证候之一,大量研究结果表明脾气虚证神经内分泌系统各类指标有不同程度的变化。本文根据现有脾气虚证的实验研究现况,分析和比较了不同研究的学术观点,重点介绍了脑肠肽、神经调节相关指标、下丘脑-腺垂体轴指标和水盐代谢等指标变化。脑肠肽方面,多数研究提示脾气虚证状态下,促进作用的脑肠肽在下丘脑、胃肠道组织及血液中的含量下降,抑制作用的脑肠肽在各组织中的含量下降,部分脑肠肽含量可在不同组织中出现不同变化;在有关细胞信号通路的研究中,脾气虚证状态下,自主神经功能紊乱进而出现相应指标变化,中枢神经系统的部分细胞因子及神经递质的含量改变,肠神经功能紊乱也通过指标的变化体现;在有关下丘脑-腺垂体轴的研究中,脾气虚证状态下肾上腺、甲状腺的内分泌功能受到抑制;在有关水盐代谢的研究中,一些研究表明脾气虚证状态下醛固酮和抗利尿激素含量增加、水通道蛋白比例变化。本文认为脾气虚证研究有待进一步探明不同指标相互间可能的作用关系。
郑嘉怡[5]（2020）在《基于胃脑相关探讨慢性萎缩性胃炎大鼠“炎-癌”演变期摄食功能变化的研究》文中进行了进一步梳理目的:一、基于胃脑相关理论,复制N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）+饥饱失常+慢性不可预测轻度应激（Chronic unpredictable mild stress,CUMS）大鼠模型,探讨情志干预对胃癌前病变（GPL）大鼠摄食功能的变化及胃黏膜的影响,筛选“炎-癌”演变期中与癌变及摄食相关的关键指标;二、观察慢性萎缩性胃炎（CAG）大鼠癌变及摄食相关的关键指标变化,并采用电针足三里治疗,探讨电针是否通过介导胃及下丘脑摄食相关因子及受体,调节CAG大鼠摄食功能,改善其胃黏膜病变及炎症等相关指标,对胃黏膜产生保护作用。方法:一、情志干预型胃癌前病变大鼠模型的建立及其摄食变化的研究（实验一）选用60只SD雄性大鼠,随机分为空白组、胃癌前病变模型组（GPL）、情志干预型胃癌前病变模型组（GPL+CUMS）,每组12只。采用连续28周200μ g/ml的MNNG饮用液自由饮用,配合饥饱失常（隔日禁食法）建立GPL大鼠模型。GPL+CUMS组在GPL大鼠模型的基础上,连续28周结合CUMS建立GPL+CUMS大鼠模型,动态观察各组大鼠的一般情况及食物摄入量。观察28周后各组行为学和糖水偏好。大鼠处死后,采用ELISA法测血清白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、饥饿素（Ghrelin,GHRL）、瘦素（Leptin,LEP）、生长抑素（Somatostatin,SS）;取胃黏膜,肉眼下观察胃黏膜组织大体病变,并行苏木精和伊红(HE、爱先蓝-糖原（AB-PAS）、高铁二胺—爱先蓝（HID-AB）染色,在光镜下观察其病理变化;免疫荧光法观察大鼠胃组织中Ghrelin、胃动蛋白（Gastrokine-2,GKN2）的表达情况。二、电针足三里对慢性萎缩性胃炎大鼠摄食功能调节机制研究（实验二）选用60只SD雄性大鼠随机分为空白组及慢性萎缩性胃炎模型组（CAG）。采用连续16周200μg/ml的MNNG饮用液自由饮用+饥饱失常（隔日禁食法）复制CAG大鼠模型。CAG模型组大鼠随机均分为CAG模型组（CAG）、电针足三里组（疏密波电针后三里:疏波频率2Hz、密波频率10Hz、强度0.3-0.5mA、10min/次,6次/周）和电针非穴组（疏密波电针非经非穴）,每组12只。于第17周开始连续治疗8周,均正常饲养,动态观察各组大鼠的一般情况、体重及食物摄入量;大鼠处死后,采用 ELISA 法测定血清中 IL-6、IL-10、TNF-α、Ghrelin、SS、Leptin、前列腺素 E2（Prostaglandin,PGE2）的含量;取胃黏膜,采用HE、AB-PAS和HID-AB染色,光镜下观察胃黏膜病理变化;免疫荧光法观察胃组织中Ghrelin、Leptin、神经肽Y（Neuropeptide Y,NPY）与GKN2表达情况,WB法测胃组织中GKN2、生长激素促分泌素受体（Growth Hormone Secretagogue Receptor,GHSR）、瘦素受体（Leptin receptor,LEPR）蛋白表达;取下丘脑,免疫荧光双标法观察NPY与刺鼠肽基因相关蛋白（Agouti-Relatedprotein,AgRP）表达情况,WB 法测 GHSR、LEPR、阿黑皮素原（Pro-opiomelanocortin,POMC）蛋白表达。结果:一、情志干预型胃癌前病变大鼠模型的复制及其摄食行为研究（实验一）与空白组相比,GPL与GPL+CUMS大鼠一般状况较差,体重下降,造模期间摄食量波动较大。旷场实验结果显示,与空白组相比,GPL大鼠和GPL+CUMS大鼠在总路程和平均速度均显着降低（P＜0.05）。与空白组和GPL组相比,GPL+CUMS组中央区域路程与总路程之比显着增加（P<0.05）,在中央区域的时间占总时间的比例显着增加（P<0.05）。与空白组比较,GPL+CUMS组糖水偏好百分比显着降低（P<0.05）,GPL组糖水偏好百分比未见明显改变（P>0.05）。在肉眼及光镜下观察,结果显示,GPL+CUMS可引起肿瘤发生,并加速GPL进展。与空白组相比,GPL与GPL+CUMS血清中炎症相关因子（IL-6、TNF-α）含量增加（P<0.05）,脑肠肽中Ghrelin、Leptin含量减少（P<0.05）,SS含量增加（P<0.05）。与GPL相比,GPL+CUMS组血清中TNF-α与SS有显着增高（P<0.05）。与空白组相比,GPL与GPL+CUMS胃组织及肿瘤附近胃黏膜中GKN2及Ghrelin的表达异常增多,而肿瘤中GKN2及Ghrelin表达减少。二、电针足三里治疗慢性萎缩性胃炎研究（实验二）CAG大鼠一般状况较差,体重下降,造模及恢复期间摄食量波动较大。CAG大鼠血清中炎症相关因子（IL-6、TNF-α）含量升高（P<0.05）,IL-10和PGE2含量降低（P<0.05）,脑肠肽中Ghrelin、Leptin含量降低（P<0.05）,SS含量升高（P<0.05）;CAG大鼠胃组织中Ghrelin与Leptin阳性表达增加,其中Ghrelin出现明显局灶性阳性表达增多,NPY阳性表达减少,GKN2、LEPR表达增加（P<0.05）,GHSR表达减少（P<0.05）;CAG大鼠下丘脑中NPY、AgRP表达异常增多,LEPR、GHSR、POMC表达增加（P<0.05）。电针足三里可改善CAG大鼠一般状况,增加CAG大鼠体重及稳定摄食量,改善胃黏膜病变。与CAG组相比,电针足三里组和电针非穴组可降低血清中炎症相关因子（IL-6、TNF-α）含量（P<0.05）。电针足三里组可血清中增加IL-10和PGE2含量（P<0.05）,脑肠肽中Ghrelin、Leptin含量增加（P<0.05）,SS含量减少（P<0.05）,而电针非穴组对CAG大鼠血清中IL-10、PGE2、Ghrelin、Leptin、SS含量未见明显改善（P>0.05）。电针足三里组和电针非穴组胃组织中Ghrelin未见明显局灶性阳性表达,两组均可增加NPY表达。电针足三里组可减少CAG大鼠胃组织中Leptin表达,减少GKN2、LEPR表达（P<0.05）,增加GHSR表达（P<0.05）。电针足三里可减少CAG大鼠下丘脑中NPY、AgRP表达,减少LEPR、GHSR、POMC表达（P<0.05）。电针非穴组对CAG大鼠胃组织中GKN2、LEPR、GHSR表达未见明显改善（P>0.05）,对下丘脑中NPY、AgRP表达未见明显改善,下丘脑中LEPR、GHSR、POMC未见明显改善（P>0.05）。结论:一、摄食紊乱影响CAG“炎-癌”演变期的发生发展;二、在“炎-癌”演变期中情志改变属于危险因素之一;三、CAG大鼠摄食紊乱可能与NPY信号传导异常,或食物摄入与能量消耗失衡相关;四、“炎-癌”演变期阶段,胃黏膜上皮细胞重度异型增生或癌变可能通过周围血管或新生微血管发生血道转移,且GPL期癌细胞浸润基底膜之前即可能发生癌细胞的血道转移;五、Ghrelin与GKN2可能与早期血道转移有关,是“炎-癌”演变期发展及预后的的有效观察指标;六、足三里具有穴位特异性,电针足三里可通过介导摄食相关因子Ghrelin与Leptin及其受体表达,调控下丘脑NPY/AgRP与POMC神经元,稳定摄食,改善CAG大鼠胃黏膜炎症。
智沐君[6]（2020）在《按部选穴针刺对糖尿病胃轻瘫大鼠胃运动调节效应差异及相关机制研究》文中认为目的:本课题以糖尿病胃轻瘫模型大鼠为研究对象,探讨按部选穴针刺对糖尿病胃轻瘫大鼠胃运动的干预效应差异,并从分子生物学、脑功能影像学等角度探讨按部选穴针刺后产生效应差异的物质基础及机制,为按部选穴提供科学依据。方法:以糖尿病胃轻瘫模型大鼠为研究对象,根据选穴部位不同,将大鼠分为正常组、模型组、多潘立酮组、中脘组、胃俞组、内关组、足三里组进行实验,从胃运动的角度,采用SPECT/CT记录评价不同腧穴对糖尿病胃轻瘫模型大鼠胃运动的效应差异;从系统形态学、分子生物学、PET正电子发射断层扫描技术,观察按部选穴针刺对DGP模型大鼠ICCs超微结构、SCF/c-kit信号通路相关蛋白、以及对不同脑区葡萄糖代谢的影响。结果:1.血糖及胃排空结果:与模型组相比,多潘立酮组及4个针灸组均有显着性差异（P<0.05,P<0.01,P<0.001）,组间比较无差异（P>0.05）。胃排空检测中在第30min,模型组与正常组相比有显着性差异（P<0.01）;第40 min和第50min,模型组与正常组相比有显着性差异（P<0.001）,足三里组和模型组相比有显着性差异（P<0.05,P<0.01）;第60min,模型组与正常组相比有显着性差异（P<0.001）,多潘立酮组、内关组及足三里组与模型组相比有显着性差异（P<0.05,P<0.01）。2.胃窦部病理形态结果:模型组较正常组而言,胃窦部肌层平滑肌细胞胞浆染色淡,透亮,有空泡样变;胃窦黏膜层和黏膜下层黏膜腺体细胞排列不整齐,细胞间间隙变大,主细胞数量减少,壁细胞胞浆减少,空泡样变,染色淡,可见血管扩张。多潘立酮组及4个针灸组与模型组相比,显示出胃窦部肌层平滑肌细胞排列相对致密;黏膜层和黏膜下层的黏膜腺体细胞排列相对整齐,主细胞数量相对有所增加,细胞间隙减小,空泡减少,充血减轻。3.胃窦部ICCs超微结构结果:模型组较正常组而言,大鼠胃窦部的ICCs数量较正常组明显减少,且体积有所减少,细胞形态结构不正常。细胞内胞质广泛溶解,出现大量空泡,细胞器减少;线粒体大量减少,出现肿胀甚至空泡化;细胞核内核仁崩解,异染色质边缘化;细胞间连接也有部分破坏。与邻近细胞和周围神经纤维末梢的连接松散,网状结构有不同程度的破坏。多潘立酮组及4个针灸组与模型组相比,大鼠胃窦部的ICCs数量有所增多。细胞形态部分不正常。细胞内存在自噬小体和次级溶酶体;胞质内线粒体丰富,形态基本正常,但部分出现嵴的排列不正常以及肿胀;细胞核内异染色丰富。与邻近细胞和周围神经纤维末梢的连接仍有不同程度的松散,但较模型组有所改善。总体实验组中多潘立酮组形态稍好,其余四个针灸组大致相同,均较模型组好但依然存在大量不正常。4.SCF/c-kit信号通路:（1）胃窦部SCF免疫组化结果:模型组较正常组表达减少,与模型组比较,多潘立酮组、中脘组、胃俞组、内关组、足三里组表达均有不同程度的增加。（2）胃窦部c-kit免疫组化结果:模型组较正常组表达减少,与模型组比较,多潘立酮组、足三里组、中脘组、内关组、胃俞组表达均有不同程度的增加。（3）RT-PCR结果:与正常组相比,模型组大鼠的胃窦中SCF、c-kit mRNA含量较正常组均减少,且差异具有统计学意义（P<0.001）;与模型组相比,多潘立酮组及4个针刺组中SCF mRNA含量均有所增高,只有胃俞组、内关组、足三里组较模型组的增高有统计学差异（P<0.01,P<0.001）;与模型组相比,多潘立酮组及4个针刺组中c-kit mRNA含量均有所增高,只有多潘立酮组较模型组的增高有统计学差异（P<0.05）。（4）ELISA结果:模型组血清SCF含量较正常组有明显降低,且差异具有显着性差异（P<0.001）,多潘立酮组和4个针刺组血清SCF含量较模型组均有不同程度的升高,但变化规律不同,且仅有多潘立酮组与模型组相比有显着性差异（P<0.05）。模型组血清c-kit含量较正常组明显降低（P<0.01）,内关组和胃俞组血清c-kit含量较模型组明显升高（P<0.05）,其余各组血清c-kit含量与模型组比较均有升高,但无显着性差异（P>0.05）。5.血清脑肠肽结果:模型组血清CCK含量较正常组明显升高（P<0.05）,内关组和足三里组血清CCK含量较模型组明显降低（P<0.05,P<0.01）,其余各组血清CCK含量与模型组比较均有升高,但无显着性差异（P>0.05）。模型组血清GAS含量较正常组明显降低（P<0.05）,其余各组血清GAS含量与模型组比较均有升高,但无显着性差异（P>0.05）。模型组血清Ghrelin含量较正常组明显降低（P<0.001）,其余各组血清Ghrelin含量与模型组比较均有升高,但无显着性差异（P>0.05）。模型组血清MTL含量较正常组有所下降,其余各组血清MTL含量与模型组比较均有升高,但无显着性差异（P>0.05）。6.PET/CT结果:（1）模型组与正常组相比,正激活脑区主要集中在下丘脑结节区、脑桥基底部、中脑被盖、中隔区、下丘脑视前区、嗅球、纹状体、视上区、视皮层、嗅结节、脑桥被盖、伏隔核、中脑黑质、延髓、乳头区、终纹床核、大脑脚、眶皮质、丘脑中线核群、第三脑室顶盖细带、丘脑内侧核群、被膜、杏仁核体、胼胝体、背侧大脑脚皮质、前连合、海马、红核、梨状皮质、丘脑外侧核群、齿状回、压后皮质、下边缘皮质、嗅束、嗅皮质、前核群、血管、大脑中动脉、丘脑底核。负激活脑区主要集中在听觉皮层、感觉皮层、嗅觉皮层、颞叶联合皮质、小脑后叶、顶叶皮质后区、小脑核、小脑前叶、岛叶皮质。（2）多潘立酮组能够降低模型组葡萄糖代谢升高的脑区为丘脑外侧核群、纹状体、眶皮质、嗅球、嗅结节、被膜、梨状皮质、前核群、终纹床核、前连合;多潘立酮组能够升高模型组葡萄糖代谢降低的脑区为小脑后叶、小脑核、小脑前叶。（3）中脘组能够降低模型组葡萄糖代谢升高的脑区为延髓、胼胝体、脑桥被盖、纹状体、脑桥基底部、中脑被盖、丘脑内侧核群、中隔区、眶皮质、下丘脑结节区、杏仁核体、视上区;中脘组能够升高模型组葡萄糖代谢降低的脑区为嗅觉皮层。（4）胃俞组能够降低模型组葡萄糖代谢升高的脑区为胼胝体、纹状体、眶皮质、第三脑室、海马、齿状回;胃俞组能够升高模型组葡萄糖代谢降低的脑区为嗅觉皮层、颞叶联合皮质、感觉皮层。（5）内关组能够降低模型组葡萄糖代谢升高的脑区为眶皮质、纹状体、胼胝体、第三脑室、海马、中隔区。（6）足三里组能够降低模型组葡萄糖代谢升高的脑区为胼胝体、海马、纹状体、延髓、视觉皮层、第三脑室、齿状回、脑桥被盖、中隔区、丘脑内侧核群、被膜、杏仁核体、下丘脑结节区;足三里组能够升高模型组葡萄糖代谢降低的脑区为嗅觉皮层、小脑前叶、听觉皮层、颞叶联合皮质。结论:1.按部选穴针刺均能调整糖尿病胃轻瘫高血糖状态,有一定的降糖作用,且对胃排空的作用不同,其中远端取穴足三里和内关对胃排空的促进作用明显,局部取穴中脘与胃俞作用不明显。2.按部选穴针刺对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦部病理形态有一定的改善作用,但远端取穴与局部取穴作用差异不明显。3.按部选穴针刺对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦ICCs超微结构有一定的改善作用,但远端取穴与局部取穴作用差异不明显。4.按部选穴针刺能够提高糖尿病胃轻瘫大鼠SCF/c-kit信号通路相关蛋白含量,起到促进胃运动的作用,但远端取穴与局部取穴作用差异不明显。5.按部选穴针刺能够调整糖尿病胃轻瘫大鼠血清脑肠肽含量,就CCK分泌而言,远端取穴足三里和内关对CCK分泌抑制作用更强,局部取穴中脘与胃俞作用不明显;另外远端取穴与局部取穴对Ghrelin分泌也有不同,远端取穴的促进作用更强。6.按部选穴针刺对糖尿病胃轻瘫大鼠不同脑区葡萄糖代谢中,可以观察到按部选穴针刺不同穴位在干预脑区上存在很大的差别,对模型组葡萄糖代谢降低的脑区有升高作用的区域大多集中在额叶皮质区,对模型组葡萄糖代谢升高的脑区有降低作用的主要集中于大脑边缘系统。7.按部选穴针刺对糖尿病胃轻瘫大鼠胃运动存在效应差异,其中远端取穴对胃运动促进作用更明显,产生效应差异的机制可能是通过对脑区的不同刺激,通过脑肠轴途径作用到胃肠道,调节各类胃运动相关脑肠肽含量,从而起到对胃运动的不同调节作用。
陈旻丹[7]（2017）在《基于脑肠肽调节探讨功能性腹泻脾虚证的现代机理及中药干预作用》文中研究指明功能性腹泻（Functional Diarrhea,FD）属于功能性肠病（Functional Bowel Disorders,FBDs）的一种,而功能性肠病是功能性胃肠病（Functional Gastrointestinal Disorders,FGIDs）表现在中段、下段消化道的肠道紊乱疾病。功能性腹泻是持续地或反复地出现排稀便（糊状便）或水样便,不伴有腹痛或腹部不适症状的综合征,诊断前症状出现至少6个月,近3个月症状符合以上标准。此病发病率较高,没有器质性病变,但产生的长期不适症状严重影响着患者的生活质量。其发病机制尚不明确,临床也缺少针对性的治疗药物。因此研究功能性腹泻的发病机制,寻找有效疗法成为研究热点。中医药干预治疗功能性腹泻有着良好的疗效,在基础研究方面也已成功建立功能性腹泻脾虚证病证结合动物模型,现代研究呈现出从整体水平至细胞水平乃至分子水平不断深入的发展趋势,故本研究在前期整体基础研究之上探索中药干预功能性腹泻脾虚证离体细胞水平的现代机理以及可能的疗效机制。理论研究研究一中医学对功能性腹泻的认识本研究通过从中医学的病名、病因、病机等方面对功能性腹泻进行更深入地认识,将功能性腹泻归于中医脾胃系病证"泄泻"一病,其病因多为感受外邪、饮食所伤、情志失调、禀赋不足、久病脏腑虚弱等,基本病机变化为脾病与湿盛,病位在肠,主病之脏属脾,主病之因为湿。功能性腹泻病程较长,久泄以脾虚为主,治法当以宜健脾。故将功能性腹泻脾虚证作为研究重点,选用参苓白术散加减的脾虚四号方进行治疗研究。研究二功能性腹泻与脾虚证的相关性研究本研究试图从诊断标准、临床症状、病因病机等方面来探讨功能性腹泻与脾虚证的相关性。功能性腹泻临床症状及较长病程与以大便溏泄为主的病程缠绵的脾虚证很是相似,脾虚证与功能性腹泻存在一致性。脾主运化是脾的主要生理功能之一,脾虚运化失司是导致脾虚证的主要原因。而脾虚失化会降低分解吸收精微物质的能力以及化湿能力,从而导致大便稀薄等功能性腹泻的症状,经过分析脾虚湿盛为功能性腹泻的核心病因病机,故本病当从脾论治,运用健脾化湿法。实验研究研究一功能性腹泻脾虚证病证结合动物模型的复制与评价目的成功复制并评价功能性腹泻脾虚证病证结合的动物模型。方法采用高乳糖饲料喂养加水环境小平台站立复合因素造模方法,观察大鼠一般状态、体重、摄食量、进水量,并测得腹泻指数,检测大鼠血清淀粉酶、D-木糖、乳酸含量作为判定功能性腹泻脾虚证动物模型的客观评价参考指标。结果模型组的大鼠出现淡黄色稀样便或水样便,毛发疏松不泽、神疲乏力、倦卧懒动、嗜睡、眯眼拱背、耳色淡暗等脾虚症状;较空白对照组,腹泻指数有非常显着性差异（P<0.01）;体重有非常显着性降低（P<0.01）,体重增长缓慢;摄食量较少;进水量较多;模型组大鼠血清淀粉酶含量降低有非常显着性差异（P<0.01）,D-木糖含量降低有显着性差异（P<0.05）,血清乳酸含量升高有非常显着性差异（P<0.01）。结论已成功复制并评价功能性腹泻脾虚证病证结合的动物模型。研究二功能性腹泻脾虚证模型大鼠离体细胞的制备与原代培养目的成功提取并培养功能性腹泻脾虚证模型离体原代结肠平滑肌细胞以及下丘脑神经细胞。方法运用酶解法提取病证结合动物模型离体原代结肠玉平滑肌细胞以及下丘脑神经细胞。结果空白对照组、模型组结肠平滑肌细胞以及下丘脑神经细胞生长较稳定,状态尚可,可用于后期实验检测。结论已成功提取并培养功能性腹泻脾虚证模型离体原代结肠平滑肌细胞以及下丘脑神经细胞。研究三脾虚四号方含药血清干预功能性腹泻脾虚证模型大鼠离体细胞的作用机制研究目的探讨脾虚四号方含药血清干预功能性腹泻脾虚证模型离体原代结肠平滑肌细胞以及下丘脑神经细胞的治疗作用及可能的疗效机制。方法采用通法制备脾虚四号方含药血清,干预功能性腹泻脾虚证模型离体原代细胞。采用CCK-8法检测脾虚四号方含药血清干预模型离体原代结肠平滑肌细胞以及下丘脑神经细胞后,对其增殖活性的影响;采用ELISA、Real time PCR检测脾虚四号方含药血清干预模型离体原代结肠平滑肌细胞以及下丘脑神经细胞后,对其细胞上清中以及细胞中脑肠肽（CCK、VIP、SS、Ghrelin、SP、CGRP）的含量以及mRNA表达的影响。结果CCK-8结果显示:在结肠平滑肌细胞中,模型组较空白对照组OD值非常显着性降低（P<0.01）,脾虚四号方低、中、高剂量组以及蒙脱石散西药组较模型组OD值非常显着性升高（P<0.01）;在下丘脑神经细胞中,模型组较空白对照组OD值非常显着性降低（P<0.01）,脾虚四号方高剂量组较模型组OD值非常显着性升高（P<0.01）,其余含药血清组有升高趋势。ELISA结果显示:在结肠平滑肌细胞上清中,模型组CCK、VIP、SS、Ghrelin、SP的含量较空白对照组非常显着性降低（P<0.01）CGRP的含量显着性降低（P<0.05）,脾虚四号方含药血清组较模型组其含量非常显着性升高或显着性升高（P<0.01,P<0.05）;在下丘脑神经细胞上清中,模型组VIP、Ghrelin的含量较空白对照组非常显着性降低（P<0.01）CCK的含量显着性降低（P<0.05）,模型组SS、SP、CGRP的含量较空白对照组非常显着性升高（P<0.01）,脾虚四号方含药血清组较模型组CCK、VIP、Ghrelin的含量非常显着性升高（P<0.01）,SS、SP、CGRP的含量非常显着性降低或显着性降低（P<0.01,P<0.05）。Real time PCR结果显示:在结肠平滑肌细胞中,模型组CCK、VIP、Ghrelin、SP、CGRP的mRNA表达较空白对照组非常显着性降低（P<0.01）SS的表达显着性降低（P<0.05）,脾虚四号方含药血清组较模型组CCK、VIP、Ghrelin、SP、CGRP的mRNA表达非常显着性升高或显着性升高（P<0.01,P<0.05）SS有表达升高趋势;在下丘脑神经细胞中,模型组CCK、VIP的mRNA表达较空白对照组显着性降低（P<0.05）Ghrelin有降低趋势,模型组SS、CGRP的mRNA表达较空白对照组非常显着性升高或显着性升高（P<0.01,P<0.05）SP有升高趋势,脾虚四号方含药血清组较模型组CCK的mRNA表达显着性升高（P<0.05）VIP、Ghrelin有升高趋势,SS、CGRP的mRNA表达非常显着性降低或显着性降低（P<0.01,P<0.05）SP有降低趋势。结论模型结肠平滑肌细胞以及下丘脑神经细胞增殖活性较空白对照组显着性降低,而脾虚四号方含药血清能促进模型细胞增殖活性。模型结肠平滑肌细胞以及下丘脑神经细胞脑肠肽的含量及mRNA表达较空白对照组出现异常,而脾虚四号方含药血清能调节影响其异常的含量及mRNA表达。小结综合以上研究结果得出,中医学将功能性腹泻归于脾胃系病证"泄泻"一病,其主要病因病机为脾病与湿盛。功能性腹泻与脾脏密切相关,脾脏病变病证以虚证为主,着重于运化的失常。功能性腹泻与以大便溏泄为主的脾虚证具有一致性,脾虚湿盛为功能性腹泻的核心病因病机。通过成功复制并评价功能性腹泻脾虚证病证结合动物模型,建立起较稳定的病证结合动物模型体外原代结肠平滑肌细胞以及下丘脑神经细胞的分离培养方法。通过检测得知脾虚四号方含药血清能有效促进模型细胞增殖活性,提示其对模型离体原代结肠平滑肌细胞以及下丘脑神经细胞有一定治疗保护作用。脾虚四号方含药血清能影响模型原代细胞脑肠肽含量及mRNA表达,其可能通过升高或降低结肠平滑肌细胞以及下丘脑神经细胞的脑肠肽含量及mRNA表达来改善功能性腹泻脾虚证症状,调节脑肠肽可能是脾虚四号方疗效机制的作用靶点。脑肠肽紊乱与功能性腹泻脾虚证密切相关,脑肠肽失衡可能是脾虚失化脾虚证的现代机理。进行细胞水平的研究不仅拓宽了功能性腹泻脾虚证的现代研究还丰富了脾虚四号方中药干预治疗的发展。
徐燕芳[8]（2017）在《旋覆代赭汤对功能性消化不良大鼠血清中脑肠肽的影响》文中研究表明目的观察旋覆代赭汤对功能性消化不良大鼠治疗作用,并从脑肠肽探讨其对FD作用机制的研究。方法将40只250-300g雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、模型对照组、西药对照组、高、低剂量中药组。中药组予以旋覆代赭汤,西药对照组予以多潘力酮,按“不规则喂养法配合夹尾刺激法”造模14天,建立功能性消化不良大鼠模型,造模结束后,将空白对照组、模型对照组的大鼠每日用生理盐水以等容积2ml/200g灌胃,持续14天。余下的3组,分别为旋覆代赭高、低剂量组、西药组,分别以旋覆代赭汤2ml/200g,多潘力酮2ml/200g灌胃。14天后,再次代谢笼法记录每组大鼠24h的饮食量、饮水量、尿量及体重。检测各组血清GAS、MTL、SS、VIP浓度,血浆NO浓度,以及胃排空率。结果造模14天后功能性消化不良大鼠经过治疗14天后发现,其饮食量,饮水量,体重,尿量均有一定的提高,旋覆代赭汤高剂量组对功能性消化不良大鼠的饮食,饮水量,体重及胃排空的影响更为明显,且优于低剂量组和西药组,但其对排尿量的影响不如西药组。模型组GAS、SS、VIP、NO的浓度均较空白组比较,明显上升（P<0.05）,模型组MTL浓度较空白组比较,其值下降（P<0.05）。旋覆代赭汤高低剂量组与西药组GAS、SS、VIP浓度均较模型组比较,明显下降（P<0.05）,而MTL浓度较模型组比较,其值上升（P<0.05）。其旋覆代赭汤组对GAS水平抑制作用较西药组明显（P<0.05）,且低剂量组优于高剂量组。其旋覆代赭汤高剂量组对MTL的影响作用较西药组明显（P<0.05）。其西药组对SS、VIP抑制作用较旋覆代赭汤组弱（P<0.05）,但高剂量组优于低剂量组。旋覆代赭汤组与西药组对比其NO浓度变化无差异（P>0.05）。模型组胃排空率较空白组下降,旋覆代赭汤对胃排空的作用高剂量组明显优于低剂量组和西药组。结论综上所述,旋覆代赭汤对功能性消化不良大鼠的饮食饮水量体重尿量及胃排空的影响,说明其对功能性大鼠有一定的治疗的作用。功能性消化不良大鼠其GAS、SS、VIP、NO的浓度上升,其MTL浓度下降,而旋覆代赭汤对治疗功能性消化不良大鼠后,其对GAS、SS、VIP有抑制作用,而对MTL有促进作用,但对NO浓度无抑制作用。其作用途径可能与对脑肠肽GAS、SS、VIP、MTL水平的调节有关。
刘晶[9]（2016）在《基于脑肠肽探讨功能性消化不良脾虚证的生物学机制》文中研究指明目的探讨功能性消化不良中医核心证型—脾虚证的生物学机制,进一步阐释并完善中医脾虚证相关理论。方法理论方面,首先对功能性消化不良临床文献进行整理,探讨功能性消化不良中医证型的分布规律,并对出现频次较高的中医证型的症状表现进行分析。挖掘疾病的核心症状。在此基础上,对疾病主症—“胀”,“满”相关文献进行中医古籍整理,梳理“腹胀”的源流及中医病机。同时,对“腹胀”西医文献进行整理,探讨“腹胀”产生的信号通路,寻找其可能的生物学机制。研究还梳理了以“腹胀”,“腹满”为主症的中医疾病源流,寻找最符合腹胀型功能性消化不良的中医病名,并研究此疾病的中医学病机。研究另外对“痞满”相关的方剂及中草药文献进行整理,探讨治疗“痞满”的中医用药规律。进而指导功能性消化不良脾虚证的中医用药。以理论研究为基础,实验方面,首先建立功能性消化不良脾虚证动物模型。运用碘乙酰胺复合小平台劳倦因素造模法,制作功能性消化不良脾虚证动物模型,并观察动物一般状态,体重,饮食情况及胃病理改变,运用糖水偏好试验,球囊试验对功能性消化不良脾虚证进行评价。在模型建立的基础上,运用免疫组化,Elisa, Real-time PCR对大鼠胃,下丘脑及血清中的脑肠肽（Ghrelin, CCK, VIP, SS, SP, CGRP）进行检测。此外,运用中药香砂六君子加减方对模型进行干预,西药多潘立酮作为阳性药物对照。研究期间,记录大鼠饮食情况,并运用糖水偏好试验,球囊试验对药物干预疗效进行评价。同时也运用免疫组化,Elisa, Real-time PCR对各组大鼠胃,下丘脑及血清中的脑肠肽（Ghrelin, CCK, VIP, SS, SP, CGRP）进行检测。结果理论方面,通过对功能性消化不良临床文献进行整理发现,功能性消化不良中医证型出现频次较高的依次为：肝胃不和,脾胃虚弱,寒热错杂,饮食积滞,肝郁脾虚,肝郁气滞,脾胃虚寒,脾胃湿热证,且各中医证型的共有症状为“上腹胀”。以此为切入点,对“胀”,“满”相关文献进行中医古籍整理,研究发现,中医“腹胀”主要由气虚不运,寒,热,湿,痰,食,血积聚腹内而成,病位涉及脾,胃,肝,肾等脏。其形成的生物学机制可与脑肠肽类激素的改变有关。从疾病角度,中医“痞满”的腹胀部位与起病时间与腹胀型功能性消化不良最相似,可以作为此病的中医病名。而“痞满”的病机以脾气虚为本,食欲的减少与否是鉴别“痞满”虚实的标准。而“痞满”治疗方剂中,以理气,益气健脾,燥湿化痰类中药出现频次较高。出现频次最高的药物,与中药成方香砂六君子汤的组成具有高度一致性,因此香砂六君子汤可以作为本病的主方。实验方面,建立的碘乙酰胺及复合小平台模型大鼠,均出现饮食减少,糖水偏好降低,胃敏感性增高。但碘乙酰胺复合小平台组大鼠体重下降明显,并伴有倦怠等精神症状。因此,两模型符合功能性消化不良脾虚证标准,但碘乙酰胺复合小平台组脾虚证表征更加明显。生物学指标方面,Ghrelin, CCK, VIP在两种功能性消化不良脾虚证大鼠胃中分泌减少,循环血及下丘脑中含量亦减少,但下丘脑中mRNA表达水平相反,其原因,可能与循环血中进入下丘脑肽类激素含量减少,引起脑内负反馈调节,从而使模型组中的mRNA表达含量升高有关。另外,SS在两种功能性消化不良脾虚证大鼠胃及下丘脑中分泌增加,循环血中含量增加,并且以单纯施加碘乙酰胺组大鼠增加程度大。研究也发现,复合小平台组大鼠胃内SP及CGRP蛋白升高较为明显,血清中CGRP明显降低,其余无显着性差异。因此,碘乙酰胺及复合小平台大鼠共同表现为具有促进食欲及降低胃壁紧张度作用的脑肠肽Ghrelin, CCK, VIP分泌及循环减少,体内抑制性脑肠肽SS含量增加,这可能是功能性消化不良脾虚证的病机。两脾虚证模型在胃内SP与CGRP蛋白表达的差异,以及SS的表达含量的差异可能是两种脾虚亚型的机制所在。不能食而瘦的脾虚证,以痛阈降低,敏感性相对偏高更显着,不能食而肥的脾虚证,则主要表现为胃肠激素紊乱。对模型施加药物治疗。研究发现,健脾方剂香砂六君子加减方,可增加模型大鼠饮食量。同时,健脾中药还可显着提高组内大鼠糖水消耗率>75%所占百分比。且呈现量效关系。胃肠敏感性方面,健脾中药香砂六君子汤可显着降低模型组大鼠胃高敏感性,呈量效相关性。研究显示,健脾方剂香砂六君子加减方有效改善功能性消化不良脾虚证食少,纳呆,腹胀三大主症。另外,对大鼠毛色不泽,神情倦怠脾虚次症也有改善作用。因此,健脾方剂香砂六君子加减方对功能性消化不良脾虚证有治疗作用,同时也验证了本次研究复制的碘乙酰胺模型以及碘乙酰胺复合小平台模型与功能性消化不良脾虚证动物模型高度一致。在生物学指标方面,健脾方剂香砂六君子加减方可增加Ghrelin, CCK, VIP的分泌,进而升高循环血,及下丘脑中的含量。同时可以降低胃黏膜,血清及下丘脑中的SS蛋白含量。对于SP与CGRP,药物治疗组与碘乙酰胺组之间比较,无显着性差异。而对于以食少而瘦的脾虚证模型一复合小平台模型组,香砂六君子加减方组胃黏膜中SP与CGRP蛋白较模型组降低,其中以SP变化较为明显,但香砂六君子加减方对血清及下丘脑中SP与CGRP改变不明显。研究发现,健脾方剂香砂六君子加减方对脾虚型功能性消化不良具有治疗作用,其作用靶点集中的胃黏膜上,通过调节脑肠肽的生成,进而改善脾虚型功能性消化不良的症状。研究也证明了健脾中药治疗功能性消化不良脾虚证的作用机制与调节脑肠肽的生成有关。结论综合以上研究发现,中医学认为的功能性消化不良以“上腹胀”作为主要症状,而以“上腹胀”作为主要症状的中医病名为“痞满”。“痞满”的病机以脾虚为本,饮食的减少,食欲的减退与否是判定邪实盛衰的标准。根据这一特点,我们建立了功能性消化不良脾虚证动物模型,进而探讨了消化不良型脾虚证的生物学机制。研究发现,碘乙酰胺及复合小平台站立法符合功能性消化不良脾虚证标准,而脑肠肽类激素含量的变化与消化不良型脾虚证密切相关。运用健脾中药对模型反证,发现健脾中药可调整脑肠肽类激素的生成,进而改善脾虚证症状。因此,本研究证明了功能性消化不良脾虚证可能的生物学机制是脑肠肽的改变,表现为具有胃肠促进及抑制作用的脑肠肽失衡。研究成果一定程度上拓宽了传统中医“脾虚”的理论。
刘继东[10]（2016）在《脾气虚证与脾阳虚证模型大鼠脑肠肽及小肠组织cAMP/PKA信号通路比较研究》文中研究表明目的:本实验采用PCR-array方法检测脾气虚证与脾阳虚证模型大鼠小肠组织能量代谢相关基因表达,研究脾气虚证与脾阳虚证大鼠小肠组织内共同变化的能量代谢相关基因并分析其差异表达。选取与能量代谢相关的3种脑肠肽CCK、Ghrelin、VIP,研究其在脾气虚证和脾阳虚证模型大鼠下丘脑及小肠组织中基因及蛋白表达的差异性,并进一步分析c AMP/PKA信号通路在调节脾气虚证与脾阳虚证小肠组织功能程度上的差异性。探讨脾气虚证与脾阳虚证的生物学基础并比较分析证候之间的差异性,以此尝试阐释脾气虚与脾阳虚证候的科学内涵,同时设立四君子汤组、附子理中丸组进行反证,阐明四君子汤及附子理中丸治疗脾气虚证与脾阳虚证的疗效及作用机制。材料与方法:采用随机数字表法将60只SD大鼠分成5组,正常组大鼠20只、脾气虚组大鼠10只（简称气虚组）、脾阳虚组大鼠10只（简称阳虚组）、四君子汤组大鼠10只、附子理中丸组大鼠10只。所有大鼠均于我校动物实验中心适应性饲养1周。正常组大鼠每日自由进食饮水,其余各组大鼠采用饮食不节（过饥过饱）结合劳倦过度（力竭游泳）复合因素复制脾气虚证候模型。大鼠先饱食1d,再禁食2d,均不禁水,3天为一周期,每次饱食后记录进食量,每日35℃-37℃的水温进行力竭游泳。5个周期后脾气虚证模型造模结束并进行模型评价。脾气虚模型大鼠的评价标准:神疲、乏力、皮毛无光泽或枯槁、体重下降。阳虚组和附子理中丸组大鼠在脾气虚证模型基础上加入苦寒泻下的因素（番泻叶）复制脾阳虚模型,两组大鼠每日灌服100%番泻叶水煎剂,早晚各1次,7d后脾阳虚证动物模型造模结束进行模型评价。脾阳虚模型评价标准:脾气虚模型评价标准基础上加入便溏、蜷卧喜扎堆、肛周污秽、体温下降或略有下降。将大鼠外在表现加以量化,采用行为学实验系统观察大鼠5min内的运动距离、运动时间、平均运动速度（运动距离/运动时间）、活动区域、垂直活动次数等指标量化大鼠神疲的症状;采用大小鼠抓力测定仪检测大鼠前肢抓力量化大鼠乏力的症状;检测大鼠大便含水量用以量化大鼠便软或溏;依据记录的体温数据量化蜷卧喜扎堆、体温下降等表现;观察各组大鼠进食量、体重数据变化情况;观察大鼠皮毛状态确定其枯槁或有无光泽程度。依据《中医实验动物模型方法学》中记载脾气虚及脾阳虚模型评定标准确定造模成功后,正常组大鼠继续常规饲养,脾气虚组、脾阳虚组给予等量蒸馏水灌胃,四君子汤组每日灌服四君子丸悬浮液（100g大鼠每日用药量为0.375g）,每日1次,连续1周,附子理中丸组每日灌服附子理中丸混悬液（100g大鼠每日用药量为0.15g）,方法同上。治疗结束后,各组大鼠禁食、自由饮水24小时,大鼠称重,10%水合氯醛腹腔麻醉（3ml/kg体重）。大鼠麻醉后固定于鼠台上,用0.5%碘伏消毒大鼠腹部及颈部皮肤,剪开皮肤及腹膜,取小肠组织用PBS溶液清洗,断头取下丘脑,标本经液氮速冻后置于-80℃冰箱保存备用。采用PCR-array方法检测各组大鼠小肠组织能量代谢相关基因;Elisa方法检测大鼠小肠组织ATP、c AMP、CCK、Ghrelin、VIP含量;Q-PCR方法检测小肠及下丘脑组织PKA、Ghrelin、Ghrelin受体、CCK、CCK受体、VIP、VIP受体的基因表达。Western Blot方法检测小肠组织PKA的蛋白表达。PCR array数据统计在QIAGEN公司提供的PCR array网站上进行统计学分析,通过2-△△Ct计算组间基因的表达差异。倍数≥2或倍数≤0.5表示差异具有统计学意义。实验数据采用spss19.0统计软件对实验数据进行分析,数据经过正态性检验及方差齐性检验,再进行单因素方差分析。结果以均数±标准差（x±s）表示,P<0.05认为有统计学差异。结果:1.“脾气虚”、“脾阳虚”大鼠小肠组织能量代谢相关基因差异性研究统计结果显示:与正常组相比,脾气虚组相关能量代谢基因表达差异具有统计学意义的基因共49个,其中基因表达2倍上调基因共10个;基因表达2倍下调基因共39个;脾阳虚组相关能量代谢基因表达差异具有统计学意义的基因共38个,其中基因表达2倍上调基因共13个;基因表达2倍下调基因共25个。与脾气虚组相比,四君子汤组相关能量代谢基因表达差异具有统计学意义的基因共45个,其中基因表达2倍上调基因共27个;基因表达2倍下调基因共18个。与脾气虚组相比,脾阳虚组相关能量代谢基因表达差异具有统计学意义的基因共48个,其中表达增高2倍差异的基因共33个;表达降低2倍差异的基因共15个。2.“脾气虚”、“脾阳虚”大鼠脑肠肽含量及其受体m RNA的研究2.1各组大鼠CCK及其受体的基因表达统计结果显示:与正常组比较,气虚组与阳虚组大鼠小肠组织CCK含量升高（P<0.05）,小肠及下丘脑CCK及其受体的m RNA表达上调（P<0.05）;与气虚组比较,阳虚组大鼠小肠CCK含量升高（P<0.05）,小肠及下丘脑CCK及其受体的m RNA表达上调（P<0.05）;四君子汤组小肠CCK含量下降（P<0.05）,小肠及下丘脑CCK及其受体的m RNA表达下调（P<0.05）;与阳虚组比较,附子理中丸组小肠CCK含量降低（P<0.05）,小肠及下丘脑CCK及其受体的m RNA表达下调（P<0.05）。2.2各组大鼠Ghrelin及其受体的表达变化统计结果显示:与正常组比较,气虚组与阳虚组大鼠小肠Ghrelin含量下降（P<0.05）,小肠及下丘脑Ghrelin及其受体的m RNA表达下调（P<0.05）;与气虚组比较,阳虚组大鼠小肠Ghrelin含量下降（P<0.05）,小肠及下丘脑Ghrelin及其受体的m RNA表达下调（P<0.05）;四君子汤组小肠Ghrelin含量升高（P<0.05）,小肠及下丘脑Ghrelin及其受体的m RNA表达上调（P<0.05）;与阳虚组比较,附子理中丸组小肠Ghrelin含量升高（P<0.05）,小肠及下丘脑Ghrelin及其受体的m RNA表达上调（P<0.05）。2.3各组大鼠VIP及其受体的表达变化统计结果显示:与正常组大鼠比较,气虚组与阳虚组大鼠小肠VIP含量下降（P<0.05）,小肠及下丘脑VIP及其受体的m RNA表达下调（P<0.05）;与气虚组比较,阳虚组大鼠小肠VIP含量下降（P<0.05）,小肠及下丘脑VIP及其受体的m RNA表达下调（P<0.05）;四君子汤组VIP含量升高（P<0.05）,小肠及下丘脑VIP及其受体的m RNA表达上调（P<0.05）;与阳虚组比较,附子理中丸组VIP含量升高（P<0.05）,小肠及下丘脑VIP及其受体的m RNA表达上调（P<0.05）。3.“脾气虚”、“脾阳虚”证候模型大鼠小肠c AMP/PKA信号通路变化3.1各组大鼠小肠组织ATP、c AMP含量变化统计结果显示:与正常组相比,气虚组与阳虚组大鼠ATP和c AMP蛋白含量均明显下降,差异具有统计学意义（P<0.05）;与气虚组相比,阳虚组大鼠ATP和c AMP蛋白含量下降,四君子汤组大鼠ATP和c AMP蛋白含量升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与阳虚组比较,附子理中丸组大鼠ATP和c AMP蛋白含量升高,且差异具有统计学意义（P<0.05）。3.2各组大鼠小肠PKA蛋白及m RNA的表达统计结果显示:与正常组相比,气虚组与阳虚组大鼠PKA蛋白和m RNA表达均显着下降,差异具有统计学意义（P<0.05）;与气虚组相比,阳虚组大鼠PKA蛋白和m RNA表达下降,四君子汤组大鼠PKA蛋白和m RNA表达升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与阳虚组比较,附子理中丸组大鼠PKA蛋白和m RNA表达升高,且差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.脾气虚与脾阳虚大鼠证候差异性与相关能量代谢基因表达密切相关。2.脾阳虚证模型大鼠下丘脑及小肠组织CCK、VIP、Ghelin等脑肠肽的表达水平较脾气虚证模型大鼠改变更为显着,体现了脾阳虚与脾气虚证候在介导c AMP/PKA信号通路调节能量代谢程度上存在着差异性。3.四君子汤治疗脾气虚证与附子理中丸治疗脾阳虚证与通过CCK、VIP、Ghelin等脑肠肽表达调控c AMP/PKA通路功能密切相关。4.脾气虚证与脾阳虚证下丘脑及小肠组织CCK、VIP、Ghelin等脑肠肽表达差异性及c AMP/PKA通路调控作用程度是二者证候差异性的生物学基础。
二、实验性脾虚大鼠下丘脑SS、MOT、CCK样免疫反应神经元的变化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、实验性脾虚大鼠下丘脑SS、MOT、CCK样免疫反应神经元的变化（论文提纲范文）
（1）胃痛消痞方对FD大鼠脑肠肽相关受体影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验一:胃痛消痞方对FD大鼠胃肠动力的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 实验二:胃痛消痞方对FD大鼠胃窦及下丘脑组织中5-HT、BDNF表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 实验三:胃痛消痞方对FD大鼠胃窦组织中BDNF、5-HT3aR、a-CGRP、GRP39 mRNA及蛋白表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 实验四:胃痛消痞方对FD大鼠下丘脑组织中BDNF、5-HT3aR、a-CGRP、GRP39 mRNA及蛋白表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 功能性消化不良的中医治疗 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（2）慢性胃炎脾虚证相关lncRNA-miRNA-mRNA调控网络研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 脾虚证内涵源流及现代研究进展 |
| 一、前言 |
| 二、脾虚证的中医概念形成源流 |
| 三、脾虚证的现代研究进展 |
| 四、总结与展望 |
| 五、参考文献 |
| 综述二 转录组学在中医证候研究中的应用 |
| 一、前言 |
| 二、转录组学及其检测技术概况 |
| 三、转录组学与中医证候 |
| 四、总结与展望 |
| 五、参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 健康人气虚体质相关差异表达LNCRNA、MIRNA和MRNA研究及CERNA网络调控的构建 |
| 一、背景与目的 |
| 二、资料与方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第二部分 慢性胃炎脾虚证相关差异表达LNCRNA、MIRNA和MRNA研究及CERNA网络调控的构建 |
| 一、背景与目的 |
| 二、资料与方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 结语和展望 |
| 一、脾虚证的潜在生物学机制 |
| 二、本研究的局限性 |
| 三、对中医学现代化研究的思考与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（3）功能性消化不良脾虚证证候及香砂六君子加减方的作用机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 功能性消化不良的研究进展 |
| 1. 功能性消化不良的发病机制 |
| 2. 功能性消化不良的现代医学治疗方法 |
| 3. 功能性消化不良的中医治疗 |
| 4. 功能性消化不良动物模型研究 |
| 5. 小结 |
| 综述二 脑肠肽的研究进展 |
| 1. 脑肠肽的概念 |
| 2. 相关脑肠肽的研究 |
| 3. 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 理论研究 |
| 理论研究一 功能性消化不良的中医理论研究 |
| 1. 功能性消化不良的中医病名 |
| 2. 中医对功能性消化不良症状的认识 |
| 3. 中医对功能性消化不良病因病机的认识 |
| 4. 结论 |
| 理论研究二 香砂六君子加减方治疗功能性消化不良脾虚证的理论研究 |
| 1. 功能性消化不良中医证型的分布情况 |
| 2. 香砂六君子加减方干预功能性消化不良脾虚证的理论与文献依据 |
| 3. 结论 |
| 文献研究 香砂六君子汤治疗功能性消化不良的系统评价 |
| 1 资料和方法 |
| 2 研究结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 结论 |
| 实验研究 |
| 实验研究一 功能性消化不良脾虚证大鼠模型的复制与评价 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 实验研究二 香砂六君子加减方干预功能性消化不良脾虚证大鼠的疗效 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 实验研究三 香砂六君子加减方干预功能性消化不良脾虚证大鼠的生物学基础研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 实验研究四 功能性消化不良脾虚证大鼠胃窦平滑肌细胞的制备与培养 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 实验研究五 香砂六君子加减方药物血清干预功能性消化不良脾虚证大鼠胃窦平滑肌细胞条件的筛选 |
| 1. 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 实验研究六 香砂六君子加减方药物血清干预功能性消化不良脾虚证大鼠离体胃窦平滑肌细胞的生物学基础研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（4）脾气虚证与神经内分泌相关的生化指标的关联性研究概述（论文提纲范文）
| 1 脑肠肽在脾气虚证状态下有明显变化 |
| 1.1 GAS、MOT/MTL、生长素在脾气虚证状态下减少 |
| 1.2 SS、CCK在脾气虚证状态下增加 |
| 1.3 β-EP、VIP、SP在脾气虚证状态下变化不一 |
| 1.4 CGRP、NPY、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、促胰液素(secretin,Sec)、亮氨酸-脑啡肽(leucine-encephalin,L-EK)在脾气虚证状态下的变化有待研究 |
| 2 神经调节相关指标在脾气虚证状态下有不同程度改变 |
| 2.1 自主神经系统功能在脾气虚证状态下出现明显紊乱 |
| 2.2 中枢神经系统功能在脾气虚证状态下出现不同程度紊乱 |
| 2.3 肠神经系统功能在脾气虚证状态下明显受损 |
| 3 下丘脑-腺垂体系统在脾气虚证状态下出现功能紊乱 |
| 4 水盐代谢相关激素及受体在脾气虚证状态下表达改变 |
| 5 其他指标在脾气虚证状态下的改变有待研究 |
| 6 总结与展望 |
（5）基于胃脑相关探讨慢性萎缩性胃炎大鼠“炎-癌”演变期摄食功能变化的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 慢性萎缩性胃炎“炎-癌”演变期概述 |
| 一、CAG“炎-癌”演变期的流行病学及临床表现 |
| 二、CAG“炎-癌”演变期的病理生理学发病机制及目前治疗研究进展 |
| 三、CAG对胃黏膜的影响 |
| 第二节 CAG与摄食功能调控 |
| 一、CAG与进食改变 |
| 二、现代医学对脑肠轴的认识 |
| 三、脑肠肽对胃肠道功能及摄食调节 |
| 四、脑肠肽对胃肠道功能及摄食调节 |
| 五、胃-脑对摄食功能的共同调控作用 |
| 第三节 中医药与CAG |
| 一、中医对CAG的认识 |
| 二、中医药对CAG的治疗现状 |
| 三、足三里与胃-脑的关系 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 情志干预型胃癌前病变大鼠模型的建立及其摄食变化的研究 |
| 一、实验材料与试剂 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、小结与讨论 |
| 第二节 电针足三里对慢性萎缩性胃炎大鼠摄食功能调节机制研究 |
| 一、实验材料与试剂 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、小结和讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（6）按部选穴针刺对糖尿病胃轻瘫大鼠胃运动调节效应差异及相关机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 综述一 针灸治疗糖尿病胃轻瘫的研究概况 |
| 综述二 SCF/c-kit信号通路及ICCs与糖尿病胃轻瘫发病关系的研究进展 |
| 实验研究 |
| 第一章 按部选穴针刺对糖尿病胃轻瘫大鼠胃肠动力的影响 |
| 第二章 按部选穴针刺对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦组织病理形态的影响 |
| 第三章 按部选穴针刺对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦部Cajal间质细胞超微结构的影响 |
| 第四章 按部选穴针刺对糖尿病胃轻瘫大鼠SCF/c-kit信号通路的影响 |
| 第五章 按部选穴针刺对糖尿病胃轻瘫大鼠血清脑肠肽的影响 |
| 第六章 按部选穴针刺对糖尿病胃轻瘫大鼠不同脑区内葡萄糖代谢的影响 |
| 讨论 |
| 1 中医对糖尿病胃轻瘫病因病机的认识 |
| 2 西医对糖尿病胃轻瘫发病机制的研究 |
| 3 糖尿病胃轻瘫动物模型及判定方法 |
| 4 穴位选择依据 |
| 5 实验指标选择依据及效应分析 |
| 6 问题与展望 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（7）基于脑肠肽调节探讨功能性腹泻脾虚证的现代机理及中药干预作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 功能性腹泻中西医研究概况 |
| 1. 功能性腹泻发病机制 |
| 2. 功能性腹泻常见的治疗方法 |
| 3. 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 功能性腹泻相关脑肠肽的研究 |
| 1. 脑肠肽的概念 |
| 2. 相关脑肠肽的研究 |
| 3. 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 理论研究 |
| 研究一 中医学对功能性腹泻的认识 |
| 1. 资料与方法 |
| 2. 中医学对功能性腹泻病名的认识 |
| 3. 中医学对功能性腹泻病位病因病机的认识 |
| 4. 中医学对功能性腹泻治则的认识 |
| 5. 小结 |
| 研究二 功能性腹泻与脾虚证的相关性研究 |
| 1. 资料与方法 |
| 2. 基于临床症状研究两者的相关性 |
| 3. 基于病因病机研究两者的相关性 |
| 4. 小结 |
| 第三部分 实验研究 |
| 研究一 功能性腹泻脾虚证病证结合动物模型的复制与评价 |
| 实验一 复制功能性腹泻脾虚证动物模型 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 实验二 功能性腹泻脾虚证动物模型的评价 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 讨论 |
| 研究二 功能性腹泻脾虚证模型大鼠离体细胞的制备与原代培养 |
| 实验一 模型大鼠离体结肠平滑肌细胞的制备与原代培养 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 实验二 模型大鼠离体下丘脑神经细胞的制备与原代培养 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 讨论 |
| 研究三 脾虚四号方含药血清干预功能性腹泻脾虚证模型大鼠离体细胞的作用机制研究 |
| 实验一 脾虚四号方含药血清的制备 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 实验二 脾虚四号方含药血清对功能性腹泻脾虚证模型大鼠离体细胞增殖活性的影响 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 实验三 脾虚四号方含药血清对功能性腹泻脾虚证模型大鼠离体细胞细胞上清脑肠肽含量的影响 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 实验四 脾虚四号方含药血清对功能性腹泻脾虚证模型大鼠离体细胞的脑肠肽mRNA表达的影响 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1: ELISA浓度标准曲线 |
| 附录2: Real-time PCR实验扩增曲线及溶解曲线 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（8）旋覆代赭汤对功能性消化不良大鼠血清中脑肠肽的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| (一) 实验材料 |
| 1. 实验动物 |
| 2. 实验药品 |
| 3. 实验器材 |
| (二) 实验方法 |
| 1. 动物模型的制备 |
| 2. 动物选择与分组 |
| 3. 实验步骤 |
| 4. 指标的检测 |
| (三) 统计方法 |
| 二、结果 |
| (一) 各组大鼠一般情况对比 |
| (二) 各组大鼠体重变化 |
| (三) 各组大鼠治疗前后饮食量、饮水量及排尿量的比较 |
| (四) 各组大鼠后血清GAS、MTL、SS、VIP浓度的比较 |
| (五) 各组大鼠后血浆NO浓度的比较 |
| (六) 各组大鼠胃排空率的比较 |
| 三、分析与讨论 |
| (一) 中医对功能性消化不良的治疗 |
| (二) 现代医学对功能性消化不良的认识 |
| 1. 脑肠轴与功能性消化不良 |
| 2. 与功能性消化不良相关的脑肠肽 |
| (三) 结果分析 |
| (四) 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图表 |
| 致谢 |
| 文献综述 基于脑肠肽探讨中医治疗功能性消化不良的研究进展 |
| 参考文献 |
（9）基于脑肠肽探讨功能性消化不良脾虚证的生物学机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 功能性消化不良中西医研究概述 |
| 1. 功能性消化不良现代医学研究进展 |
| 2. 功能性消化不良的中医学研究进展 |
| 3. 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 功能性消化不良动物模型及其在中医研究中的应用概述 |
| 1. 动力障碍型模型 |
| 2. 内脏高敏感型 |
| 3. 胃酸刺激型 |
| 4. 其它造模法 |
| 5. 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 理论研究 |
| 研究一 功能性消化不良中医辨证及辨证标准的现代临床文献研究 |
| 1. 资料和方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究二 功能性消化不良腹胀的中西医理论研究 |
| 1. 资料与方法 |
| 2. 讨论 |
| 3. 小结 |
| 参考文献 |
| 研究三 痞满的中医用药规律研究 |
| 1. “痞满”的中医方剂研究 |
| 2. “痞满”的中草药研究 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 研究一 功能性消化不良脾虚证动物模型的建立及评价 |
| 1. 功能性消化不良脾虚证动物模型的复制 |
| 2. 功能性消化不良脾虚证动物模型评价 |
| 3. 数据统计 |
| 4. 实验结果 |
| 5. 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究二 功能性消化不良脾虚证生物学机制的研究 |
| 实验一 相关脑肠肽在大鼠血清中的表达 |
| 1. 实验动物分组及模型复制 |
| 2. 实验试剂 |
| 3. 实验器材 |
| 4. 试剂配制 |
| 5. 实验步骤 |
| 6. 数据处理 |
| 7. 结果 |
| 实验二 相关脑肠肽在大鼠下丘脑及胃中的蛋白表达 |
| 1. 实验动物分组及模型复制 |
| 2. 实验器材 |
| 3. 实验试剂 |
| 4. 试剂配制 |
| 5. 实验步骤 |
| 6. 数据处理 |
| 7. 实验结果 |
| 实验三 脑肠肽相关基因在大鼠下丘脑及胃中的表达 |
| 1. 实验动物及模型复制 |
| 2. 实验仪器 |
| 3. 实验试剂 |
| 4. 主要试剂配制 |
| 5. 实验步骤 |
| 6. 数据处理 |
| 7. 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究三 健脾方剂香砂六君子汤对功能性消化不良脾虚证的治疗作用 |
| 实验一 健脾方剂对功能性消化不良脾虚证模型1的治疗作用 |
| 1. 功能性消化不良脾虚证动物模型的建立 |
| 2. 香砂六君子加减方治疗作用的评价 |
| 3. 数据统计 |
| 4. 实验结果 |
| 实验二 健脾方剂对功能性消化不良脾虚证模型2的治疗作用 |
| 1. 功能性消化不良脾虚证动物模型的建立 |
| 2. 香砂六君子加减方治疗作用的评价 |
| 3. 数据统计 |
| 4. 实验结果 |
| 讨论 |
| 研究四 健脾方剂香砂六君子汤对功能性消化不良脾虚证的治疗机制 |
| 实验一 香砂六君子加减方对血清脑肠肽的影响 |
| 一.香砂六君加减方对功能性消化不良脾虚证模型1血清脑肠肽的影响 |
| 1. 实验动物模型的复制及分组 |
| 2. 实验用药及给药方法 |
| 3. Elisa检测 |
| 4. 检测试剂 |
| 5. 数据统计 |
| 6. 实验结果 |
| 二.香砂六君子加减方对功能性消化不良脾虚证模型2血清脑肠肽的影响 |
| 1. 实验动物模型的复制及分组 |
| 2. 实验用药及给药方法 |
| 3. Elisa检测 |
| 4. 检测试剂 |
| 5. 数据统计 |
| 6. 实验结果 |
| 实验二 香砂六君子加减方对下丘脑及胃中脑肠肽的影响 |
| 一. 香砂六君加减方对功能性消化不良脾虚证模型1胃黏膜及下丘脑中脑肠肽的影响 |
| 1. 实验动物模型的复制及分组 |
| 2. 实验用药及给药方法 |
| 3. 免疫组化检测 |
| 4. 实验试剂 |
| 5. 数据统计 |
| 6. 实验结果 |
| 二. 香砂六君加减方对功能性消化不良脾虚证模型2胃黏膜及下丘脑中脑肠肽的影响 |
| 1. 实验动物模型的复制及分组 |
| 2. 实验用药及给药方法 |
| 3. 免疫组化检测 |
| 4. 实验试剂 |
| 5. 数据统计 |
| 6. 实验结果 |
| 实验三 香砂六君子加减方对胃及下丘脑中脑肠肽相关基因的影响 |
| 一. 香砂六君加减方对功能性消化不良脾虚证模型1组相关脑肠肽基因的影响 |
| 1. 实验动物模型的复制及分组 |
| 2. 实验用药及给药方法 |
| 3. PCR检测 |
| 4. 实验试剂 |
| 5. 数据统计 |
| 6. 实验结果 |
| 二. 香砂六君加减方对功能性消化不良脾虚证模型2脑肠肽相关基因的影响 |
| 1. 实验动物模型的复制及分组 |
| 2. 实验用药及给药方法 |
| 3. PCR检测 |
| 4. 实验试剂 |
| 5. 数据统计 |
| 6. 实验结果 |
| 讨论 |
| 结语 |
| 附录 |
| 附录一 免疫组化实验图片 |
| 附录二 Real-time PCR实验扩增曲线及溶解曲线 |
| 附录三 参考书目 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（10）脾气虚证与脾阳虚证模型大鼠脑肠肽及小肠组织cAMP/PKA信号通路比较研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 脾气虚证与脾阳虚证大鼠小肠组织能量代谢相关基因表达差异性研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 脾气虚证与脾阳虚证大鼠脑肠肽及其受体表达差异性研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 脾气虚证与脾阳虚证大鼠小肠cAMP/PKA信号通路差异性研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附录 综述 |
| 综述一 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
四、实验性脾虚大鼠下丘脑SS、MOT、CCK样免疫反应神经元的变化（论文参考文献）
- [1]胃痛消痞方对FD大鼠脑肠肽相关受体影响的实验研究[D]. 范梦男. 辽宁中医药大学, 2020(02)
- [2]慢性胃炎脾虚证相关lncRNA-miRNA-mRNA调控网络研究[D]. 桑小普. 北京中医药大学, 2020(04)
- [3]功能性消化不良脾虚证证候及香砂六君子加减方的作用机理研究[D]. 戴宁. 北京中医药大学, 2020(04)
- [4]脾气虚证与神经内分泌相关的生化指标的关联性研究概述[J]. 南梦蝶,程诺,贺倩,刘远欧,刘玥芸. 环球中医药, 2020(05)
- [5]基于胃脑相关探讨慢性萎缩性胃炎大鼠“炎-癌”演变期摄食功能变化的研究[D]. 郑嘉怡. 广州中医药大学, 2020(06)
- [6]按部选穴针刺对糖尿病胃轻瘫大鼠胃运动调节效应差异及相关机制研究[D]. 智沐君. 长春中医药大学, 2020(08)
- [7]基于脑肠肽调节探讨功能性腹泻脾虚证的现代机理及中药干预作用[D]. 陈旻丹. 北京中医药大学, 2017(08)
- [8]旋覆代赭汤对功能性消化不良大鼠血清中脑肠肽的影响[D]. 徐燕芳. 浙江中医药大学, 2017(05)
- [9]基于脑肠肽探讨功能性消化不良脾虚证的生物学机制[D]. 刘晶. 北京中医药大学, 2016(08)
- [10]脾气虚证与脾阳虚证模型大鼠脑肠肽及小肠组织cAMP/PKA信号通路比较研究[D]. 刘继东. 辽宁中医药大学, 2016(02)