一、慢性阻塞性肺疾病大鼠模型支气管肺组织细胞间粘附分子1及部分中性粒细胞炎症因子的研究（论文文献综述）
李姝仪[1]（2021）在《ACO疾病动物模型的建立及其潜在机制靶点、候选药物的发现研究》文中提出哮喘-慢性阻塞性肺疾病重叠（Asthma-chronic obstructive pulmonary disease overlap,ACO）是一种严重的临床综合征,指患者同时具有哮喘和COPD疾病临床特征。就单纯哮喘或COPD而言,ACO患者临床症状较为严重、发作次数较为频繁。由此导致了患者生活质量得不到提升、生存周期缩短,对患者生存质量和生命安全的威胁严重,而且,ACO患者的医疗占用率和医疗费用都大幅度上升,这对社会经济与医疗资源都造成了巨大的压力。ACO不仅在其临床诊断和治疗中存在许多困难和不确定性,而且,其治疗药物的筛选与评估尚未起步,特别是其疾病动物模型尚未完全建立,严重影响了其疾病靶点机制揭示和有效药物的发现。因此,基于ACO临床疾病特征,建立ACO疾病动物模型,探索ACO与哮喘、COPD病理机制的共性和异性,对其有针对性治疗药物的开发尤为重要。鉴于此,本论文首先以ACO临床疾病特征为导向,采用OVA、LPS和香烟烟雾等哮喘和COPD模型条件叠合,诱导建立了 ACO炎症小鼠模型;进一步采用RNA-seq检测技术,探讨了 ACO与哮喘、COPD小鼠肺组织基因表达的差异,发现ACO炎症的潜在机制靶点;同时,基于天然来源化合物白藜芦醇在疾病治疗中的广泛研究,以及团队前期对其二聚体来源化合物在哮喘和COPD气道炎症研究中发现的良好疗效,采用网络药理学方法,挖掘白藜芦醇疾病靶点的文献数据,创建白藜芦醇-疾病-靶点网络,探究此类药物在ACO中的潜在作用靶点,与RNA-seq组学研究结果结合,探寻该类化合物在ACO中的潜在机制靶点;并进一步参照白藜芦醇二聚体化学结构特性,合成全新了 3-芳基苯并呋喃衍生物EAPP-2,对其治疗ACO炎症的作用及潜在机制靶点进行初步研究。现将主要研究结果总结如下:1.基于ACO临床疾病特征,采用OVA、LPS和香烟烟雾等哮喘和COPD模型条件叠合,建立了与ACO临床基本特征相吻合的小鼠模型,模型小鼠在肺组织病理学变化、肺泡灌洗液中炎症因子水平等方面显示出哮喘和COPD重叠特征,较好的模拟了 ACO的部分临床病理特征。该模型可为ACO的病理机制研究和潜在候选药物的筛选与评价提供工具。2.采用RNA-seq检测技术,发现ACO小鼠肺组织中的基因表达差异。研究结果发现了 ACO小鼠潜在的6324个差异表达基因,其中下调基因2717个（42.7%）,上调基因3607个（57.3%）,具有肺炎、肺纤维化、慢性阻塞性气道疾病、肺肿瘤、类风湿性关节炎等基因谱特征,符合ACO临床特征;而且,ACO肺部炎症和纤维化的潜在分子机制主要与HLA-DRA、SYK、CTLA4、VAV1、NRAS和JAK3信号通路有关。该研究结果为ACO的机制研究及其药物发现提供基础思路和依据。3.基于白藜芦醇疾病治疗潜在靶点的文献报道数据,借助网络药理学举措,构建白藜芦醇-疾病-靶点网络,除此之外,通过GO富集分析与KEGG通路分析,明确其关键信号通路及分子机制,发现了与其相关的STAT3、AKT1、SRC、JAK和VEGFA等靶点,以及T细胞受体、MAPK、Toll样受体、FcεRI、TNF等多个信号通路。该研究结果挖掘发现了白藜芦醇等二苯乙烯类化合物在呼吸系统疾病中的潜在靶点,为该类化合物的改构优化及其在呼吸系统疾病中的开发研究提供启示。4.基于上述研究结果,对3-芳基苯并呋喃衍生物EAPP-2抗ACO气道炎症作用及作用机制进行研究。研究结果显示,EAPP-2体内能显着抑制ACO小鼠炎症疾病特征,显着减少ACO小鼠肺部炎症细胞浸润、改善肺组织的炎性病理变化、降低肺泡灌洗液中炎症细胞和炎症因子的水平、减少外周血中总IgE和IgG1的生成,以及在体外有效抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应。而且,EAPP-2能显着减少ACO气道炎症小鼠肺组织和LPS诱导的RAW264.7细胞中Syk、NF-κB蛋白的表达及磷酸化以及NLRP3和iNOS蛋白的表达,结果提示,EAPP-2的抗ACO炎症作用可能部分是通过抑制Syk的表达和磷酸化,从而抑制NF-κB和NLRP3通路实现的。该研究结果为EAPP-2在ACO治疗中的开发提供初步依据,且可为以Syk为靶点的ACO治疗药物发现提供参考。
李健[2]（2021）在《PPARγ参与有氧运动调控chemerin改善COPD膈肌功能障碍的机制研究》文中研究指明研究目的慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种常见的高发的慢性系统性疾病,除对肺局部的损伤外,COPD还能造成多种肺外损伤,其中膈肌功能障碍是造成呼吸功能衰退的重要因素。系统性炎症是COPD膈肌功能障碍的关键环节。运动训练是目前COPD膈肌功能障碍康复治疗的有效手段,而运动对炎症反应的调节作用也成为其改善膈肌功能障碍的作用途径之一,然而这一作用的具体机制目前还尚未阐明。近来,脂肪因子在机体中的生物学效应引起了诸多关注,其中chemerin与COPD间的紧密关系也被逐步证实,chemerin是COPD炎症反应不可或缺的一环。运动对chemerin/CMKLR1信号轴的调控效应在其他研究中已被证实,但目前对运动调控chemerin/CMKLR1轴的上游信号仍无明确定论。研究显示,在肥胖与糖尿病模型中PPARγ被证实是运动调控chemerin/CMKLR1的上游信号,参与运动改善糖脂代谢过程,而PPARγ的药理性配基也被用于COPD患者的临床管理中。但对于COPD膈肌功能障碍而言,PPARγ是否是运动调控chemerin/CMKLR1改善COPD膈肌功能障碍的上游信号尚不清楚,且值得探讨。研究方法第一部分实验:运动对COPD大鼠膈肌功能障碍和对PPARγ-chemerin/CMKLR1通路及其下游炎性因子的影响两月龄雄性SD大鼠32只,随机分为空白对照组（CG）、模型对照组（MG）、有氧运动组（AEG）和抗阻运动组（REG）,每组8只。MG、AEG和REG采用香烟烟雾暴露法建立COPD大鼠模型;模型建立后,AEG和REG分别接受为期9周的有氧运动训练或抗阻运动训练;有氧运动采取游泳的方式进行;抗阻运动采用爬梯运动。MG在运动干预期间自由活动,CG在整个研究过程中均不接受任何干预。实验过程中每月检测大鼠体重。运动训练结束后对大鼠肺功能、膈肌功能进行检测;取材后对大鼠肺与膈肌HE染色观察组织结构变化;Western blot法检测大鼠膈肌中PPARγ、chemerin、CMKLR1、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、atrogin-1、Mu RF1以及Myo D1的蛋白表达情况。第二部分实验:机械牵拉对LPS诱导炎症环境下L6细胞增殖水平及PPARγ-chemerin/CMKLR1通路及下游因子的影响1.筛选能诱导L6成肌细胞低增殖活性的LPS浓度将L6细胞接种于96孔板中,37℃培养箱中培养24 h,分别设置不同浓度的LPS培养孔,每个浓度设置6个复孔,每孔添加10μL不同浓度LPS溶液,37℃细胞培养箱中培养24 h。CCK-8检测细胞增殖水平。2.机械牵拉对LPS诱导炎症环境下L6细胞的增殖水平影响将L6细胞随机分为空白对照组（CG）、LPS对照组（LG）和LPS牵拉组（LSG）,LSG在Flexcell牵拉装置接受拉伸强度为15%,频率为0.5 Hz,持续时间为6 h的周期性机械牵拉。CG与LG在相同条件下培养,不予以细胞牵拉刺激。牵拉结束后24 h,CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性;收集细胞,Western blot法检测各组细胞中PPARγ、chemerin、CMKLR1、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、atrogin-1、Mu RF1以及Myo D1的蛋白表达情况。第三部分实验:PPARγ在机械牵拉调控chemerin/CMKLR1信号促LPS诱导炎症环境下L6细胞增殖中的作用1.筛选GW9662与罗格列酮溶液影响炎症环境下L6成肌细胞增殖水平的适宜浓度L6成肌细胞接种在96孔板中,贴壁后加入LPS溶液,继续培育24 h,将细胞随机分成10组,包括LPS对照组、DMSO对照组以及4种浓度梯度的罗格列酮和GW9662各自4组细胞;加入药物培养24 h后CCK-8试剂盒检测各组别细胞的增殖活性。2.调节PPARγ蛋白表达对机械应力提升炎症培养环境下L6成肌细胞活性以及PPARγ-chemerin/CMKLR1信号的影响将L6细胞随机分为空白对照组（CG）,LPS对照组（LG）,罗格列酮对照组（RG）,罗格列酮+牵拉组（RSG）,GW9662对照组（GWG）,GW9662+牵拉组（GSG）;两组牵拉组在Flexcell牵拉装置中进行机械牵拉干预,所有对照组在相同环境中培养,不予细胞牵拉刺激。牵拉结束后24 h进行指标检测,指标同第二部分。研究结果1.运动对COPD大鼠膈肌功能障碍和对PPARγ-chemerin/CMKLR1通路及其下游炎性因子的影响（1）相较MG,AEG大鼠肺功能与膈肌功能显着提升（p<0.05）,膈肌组织结构改善;REG大鼠肺功能同样提升（p<0.05）,但膈肌功能改善不明显。（2）相较MG,AEG和REG大鼠膈肌PPARγ蛋白表达上调明显（p<0.05）,且AEG大鼠膈肌chemerin/CMKLR1信号抑制（p<0.05）;但REG大鼠膈肌chemerin/CMKLR1信号变化不明显。（3）相较MG,AEG大鼠膈肌中IL-8的表达被显着抑制（p<0.05）,并且IL-1β和IL-6表达有下降但不具有统计学意义;REG大鼠膈肌中炎症因子变化不明显。（4）AEG大鼠膈肌Myo D1的表达相较MG上升（p<0.05）,atrogin-1和Mu RF1的表达有下降但不具有统计学差异;REG大鼠膈肌Mu RF1的表达被抑制（p<0.05）。2.机械牵拉对LPS诱导炎症环境下L6细胞增殖水平及PPARγ-chemerin/CMKLR1通路及下游因子的影响2.1诱导L6成肌细胞低增殖活性的适宜LPS浓度浓度为2 mg/ml、5 mg/ml以及10 mg/ml LPS溶液能对细胞增殖水平呈抑制作用,经过筛选后,在本次研究的后续部分均采用了2 mg/ml这一浓度作为LPS刺激浓度。2.2机械牵拉对炎症环境下L6细胞的增殖水平影响（1）LG细胞较CG细胞增殖水平下降（p<0.05）,LSG较LG细胞增殖活性显着上升（p<0.05）。（2）LSG细胞相较LG和CG,其细胞PPARγ蛋白的表达水平显着上升（p<0.05）,且细胞中CMKLR1蛋白的表达下降但不具有统计学差异。（3）LG细胞中IL-1β和TNF-α的蛋白水平相较CG上升明显（p<0.05）,而经机械牵拉后的LSG细胞的上述炎症因子水平则显着下降（p<0.05）。（4）LG细胞atrogin-1表达水平较CG显着上升,细胞牵拉后有降低但未呈现统计学差异;各组细胞Mu RF1表达也呈类似趋势;Myo D1的表达在LG呈下降,在LSG上升,但均未产生统计学差异。3.PPARγ在机械牵拉调控chemerin/CMKLR1信号促LPS诱导炎症环境下L6细胞增殖中的作用3.1 GW9662与罗格列酮溶液影响炎症环境下L6成肌细胞增殖水平的适宜浓度50μM的GW9662呈现抑制炎症环境中L6细胞增殖活性的趋势,而10μM和50μM的罗格列酮溶液呈现提升炎症环境中L6细胞的增殖活性的趋势。3.2机械牵拉联合罗格列酮或GW9662对LPS诱导炎症培养环境下L6成肌细胞活性以及PPARγ-chemerin/CMKLR1信号的影响（1）单独罗格列酮/GW9662即可发挥对L6细胞增殖活性的促进/抑制作用（p<0.05）;GSG相较GWG,L6细胞的增殖水平上升（p<0.05）;RSG相较RG,L6细胞的增殖水平也进一步提升（p<0.05）。（2）RG细胞PPARγ蛋白被激活,与GWG、GSG相较明显上升（p<0.05）;RSG蛋白表达水平最高,与CG、LG、GWG以及GSG间均形成显着差异（p<0.05）。RG和RSG中的CMKLR1表达下降,与LG相较差异显着（p<0.05）。（3）RSG细胞IL-1β较GWG显着下降（p<0.05）;相较LG,GWG、RG和RSG细胞中IL-6明显下降（p<0.05）;LG、GWG、GSG和RG细胞中TNF-α相较CG明显上升（p<0.05）,RSG细胞中TNF-α的蛋白表达较LG和GWG下降低明显（p<0.05）。（4）RG细胞atrogin-1和Mu RF1表达被明显抑制（p<0.05）;RSG细胞中Mu RF1的表达呈现明显抑制效应（p<0.05）;GSG、RG和RSG细胞的Myo D1表达上升但未形成统计学差异。结论1.COPD大鼠存在膈肌功能障碍,有氧运动具备更加有效的COPD肺功能、膈肌功能的康复效果;运动能上调膈肌PPARγ蛋白的表达,抑制chemerin/CMKLR1信号,降低膈肌IL-8及TNF-α的水平,调节膈肌蛋白降解/生长失衡状态。2.适宜浓度LPS能诱导L6细胞低增殖活性。机械牵拉能提升LPS环境下培养的L6细胞的增殖活性,并且可以激活细胞中PPARγ蛋白,在一定程度上影响chemerin/CMKLR1信号表达,抑制细胞中IL-1β和TNF-α的蛋白水平,影响E3连接酶及其底物的表达。3.外源性增强PPARγ信号联合机械牵拉可以增强L6细胞的活性,抑制chemerin/CMKLR1信号及IL-6、TNF-α的表达,并进一步抑制肌细胞蛋白降解因子atrogin-1和Mu RF1的表达;相反,抑制PPARγ信号,上述影响被抑制。综上,本次研究从体内和体外实验两方面证实了PPARγ在运动调控chemerin/CMKLR1信号改善COPD膈肌功能障碍中的作用。
蔡甜甜[3]（2021）在《健脾益肺Ⅱ号治疗慢阻肺临床疗效及减轻香烟暴露联合流感病毒感染小鼠肺炎症作用研究》文中认为目的:1.通过一项探索性临床研究,采用随机、双盲安慰剂对照临床试验方法,观察健脾益肺Ⅱ号方中医药早期干预治疗COPD的有效性和安全性,探讨中医药早期干预能否延缓COPD病情进展,避免或减少急性加重的发生,为中医药防治COPD提供循证医学依据,为进一步研发针对COPD的中药新药提供临床研究基础。2.通过观察香烟暴露对呼吸道病毒感染后小鼠宿主免疫应答的影响,以及呼吸道病毒感染在诱发COPD急性加重过程中的免疫病理改变,建立符合慢阻肺急性加重的急性气道炎症模型,为后续中药减少病毒感染诱发慢阻肺急性加重的药理学研究提供实用性工具。3.利用熏烟联合流感病毒感染的小鼠动物模型,以健脾益肺Ⅱ号减少急性加重为出发点,探讨健脾益肺Ⅱ号减少熏烟联合流感病毒感染小鼠肺部炎症的主要环节和作用机制,探讨中医培土生金法的现代科学内涵,为研发针对预防COPD急性加重的药物提供研究基础。方法:1.随机对照探索性临床试验:健脾益肺Ⅱ号治疗COPD稳定期Ⅰ-Ⅱ级探索性临床研究探索性临床研究,采用随机双盲安慰剂平行对照研究方法,纳入符合COPD稳定期Ⅰ-Ⅱ级患者,采用健脾益肺Ⅱ号与健脾益肺Ⅱ号安慰剂进行疗效比较,随机分为治疗组和安慰剂组,治疗组给予健脾益肺Ⅱ号方颗粒剂,每日1剂,分成2袋,每次1袋,1天2次;安慰剂组给予健脾益肺Ⅱ号方安慰颗粒剂,每日1剂,分成2袋,每次1袋,1天2次。筛查期2周,治疗12周,随访12周。记录并测定两组患者治疗前后组间急性加重频次以及急性加重发生率,并且评估组间治疗前后肺功能、SGRQ、CAT量表、mMRC评分、BODE指数改变情况,探索健脾益肺Ⅱ号方干预治疗COPD的疗效并观察药物使用的安全性,探讨中医药干预能否延缓COPD病情进展,避免或减少急性加重的发生,为中医药防治慢阻肺提供循证医学依据。2.基础研究:健脾益肺Ⅱ号方减轻香烟暴露联合病毒感染小鼠肺部炎症的主要环节和作用机制（1）香烟暴露对低剂量流感病毒诱导的气道免疫细胞的影响选取SPF级雌性Balb/c小鼠,随机分成4组:假熏烟假攻毒组,熏烟假攻毒组,假熏烟攻毒组,熏烟联合攻毒组。第1-4天对小鼠进行熏烟处理,3次/天,每次3支香烟,烟雾用60ml注射器注入熏烟箱中。于9am,12am,3pm进行,每次1h;第5天进行攻毒,用1ml注射器共抽取2ml异氟烷均匀洒在麻醉瓶中,随后将小鼠置于麻醉瓶中旋紧瓶盖,待小鼠出现深快呼吸后取出,迅速向小鼠鼻内滴注PR8病毒30ul/只。假熏烟小鼠放入另一干净且相同大小的塑料箱内,不做熏烟处理;假攻毒组鼻内滴注MEM培养基30ul/只,其余操作同上,分别观察攻毒后5天小鼠变化。第10天取材留取小鼠支气管肺泡灌洗液,检测细胞计数和细胞分类计数:留取小鼠肺组织用实时定量PCR法检测小鼠肺组织细胞因子、趋化因子、金属蛋白酶、病毒复制水平及干扰素mRNA表达水平。（2）健脾益肺Ⅱ号方对香烟暴露、低剂量流感病毒感染及二者联合诱导的气道免疫细胞的影响选取SPF级雌性Balb/c小鼠,随机分成8组:分别为假熏烟假攻毒组;假熏烟假攻毒+JPYFⅡ治疗组;假熏烟攻毒组;假熏烟攻毒+JPYFⅡ治疗组;熏烟假攻毒组;熏烟假攻毒+JPYFⅡ治疗组;熏烟联合攻毒组;熏烟联合攻毒+JPYFⅡ治疗组,每组10只。熏烟、攻毒方法同上。药物干预组,造模方法同熏烟联合攻毒组,从第1天开始进行药物干预,连续给药10天。第10天部分进行小鼠肺功能检测;其余小鼠取材,留取小鼠支气管肺泡灌洗液,用于检测细胞计数和细胞分类计数;留取小鼠肺组织实时定量PCR法检测各组肺组织细胞因子、趋化因子以及金属蛋白酶、病毒NP以及干扰素mRNA表达情况;化学发光法检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液ROS的产生,Western Blot法检测各组小鼠肺组织gp91和HO-1的蛋白表达;病毒空斑实验观察健脾益肺Ⅱ号方对小鼠病毒载量的影响;以及观察健脾益肺Ⅱ号方对小鼠肺功能的影响。（3）熏烟期间给药对熏烟联合低剂量流感病毒感染小鼠持续预防作用的研究选取SPF级雌性Balb/c小鼠60只,随机分成6组:分别为假熏烟假攻毒组;熏烟联合攻毒（3天）组;熏烟联合攻毒（3天）+PYFⅡ治疗组;假熏烟假攻毒组;熏烟联合攻毒（5天）组;熏烟联合攻毒（5天）+JPYFⅡ治疗组;每组10只。熏烟联合攻毒组第1-4天进行熏烟处理,第5天进行攻毒,分别观察攻毒后3天和5天小鼠情况。熏烟联合攻毒+JPYFⅡ治疗组,造模方法同前,从第1天开始进行药物干预,连续给药5天。假熏烟假攻毒组,标准饲养8、10天,不做任何干预。留取小鼠支气管肺泡灌洗液,用于检测细胞计数和细胞分类计数;Real-time PCR法检测肺组织中细胞因子、病毒复制水平,观察健脾益肺Ⅱ号方对熏烟联合病毒感染小鼠持续预防作用。结果:1.临床研究:本次探索性临床试验共入组慢阻肺患者62例,纳入全分析集患者共62例,治疗组和安慰剂组各31例,其中安慰剂组脱落2例。对比治疗组和安慰剂组两组患者性别、年龄,体重指数,两组患者慢阻肺严重程度,包括两组患者基线时CAT、SGRQ、mMRC、BODE指数、6WMT;以及慢阻肺基线肺功能情况,包括舒张前后FEV1、FVC的情况。经过治疗组和安慰剂组的基线情况比较,两组间各指标差异均无统计学意义,具有可比性（P>0.05）。治疗组较安慰剂组可显着性降低患者CAT评分（P<0.05）、SGRQ评分（P<0.05）、mMRC评分（P<0.05）,减少慢阻肺急性加重发生频次（P<0.05）,一定程度降低急性加重发生率（P>0.05）;治疗组对运动耐力具有一定程度的改善作用,但治疗后在BODE指数改善与安慰剂比较无显着性差异（P>0.05）。对于肺功能改善方面,与安慰剂相比,健脾益肺Ⅱ号颗粒剂对于舒张后FVC和舒张后FEV1/FVC具有改善趋势,但组间差异无统计学意义（P>0.05）。治疗组和安慰剂组都有不良事件发生,但两组患者不良事件发生率均较低,且与用药无因果关系。2.基础研究:（1）香烟暴露对低剂量流感病毒诱导的气道免疫细胞的影响①熏烟、病毒感染及熏烟联合流感病毒感染对小鼠支气管肺泡灌洗液中细胞计数的影响攻毒5天后,与假熏烟假攻毒组相比,熏烟假攻毒组、假熏烟攻毒组小鼠支气管肺泡灌洗液细胞总数、巨噬细胞均显着性增多（P<0.05）;熏烟联合攻毒组小鼠细胞总数、中性粒细胞数较假熏烟假攻毒与熏烟假攻毒组显着性升高（P<0.05）;熏烟联合攻毒组小鼠支气管肺泡灌洗液细胞总数、巨噬细胞数较假熏烟假攻毒组与假熏烟攻毒组显着性增多（P<0.05）。②熏烟、病毒感染及熏烟联合流感病毒感染对小鼠肺组织中炎症因子、趋化因子、金属蛋白酶及对支气管肺泡灌洗液ROS产生的影响与假熏烟假攻毒组相比,假熏烟攻毒组小鼠肺组织中IL-6表达水平显着性升高（P<0.01）;与熏烟假攻毒组相比,假熏烟攻毒组小鼠肺组织IL-6、MMP12表达显着性增多（P<0.05）;与熏烟假攻毒组、假熏烟攻毒组相相比,熏烟攻毒组小鼠肺组织MMP12表达水平显着性升高（P<0.01）。假熏烟攻毒组、熏烟攻毒组小鼠支气管肺泡灌洗液R0S产生速率较假熏烟假攻毒与熏烟假攻毒组显着性升高（P<0.05）;与假熏烟攻毒组相比,熏烟联合攻毒组小鼠支气管肺泡灌洗液R0S产生速率显着性升高（P<0.05）。熏烟攻毒小鼠肺组织CXCL1、CXCL5、CCL2表达水平较假熏烟假攻毒与熏烟假攻毒组显着性升高（P<0.05）;与假熏烟攻毒组相比,熏烟攻毒组小鼠肺组织CXCL5表达水平显着性升高（P<0.01）。③熏烟、病毒感染及熏烟联合流感病毒感染对小鼠肺组织肺部病毒复制水平及干扰素表达的影响与熏烟假攻毒组相比,假熏烟假攻毒组、假熏烟攻毒组、熏烟联合攻毒组小鼠肺组织IFN α、IFN β表达水平有显着性升高（P<0.05）。熏烟联合攻毒组小鼠肺组织Influenza matrix、NP表达水平较假熏烟假攻毒与熏烟假攻毒组均显着性升高（P<0.05）。（2）健脾益肺Ⅱ号方对香烟暴露、低剂量流感病毒感染及二者联合诱导的气道免疫细胞的影响①健脾益肺Ⅱ号可减轻熏烟联合流感病毒诱导的气道炎性细胞浸润与熏烟联合攻毒组相比,健脾益肺Ⅱ号可显着性减少小鼠细胞总数、中性粒细胞数（P<0.01）。②健脾益肺Ⅱ号可降低香烟暴露、低剂量流感病毒感染及二者联合诱导的肺组织炎症因子、趋化因子及金属蛋白酶表达与熏烟攻毒组相比,健脾益肺Ⅱ号可显着性降低小鼠肺组织IL-6、CXCL1、CXCL2表达水平（P<0.05）,也可降低小鼠肺组织CXCL5、CCL2表达,但无统计学差异（P>0.05）。③健脾益肺Ⅱ号方可减轻香烟暴露、低剂量流感病毒感染及二者联合诱导的肺部氧化应激攻毒5天后,与熏烟联合攻毒组相比,健脾益肺Ⅱ号可显着降低小鼠支气管肺泡灌洗液中ROS表达水平,可显着性降低熏烟联合攻毒小鼠肺组织HO-1、gp91的表达水平（P<0.05）。④健脾益肺Ⅱ号可减少香烟暴露、流感病毒感染及二者联合小鼠肺部病毒复制水平及干扰素表达病毒空斑实验发现,与熏烟联合攻毒组相比,健脾益肺Ⅱ号可显着性降低熏烟联合攻毒小鼠病毒载量（P<0.05）。与熏烟联合攻毒组相比,健脾益肺Ⅱ号可显着性降低小鼠肺组织NP表达水平（P<0.01）。⑤健脾益肺Ⅱ号方增加香烟联合流感病毒感染小鼠吸气量（IC）和用力肺活量（VC）小鼠肺功能实验发现,与假熏烟假攻毒组相比,熏烟联合攻毒组小鼠功能残气量FRC有显着性升高（P<0.01）;与熏烟联合攻毒组相比,健脾益肺Ⅱ号可显着性升高小鼠IC深吸气量、VC肺活量（P<0.05）。（3）熏烟期间给药对熏烟联合低剂量流感病毒感染小鼠持续预防作用的研究①健脾益肺Ⅱ号对熏烟联合病毒感染小鼠支气管肺泡灌洗液细胞总数持续作用的影响健脾益肺Ⅱ号未能降低熏烟联合攻毒小鼠支气管肺泡灌洗液细胞总数,与之前结果相反,健脾益肺Ⅱ号增加了攻毒后第5天细胞总数的数量。②健脾益肺Ⅱ号对熏烟联合病毒感染小鼠肺组织炎症因子、Influenza matrix持续作用的影响与熏烟联合攻毒组相比,感染前给予健脾益肺Ⅱ号未能改善感染后第3天和第5天免疫细胞浸润与炎症因子的表达。与之前结果相反,健脾益肺Ⅱ号增加了攻毒后第5天小鼠肺组织IL-1 β和IL-6的表达水平。结论:1.本研究为一项随机、双盲安慰剂对照的探索性临床研究,通过观察健脾益肺Ⅱ号对急性加重发生的影响,发现健脾益肺Ⅱ号颗粒剂可减少患者急性加重的频次,提高早期慢阻肺患者生活质量、改善临床症状,疗效优于安慰剂,且具有良好的安全性。早期对COPD患者进行干预,特别是稳定期有效干预,将改善患者生存质量,是减少COPD急性加重的重要手段,对于延缓疾病进展以及减轻患者经济负担具有重要的意义。本研究证实健脾益肺Ⅱ号可减少慢性肺病人急性加重,基于这一发现我们对健脾益肺Ⅱ号在减少慢阻肺急性加重发生方面的潜在作用机制将进行深入探讨。2.香烟暴露联合低剂量流感病毒感染会增加小鼠支气管肺泡灌洗液炎症细胞数量,尤其是诱导小鼠气道以巨噬细胞和中性粒细胞增多为主的气道炎症,伴随急性炎症因子升高,过氧化物的增多和金属蛋白酶表达升高,且气道炎症浸润、氧化应激、金属蛋白酶以及肺部病毒载量水平明显高于单纯熏烟或单纯病毒感染小鼠。本研究一方面明确了香烟烟雾暴露和流感病毒感染是小鼠发生气道炎症重要的致病因素,初步探讨了香烟暴露对病毒诱导气道炎症的影响;另一方面通过熏烟联合病毒感染,成功建立了慢阻肺气道炎症模型,为后续中药减少病毒感染诱发慢阻肺急性加重的药理学研究提供实用性工具。3.健脾益肺Ⅱ号方减少了熏烟联合病毒感染小鼠气道炎症细胞的浸润,尤其中性粒细胞下调明显,并可抑制熏烟联合病毒感染小鼠促炎细胞因子、趋化因子的表达,减少了肺组织免疫细胞的募集,对氧化应激起到了抑制作用,并可减少流感病毒的复制。表明健脾益肺Ⅱ号方对熏烟联合病毒感染小鼠肺部炎症、氧化应激具有抑制作用,可能与健脾益肺Ⅱ号方的抗病毒作用密切相关。从而可保护小鼠肺组织免受病毒感染所引起的炎症攻击,可能具有治疗流感病毒诱发慢性阻塞性肺疾病急性加重的作用。4.健脾益肺Ⅱ号方未能在熏烟阶段通过改善肺部损伤及炎症状态,从而减少病毒诱导的急性炎症;健脾益肺Ⅱ号方减少流感病毒诱导的熏烟小鼠气道炎症和氧化应激的主要环节可能在于流感病毒感染阶段;此外单纯的抗病毒作用,可能不足以改善病毒诱导的熏烟小鼠肺组织急性炎症。
高云[4]（2021）在《金丝桃苷对PM2.5诱导的气道损伤及COPD急性加重的保护作用和机制研究》文中提出PM2.5是造成全球疾病的主要危险因素之一。PM2.5的主要成分多环芳烃（PAHs）与呼吸系统疾病的发病率和死亡率有关,气道上皮是空气和肺组织之间宿主防御的第一道屏障,它极易受到有害物质（例如香烟烟雾或PM2.5）的刺激和破坏。截至目前,PM2.5致肺损伤的机制包括氧化应激、炎症机制、细胞自噬和细胞凋亡等。在各种病理生理条件下,自噬的异常水平可能与细胞凋亡有关。有证据表明抑制异常调节的自噬可以防治细颗粒物引起的损害。金丝桃苷,也称为槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷,是一种从金丝桃或山楂中提取的类黄酮糖苷化合物,具有抗炎、抗氧化活性及与细胞异常自噬有关的疾病中起保护作用。然而目前关于金丝桃苷在PM2.5诱导的肺损伤是否具有保护作用及其机制尚有待进一步研究。方法:本实验主要分为两部分,第一部分拟构建体外和体内两种模型,研究金丝桃苷在Beas-2b细胞和PM2.5诱导肺损伤小鼠模型中的保护作用及其机制。体外实验中,我们制备并对比水溶性PM2.5（W-PMs）和有机可萃取PM2.5（OPMs）对Beas-2b细胞的细胞毒性后,在Beas-2b细胞中以O-PMs诱导观察细胞损伤的分子机制及金丝桃苷发挥保护作用及调节细胞自噬和细胞凋亡的机制。在体内实验中,我们以PMs构建小鼠肺损伤的模型,在体外实验基础上进一步研究金丝桃苷对PMs诱导小鼠肺损伤模型中自噬失调和炎性损伤的保护作用和分子机制,并且在此基础上应用AMPK激活剂深入探究金丝桃苷调节细胞自噬和细胞凋亡发挥保护作用的分子机制。第二部分首先构建COPD动物模型,拟应用PM2.5刺激加重COPD肺损伤,研究金丝桃苷在缓解PM2.5诱导慢性呼吸道疾病急性加重中的保护作用。以上过程中主要应用酶联免疫吸附实验（ELISA）和免疫印迹法（Western Blot）等分子生物学方法。结果:第一部分:1.在体外,O-PMs具有更强的细胞毒性,O-PMs可过度激活自噬和细胞凋亡,表现在自噬相关蛋白（beclin-1,p62,atg3和LC3Ⅱ）和凋亡蛋白（parp,bax,caspase 3）的水平呈剂量依赖性增加。O-PMs可剂量依赖性上调P-AMPK和抑制m-TOR的水平。金丝桃苷可抑制O-PMs诱导的细胞毒性、自噬蛋白过度表达、自噬小体的积累、细胞凋亡以及p-AMPK的表达以及上调p-mTOR水平。3-MA和Compond C（AMPK抑制剂）可增强金丝桃苷以上的治疗作用,而AICAR（AMPK激活剂）则具有减弱的作用。2.在体内,金丝桃苷显着改善PMs诱导小鼠肺损伤模型的肺组织病理改变,并且能够抑制BALF中炎症细胞（主要为中性粒细胞）渗出和细胞因子（TNF-α和IL-6）分泌,降低肺组织自噬相关蛋白（beclin-1、p62、atg3和LC3Ⅱ）、凋亡蛋白（parp,bax,caspase-3）的表达,增加bcl-2的表达。这种作用可能与其抑制AMPK/mTOR通路密切相关。应用AICAR后,PMs诱导肺损伤小鼠模型中金丝桃苷减轻PMs诱导的肺组织病理改变、BALF中炎症细胞以及抑制细胞因子（TNF-α和IL-6）分泌的作用明显减弱,同时对LC3Ⅱ和caspase-3的抑制作用也减弱,表明了金丝桃苷在PMs诱导肺损伤小鼠模型中的调节细胞自噬和细胞凋亡及保护作用是通过AMPK/mTOR介导。第二部分:1、金丝桃苷显着降低PM2.5诱导COPD肺损伤加重模型中炎症反应,表现为与COPD+PM2.5组比较,金丝桃苷减轻PM2.5诱导的肺损伤病理评分,降低BALF中炎性细胞计数、TNF-α和IL-6水平。同时,金丝桃苷可减少PM2.5诱导COPD肺损伤加重模型中Muc5ac和p-creb的分泌。2、金丝桃苷明显抑制PM2.5诱导的COPD肺损伤加重模型肺组织中NF-κB通路活化和NLRP3炎症小体激活,降低肺组织自噬相关蛋白（beclin-1、atg3和LC3Ⅱ）、凋亡蛋白（bax和caspase 3）的表达。结论:综上所述,本研究证明了金丝桃苷对PM2.5诱导的气道损伤以及COPD肺损伤加重的保护作用和金丝桃苷抑制自噬相关蛋白和凋亡蛋白表达的分子机制,为PM2.5诱导和加重呼吸系统疾病的治疗提供策略。
满君[5]（2021）在《从三焦“膜性四通管道”论治肺结节病的理论及临床研究》文中研究说明背景与目的肺结节病是以非干酪样坏死性上皮细胞肉芽肿为病理特征的系统性疾病,西医治疗以糖皮质激素为主,但激素治疗停药后极易复发,且副作用明显,中医药治疗肺结节病具有一定优势,通化方是在姜良铎教授三焦“膜性四通管道”理论基础上创立的治疗肺结节病的基本方。本研究第一部分从循证学证据确定糖皮质激素治疗肺结节病的确切疗效和对其预后及复发的影响,第二部分梳理总结姜良铎教授三焦“膜性四通管道”理论和在肺结节病临床诊治中的重要指导价值。第三部分为临床研究观察通化方加减治疗肺结节病的疗效和对其远期预后的影响。第四部分通过网络药理学分析通化方的作用机制和有效性。方法1糖皮质激素治疗肺结节病的Meta分析:通过检索国内外文献数据库,筛选符合纳入标准的糖皮质激素治疗肺结节病的临床随机对照试验（randomized controlled trials,RCTs）,采用Meta分析方法,主要观察指标为治疗有效率、随访有效率、复发率、肺功能及血清血管紧张素转化酶（serum angiotensin converting enzyme,SACE）。2从三焦“膜性四通管道”论治肺结节病的理论研究:结合古文献研究及近现代医家对三焦的论述,系统梳理三焦形质、功能及辨证相关内容。其次重点论述姜良铎教授三焦“膜性四通管道”理论。最后阐述该理论在肺结节病诊治中的重要指导价值,根据此理论创立“通化方”为治疗肺结节病的基本方。3通化方加减治疗肺结节病的临床研究:采用适用于少见病的前瞻性病例系列研究,纳入病情进展或复发的Ⅱ期肺结节病患者,予以通化方加减治疗,疗程6个月,随访期为6个月。治疗前记录患者一般资料和临床资料,根据SACE水平将其分为SACE升高组和正常组,比较两组中胸部HRCT、理化检查指标、中医证候积分的差异,及SACE与上述临床资料的相关性。疗效评价方面,比较患者治疗和随访前后的综合疗效、胸部HRCT、理化检查指标、中医证候积分和中医有效率,同时监测通化方的安全性。4通化方治疗肺结节病的网络药理学研究:提取“通化方”及肺结节病的作用靶点,构建通化方-肺结节病-靶点调控网络并对发挥核心作用的靶基因蛋白进行数据挖掘,最后通过对核心靶点基因蛋白进行基因本体（gene ontology,GO）功能和京都基因与基因组百科全书（kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）信号通路富集分析得出通化方作用于肺结节病的疗效机制。与目前公认的肺结节病发病机制进行对比,探讨其有效性。结果1 Meta分析:本研究最终纳入8个RCTs,均以英文形式发表。结果显示:治疗后,糖皮质激素治疗组有效率高于对照组（P<0.05）,随访期间,治疗组有效率及复发率与对照组相比均未见明显差异（P>0.05）;治疗后治疗组患者肺功能FVC、DLCO高于对照组（P<0.05）,FEV1和SACE在两组间未见显着差异（P>0.05）。2理论研究:三焦形质是争论焦点,三焦功能论述主要集中在三焦主气化和主水液方面。三焦辨证在湿热病及其他复杂疾病治疗方面均有深远影响。姜良铎教授从三焦“膜性四通管道”理论认识肺结节病,提出三焦为人体器官的被膜、包膜、淋巴、间质组织等脏腑间联系的四通管道,三焦郁滞不通则气机气化不利、不能化生护卫精微,津液和血液运行障碍,形成痰瘀、痰瘀互结形成结节,并以膜性四通管道为途径流窜全身,治疗当疏利三焦。导师在此理论基础上创立通化方作为治疗肺结节病基本方。3临床研究:3.1一般资料:治疗前共入组31例患者,男性7例,女性24例,31例患者平均年龄56.97±1.07岁,平均病程为1.91±0.06年;肺外系统病变包括皮下结节、眼部侵润、双侧腮腺肿大;肺浸润HRCT评分上肺区和中肺区肺浸润HRCT评分高于下肺区（P<0.05）。3.2临床资料比较:治疗前完成SACE检测的共26人,其中SACE升高者有12例,正常者有14例,SACE升高组与正常组相比肺浸润HRCT评分与胸部HRCT总分升高,理化检查中淋巴细胞减低（P<0.05）。相关性分析发现SACE水平与肺浸润HRCT评分、胸部HRCT总分、淋巴细胞存在相关性（P<0.05）。3.3临床疗效比较:①综合疗效分析:通化方加减治疗6个月综合疗效有效率为66.7%,随访6个月综合疗效有效率为63.6%,随访期间有效率与治疗后有效率比较未见明显降低（P>0.05）。②胸部HRCT 比较:治疗6个月和随访6个月与治疗前比较,肺浸润HRCT评分、淋巴结肿大HRCT评分、胸部HRCT总分均有明显降低（P<0.01）;随访6个月与治疗6个月比较,肺浸润HRCT评分、淋巴结肿大HRCT评分、胸部HRCT总分未见统计学差异（P>0.05）。治疗6个月淋巴结肿大有效率高于肺浸润有效率（P<0.05）。③肺浸润类型及程度分级比较:肺浸润类型包括肺结节影、磨玻璃影与实变影,治疗与随访前后,三种类型所占比例无统计学差异（P>0.05）。治疗6个月与治疗前比较,结节影与磨玻璃影的HRCT评分降低（P<0.05或P<0.01）;随访6个月与治疗前比较,结节影HRCT评分降低（P<0.01）;随访6个月与治疗6个月比较,三者HRCT评分差异均无统计学意义（P>0.05）。治疗与随访前后患者肺浸润HRCT评分均分为轻度组和中度组,两组所占比例在治疗与随访前后无统计学差异（P>0.05）。④理化检查比较:治疗6个月、随访6个月与治疗前比较,SACE、血沉降低,淋巴细胞升高（P<0.05）;随访6个月与治疗6个月比较,淋巴细胞降低、单核细胞升高（P<0.05）;治疗6个月、随访6个月与治疗前三个阶段比较,SACE、血沉、淋巴细胞所占异常比例具有统计学差异（P<0.05）。⑤肺功能比较:治疗前共16例完成肺功能检测,肺功能通气类型以弥散伴小气道功能减低所占比例最高,未进行治疗和随访后疗效比较。⑥中医证候比较:全组与三焦郁滞、痰瘀痹阻、气阴亏虚组患者治疗6个月和随访6个月与治疗前和治疗1个月比较证候总积分显着降低（P<0.01）;三焦郁滞、痰瘀痹阻、湿热蕴肺组治疗6个月和随访6个月与治疗前比较证候总积分降低（P<0.05或P<0.01）;三焦郁滞、痰瘀痹阻、阳气亏虚组随访6个月与治疗前比较证候总积分降低（P<0.05）。⑦中医疗效比较:治疗1个月、治疗6个月与随访6个月3个阶段比较,中医有效率具有显着差异（P<0.01）;治疗6个月和随访6个月与治疗1个月比较有效率升高（P<0.01）;随访6个月与治疗6个月比较有效率未见差异（P>0.05）。⑧中医各症状比较:治疗1个月与治疗前比较,脘腹胀闷症状积分降低（P<0.05）;治疗6个月和随访6个月与治疗前比较胸闷、皮下结节、乏力、咳痰、口干咽燥、畏寒肢冷、潮热盗汗、大便溏泄症状积分均见降低（P<0.05）。⑨不良反应:在治疗和随访过程中,入组患者均未出现严重不良反应。4网络药理学研究:通过构建通化方-肺结节病-靶点调控网络发现白介素-6（interleukin 6,IL-6）、基质金属蛋白酶 9（matrixmetalloproteinase 9,MMP9）、半胱氨酸蛋白酶 3（caspase 3,CASP3）、趋化因子配体2（chemokine ligand 2,CCL2）为关键作用靶点蛋白,通过GO功能和KEGG信号通路富集分析发现通化方主要干预Hepatitis B信号通路、辅助性T细胞17（T helper cell,Th17）细胞分化、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）信号通路、白介素-17（interleukin 17,IL-17）信号通路。IL-6、MMP9、CASP3、CCL2 基因,Th17 细胞分化、TNF信号通路、IL-17信号通路是目前公认的肺结节病发病相关靶点蛋白与机制,故证实了通化方治疗肺结节病的有效性。结论糖皮质激素治疗肺结节病有一定的疗效,但对远期预后及复发未见益处,通化方是在姜良铎教授三焦“膜性四通管道”理论基础上创立的治疗肺结节病基本方,临床疗效确切,可改善肺部浸润、淋巴结肿大和皮下结节、降低疾病活动性与严重性相关理化指标、改善中医证候积分,通过随访发现对远期预后较好,降低复发率,进一步采用网络药理学分析同样证实了通化方的有效性。
王明哲[6]（2021）在《固本止咳中药对COPD模型小鼠呼吸道损伤修复的调控机制研究》文中研究说明背景:慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD）是一种以持续呼吸道症状和气流受限为特征的疾病,通常是由于明显暴露于有毒颗粒或气体引起的气道和/或肺泡异常所致,其发病机制目前尚未完全阐明,临床疗效欠佳。目前对于COPD的治疗主要以对症治疗为主,治疗效果不理想且需要终身控制疾病的发展。中医以整体观念、辨证施治为纲,可以通过“扶正”、“固卫”起到未病先防,已病防变的作用,从而更好的预防和控制COPD的发生与发展。“固本止咳中药”源于国医大师、中医内科呼吸病专家晁恩祥教授多年诊治COPD的临床经验。晁恩祥教授十分重视人体正气在疾病发病和病情进展中的地位和作用,强调“正气存内,邪不可干”,提出“扶正固卫”理论,因而以经典方剂“玉屏风散”为基础,加减化裁创制固本止咳中药。前期临床研究表明,固本止咳中药在改善患者肺功能等方面有较好效果,并可通过调控T细胞亚群发挥调节人体免疫功能的作用。大量的前期动物实验表明,固本止咳中药可改善COPD模型小鼠肺功能情况、呼吸道病理损伤及炎性因子的过度表达、并降低肺组织αβT细胞/γδT细胞比例、增加肺组织中KGF,KGFR蛋白和基因表达含量等。因此,进一步开展固本止咳中药治疗COPD模型小鼠的疗效及作用机制研究具有一定的意义。目的:损伤修复是在各类细胞生长因子共同作用下的协调有序过程,分为炎症反应、细胞增殖、基质沉积及组织重塑四个时期。呼吸道损伤修复是COPD的主要发病机制之一,贯穿了慢阻肺疾病的全程。本研究从呼吸道的黏膜炎症损伤修复、呼吸道结构损伤修复及异常的呼吸道损伤修复这三个方面入手,研究固本止咳中药对于COPD呼吸道损伤修复的调控作用,从而更好的阐释中医“扶正固卫”、“肺主皮毛”的理论。方法:本研究将100只健康ICR小鼠按体重随机分为空白组（n=30）、模型COPD组（n=35）和固本止咳中药组（n=35）。除正常对照组以外,其余各组均被制成COPD模型。本研究采用被动吸烟加鼻腔滴入LPS的方法进行COPD小鼠造模。治疗组于第61天开始予固本止咳中药灌胃,空白对照组和模型对照组使用蒸馏水以同样方法灌胃,共28天。第一部分:体重监测和肺功能检测明确COPD模型小鼠的模型制备情况和固本止咳中药的药效。在固本止咳中药对COPD模型小鼠的呼吸道黏膜炎性损伤修复的调控作用研究方面,本研究首先通过抗体芯片法对小鼠呼吸道40种炎性因子进行系统检测,并采用免疫组化法对抗体芯片结果中COPD组明显变化和固本止咳中药组发挥明显调控作用的炎性因子进行验证。在固本止咳中药对COPD模型小鼠呼吸道结构损伤修复的调控以及对异常的损伤修复的作用研究方面,本研究通过病理学评判、免疫组化法和透射电镜进行检测,以判断香烟烟雾暴露+LPS滴鼻对小鼠呼吸道结构、肺泡结构、细胞外基质和Ⅱ型上皮细胞的结构损伤情况以及固本止咳中药对COPD模型对相应结构损伤修复及异常的损伤修复的调控情况。第二部分:基于质谱技术,对固本止咳中药的成分分析研究,从固本止咳中药的化学成分入手,探讨其发挥损伤修复作用机制的原理。此外,本研究对各组小鼠肺组织进行label-free蛋白组学检测,明确固本止咳中药治疗COPD模型小鼠的靶点及通路。阐释其对于COPD模型小鼠呼吸道损伤修复多成分-多靶点-多通路整体调控的机制。第三部分:基于western-blot和RT-qPCR技术,对第一部分和第二部分结果富集出现的JAK-STAT信号通路进行验证研究,对通路中JAK1,p-JAK1,STAT3,p-STAT3和SOCS3的蛋白表达水平以及JAK1 mRNA,JAK2mRNA,JAK3mRNA,STAT1 mRNA,STAT3 mRNA,SOCS3mRNA的表达水平进行测定。结果:1)体重监测:固本止咳中药可改善COPD模型小鼠体重增长缓慢的情况。2)肺功能检测:COPD 组较空白组 FEV 0.05,FEV0.1,FEV0.2,PEF,Crs,Cst均明显下降（P<0.01）;Rrs,Ers,Rn均明显升高（P<0.01）;G,H均无统计学差异（P>0.05）。固本止咳中药组较COPD组FEV0.05,FEV0.1,FEV0.2,Crs均明显升高（P<0.05）;Rrs,Ers,Rn均明显下降（P<0.05）;PEF,G,H,Cst均无统计学差异（P>0.05）。3)病理形态学:HE染色结果表明,COPD组小鼠病理形态符合COPD的特征,固本止咳中药可改善COPD模型小鼠50-100μm直径气道、呼吸性细支气管和肺泡的病理形态。透射电镜结果表明,COPD组小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞板层小体出现空泡化,线粒体肿胀,嵴断裂或消失。固本止咳中药组小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞部分板层小体出现空泡化,线粒体肿胀,但程度与COPD组相比明显减轻。4)抗体芯片检测:在40个炎性因子中,COPD组与空白组相比,共有8个显着升高的炎性因子,分别为 IL-6,GM-CSF,TNF-α,IFN-γ,IL-1β,IL-3,IL-17 和 IL-12p70（P<0.05）;固本止咳中药组与COPD组相比,共有7个显着降低的因子,分别为IL-6,GM-CSF,TNF-α,IFN-γ,IL-1β,IL-3 和 TCA-3（P<0.05）。5)免疫组化检测:与空白组相比,COPD组IL-6,GM-CSF,TNF-α,IFN-γ,α-SMA,MMP-9,TIMP-1,MMP-9/TIMP-1,HIF-1α 在肺组织中的表达均明显升高（P<0.05）。与 COPD 组相比,固本止咳中药组 IL-6,GM-CSF,TNF-α,IFN-γ,α-SMA,MMP-9,TIMP-1,MMP-9/TIMP-1,HIF-1α在肺组织中的表达均明显下降（P<0.05）。空白组和COPD组,固本止咳中药组与COPD组之间Collegen 1均无统计学差异（P>0.05）。6)中药成分分析:共鉴定出固本止咳中药的41个成分,其中的多种成分被证明可通过抗炎、抗氧化、抑制气道重塑等参与呼吸道损伤修复的调控。7)label-free蛋白组学检测:在COPD组和空白组之间共发现287个差异蛋白,固本止咳中药组和COPD组之间共发现184个差异蛋白。通过对差异蛋白的GO富集分析、KEGG富集分析和REACTOME富集分析发现:固本止咳中药可通过中性粒细胞脱颗粒、补体通路、细胞外基质、JAK-STAT信号通路等多个途径以及多个参与COPD进展的生物标志物,从整体上参与COPD呼吸道损伤修复的调控。8)JAK-STAT信号通路的实验:本研究通过RT-PCR法对各组小鼠肺组织JAK1,JAK2,JAK3,STAT1,STAT3和SOCS3进行了测定,结果表明:与空白组相比,COPD模型小鼠肺组织中 JAK1 mRNA,JAK2 mRNA,JAK3 mRNA,STAT3 mRNA 和 SOCS3 mRNA表达均明显升高（P<0.05）,STAT1 mRNA两组间无统计学差异（P>0.05）。与COPD组相比,固本止咳中药组小鼠肺组织中JAK1 mRNA,STAT3 mRNA表达明显下降（P<0.05）,且 SOCS3 mRNA 表达明显升高（P<0.05）,JAK2mRNA,JAK3 mRNA,STAT1 mRNA与COPD组相比均无统计学差异（P>0.05）。本研究采用western-blot法对各组小鼠肺组织JAK1,p-JAK1,STAT3,p-STAT3,SOCS3进行测定。与空白组相比,COPD 模型小鼠肺组织中 p-JAK1,p-STAT3,p-JAK1/JAK1,p-STAT3/STAT3 明显升高（P<0.05）;JAK1,STAT3,SOCS3与空白组相比均无统计学差异（P>0.05）。与COPD组相比,固本止咳中药组小鼠肺组织中p-JAK1,p-STAT3,p-STAT3/STAT3明显降低（P<0.05）,SOCS3 明显升高（P<0.05）;JAK1,STAT3,P-JAK1/JAK1 与 COPD组相比均无统计学差异（P>0.05）。结论:1)固本止咳中药可通过减少COPD模型小鼠肺组织炎性因子的过度表达,发挥调控呼吸道黏膜炎症损伤修复的作用;并通过改善COPD模型小鼠呼吸道结构、肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构以及细胞外基质的损伤,发挥调控呼吸道结构损伤修复和减少异常的呼吸道损伤修复的作用。体现了中医扶正固卫,肺主皮毛的理论。2)固本止咳中药在COPD损伤修复机制的整体调控中具有多成分-多靶点-多通路的特点,体现了中医整体观念的特点。3)固本止咳中药可通过下调JAK1和STAT3的磷酸化水平,上调SOCS3的表达从而抑制JAK-STAT信号通路。是固本止咳中药基于扶正固卫、肺主皮毛理论调控呼吸道损伤修复在机制上的具体体现。
李玉卿[7]（2021）在《和调血脉通肺方防治慢阻肺肺部炎症的作用机理研究》文中提出目的:本研究通过气管内滴注脂多糖联合香烟烟熏的方法复制慢阻肺大鼠模型,基于肺部炎症贯穿慢阻肺发生发展全过程,选择云南省名中医李庆生教授从“扶正养血”治疗慢阻肺的临床有效经验方-和调血脉通肺方,观察该方是否能够抑制肺血管重构、调节气道黏膜免疫和修复肠黏膜屏障损伤,改善慢阻肺模型大鼠炎症水平,从肺部炎症的缓解情况初步阐释和调血脉通肺方的作用机理。方法:1、采用气管内滴注脂多糖联合香烟烟熏的方法复制慢阻肺大鼠模型。造模共56天,通过观察大鼠行为学变化及肺组织病理形态改变评价模型是否成功。第57天起中药干预同时继续香烟烟熏,隔天一次,直至实验结束（即第84天）。2、制备和调血脉通肺方水煎剂,中药干预从第57天开始,以灌胃方式给药,每天一次,空白组和模型组灌胃给予同等剂量的生理盐水,共给药28天。3、利用血细胞分析仪检测大鼠血中性粒细胞计数及百分比;通过ELISA检测大鼠血清IL-8、ET-1及VEGF水平,肺组织及结肠组织SIgA水平;通过RT-PCR检测大鼠肺组织IL-1β、TNF-α、HIF-1αmRNA表达水平;通过免疫组化法检测大鼠结肠组织紧密连接蛋白Claudin-1和ZO-1的表达;通过16S rRNA基因高通量测序检测大鼠肺组织及肠内容物的菌群相对丰度。结果:1、与空白组相比,模型组大鼠血中性粒细胞计数和百分比均显着上升（P<0.01）,与模型组相比,中药各剂量组大鼠血中性粒细胞计数有下降趋势（P>0.05）,中性粒细胞百分比显着下降（P<0.05）;与空白组相比,模型组大鼠血清IL-8显着上升（P<0.05）,与模型组相比,中药各剂量组IL-8显着下降（P<0.05）;与空白组相比,模型组大鼠肺组织IL-1β和TNF-αmRNA相对表达均显着上升（P<0.01）,与模型组相比,中药各剂量组IL-1βmRNA有下降趋势（P>0.05）,以低、中剂量组显着下降（P<0.05）,中药各剂量组TNF-αmRNA相对表达显着下降（P<0.01）。各剂量组未呈现明显随剂量改变的梯度变化。2、与空白组相比,模型组大鼠肺组织维多利亚蓝+Van Gieson染色肺小动脉WT%和WA%显着上升（P<0.05）,与模型组相比,中药各剂量组WT%和WA%有下降趋势（P>0.05）,以高剂量组WT%显着下降（P<0.05）;与空白组相比,模型组大鼠血清ET-1显着上升（P<0.01）、VEGF显着上升（P<0.05）,与模型组相比,中药各剂量组ET-1有下降趋势（P>0.05）,以低剂量组显着下降（P<0.01）,中药各剂量组VEGF显着下降（P<0.05）;与空白组相比,模型组大鼠肺组织HIF-1αmRNA相对表达水平显着上升（P<0.05）,与模型组相比,中药各剂量组HIF-1αmRNA相对表达水平有下降趋势（P>0.05）,以低、高剂量组显着下降（P<0.05）。各剂量组未呈现随剂量改变的梯度变化。3、与空白组相比,模型组大鼠肺组织SIgA显着下降（P<0.05）,与模型组相比,中药各剂量组大鼠肺组织SIgA有上升趋势（P>0.05）,以高剂量组显着上升（P<0.05）;大鼠肺部菌群在门水平,以Proteobacteria（变形菌门）和Firmicutes（厚壁菌门）为主,在属水平,以Ochrobactrum（苍白杆菌属）、Methylobacterium-Methylorubrum和Lactobacillus（乳杆菌属）为主,其次为Ralstonia（雷尔氏菌属）和Mycoplasma（支原体属）,其中,Methylobacterium-Methylorubrum和Lactobacillus（乳杆菌属）等13个菌属的相对丰度造模后下降,中药干预后相对丰度上升,Ralstonia（雷尔氏菌属）和Mycoplasma（支原体属）2个菌属的相对丰度造模后上升,中药干预后相对丰度下降。4、与空白组相比,模型组大鼠结肠组织ZO-1和Claudin-1平均光密度均显着下降（P<0.01）,与模型组相比,中药各剂量组ZO-1和Claudin-1平均光密度均有上升趋势（P>0.05）,以高剂量组显着上升（P<0.01）;与空白组相比,模型组大鼠结肠组织SIgA显着下降（P<0.01）,与模型组相比,中药各剂量组大鼠结肠组织SIgA有上升趋势（P>0.05）,以高剂量组显着上升（P<0.01）;大鼠肠内容物菌群在门水平,以Firmicutes（厚壁菌门）和Bacteroidetes（拟杆菌门）为主,在属水平,“Others”占大部分（53.921%-69.053%）,其次为unidentified-Ruminococcaceae和Turicibacter,其中,Methanosphaera等3个菌属的相对丰度造模后下降,中药干预后相对丰度上升,Blautia和Cloacibacillus 2个菌属的相对丰度造模后上升,中药干预后相对丰度下降。结论:1、和调血脉通肺方能够改善慢阻肺模型大鼠肺部炎症,抑制肺血管重构。2、和调血脉通肺方能够修复肠黏膜屏障损伤,减缓全身慢性炎症水平。3、和调血脉通肺方益气养血、固表益肺,主要体现在抑制肺血管重构、调节气道黏膜免疫以及修复肠黏膜屏障损伤,从而改善慢阻肺肺部炎症,延缓慢阻肺的进展。
薛佳茜[8]（2021）在《基于“肺与大肠相表里”研究清源化痰颗粒对慢阻肺急性加重期炎症反应及肠道菌群的影响》文中研究指明目的:慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD）对人体健康的影响是巨大而深刻的,慢阻肺的急性加重（Acute Exacerbation of Chronic Obstructive Pulmonary Disease,AECOPD）又是加速病情进展的主要原因。目前,临床上用于治疗AECOPD的药物以抗感染、抗炎和支气管扩张药为主,但是仍有其相对局限性,临床上需要有更多的可供选择的药物用于AECOPD的治疗,因此在此领域,中医药是大有作为的。本研究以“肺与大肠相表里”经典理论为出发点,以清源化痰颗粒为研究对象,研究其对慢阻肺急性加重期炎症反应和肠道菌群的影响,为清源化痰颗粒的应用提供实验支持。同时在研究中传承中医学的理论精华,建立对中医药学的理论自信和文化自信。方法:（1）首先以网络药理学为手段,通过数据库检索清源化痰颗粒中的活性化合物和相应靶标,明确清源化痰颗粒和AECOPD相关的生物学过程和信号传导途径,提出清源化痰颗粒作用于AECOPD的机制假说;（2）其次,观察清源化痰颗粒对AECOPD小鼠肺部炎症反应的影响,明确其“治肺”的作用机制。选用SPF级C57BL/6雄性小鼠,通过熏烟加气管内滴注LPS的方法建立AECOPD疾病小鼠模型,8周后收收集标本进行检测,观察小鼠精神、饮食、体质量等一般情况,肺组织HE病理改变及肺平均内衬间隔,计算肺泡灌洗液内炎症细胞数量及中性粒细胞与淋巴细胞比值,并通过免疫荧光法检测肺组织内中性粒细胞的凋亡情况,Western blot及PCR检测相关炎症通路HMGB1-RAGE、凋亡蛋白C-casp3等的水平。（3）再次,研究清源化痰颗粒对肠道菌群与肠道内代谢产物的影响,说明其具有“调肠”的作用。利用16S rDNA及靶向代谢组学分析小鼠粪便中群落物种信息和短链脂肪酸水平,通过OTU聚类分析、样本间β多样性指数分析及多组比较方法,获取物种组成信息和组间组成差异;利用Masshunter定量软件对样本中短链脂肪酸进行识别,确定各短链脂肪酸的含量;最后将代谢产物和样本物种进行相关性分析,判断差异代谢物与菌群之间是否具有相关性,挖掘引起代谢差异的关键菌群。（4）最后,观察清源化痰颗粒干预后的肠道菌群对熏烟联合LPS滴注诱导的AECOPD小鼠炎症反应的影响,进一步明确清源化痰颗粒“从肠治肺”的作用机制。利用菌群耗竭联合AECOPD造模的方法建立小鼠双重干预模型,于第8周观察小鼠一般情况、肺组织HE病理改变、肺泡灌洗液内炎症细胞计数,并通过Western blot及PCR检测相关炎症通路HMGB1-RAGE、凋亡蛋白C-casp3等的表达情况。结果:（1）网络药理学结果表明,清源化痰颗粒的作用机制主要表现在对炎症反应的调节上,通过表型分析发现,清源化痰颗粒的作用靶标中CRP、IL-6、IL-1β与频繁急性加重表型相关,MPO与中性粒细胞炎症相关,MMP-1、MMP-9与肺气肿程度相关;在通路上,主要涉及RAGE及其配体途径、PI3K-Akt信号通路,并对Apoptosis结局具有调节作用。结合文献研究,最终提出清源化痰颗粒可能通过介导“HMGB1-RAGE”信号通路,对中性粒细胞凋亡产生干预,进而影响AECOPD的疾病进程的科学假说。（2）清源化痰颗粒能显着改善AECOPD小鼠肺组织炎症情况,与模型组比较,西药组、中药中剂量组、中药高剂量组及大黄素组小鼠体质量均上升平稳,一般情况尚可;肺组织病理提示西药组、中药高剂量组肺组织中不同程度炎症细胞浸润,与模型组比较,炎症反应有所缓解。中药中剂量组、大黄素组可见轻度炎细胞浸润,病变最轻,肺平均内衬间隔较模型组明显降低（P<0.05）;各药物组肺泡灌洗液内中性粒细胞计数均低于模型组,淋巴细胞变化尚不明显,中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）降低,以中药中剂量组最为显着（P<0.05）。免疫荧光结果显示,正常组无明显的C-casp3、Ly6G荧光细胞形态显示。模型组可见明显的中性粒细胞,胞内及周围未见C-casp3显示,各给药组可见不同程度的Ly6G和C-casp3显示,说明给药组均存在不同程度的中性粒细胞凋亡情况。Western blot结果显示,AECOPD模型组小鼠肺组织C-casp3、C-casp3/Casp3较正常组明显降低（P<0.05）,Casp3、HMGB1、RAGE明显升高（P<0.05,P<0.01）。经不同药物处理后,C-casp3、C-casp3/Casp3表达均有增加,与模型组比较,差异均有统计学意义（P<0.01）,其中中药中剂量组、大黄素组效果优于中药高剂量组和西药组（P<0.05,P<0.01）;Casp3表达方面,给与药物干预后,给药各组Casp3水平均明显下降,与模型组比较,中药中剂量组、中药高剂量组和大黄素组均有统计学意义（P<0.01）;同时给药组小鼠HMGB1、RAGE蛋白表达降低,与模型组比较,中药中剂量组、大黄素组差异有统计学意义（P<0.01,P<0.05）。PCR结果显示,与正常组相比,模型组小鼠肺组织中HMGB1mRNA、RAGE mRNA表达量均显着升高（P<0.01）,经各组药物治疗后,HMGB1mRNA、RAGE mRNA两种基因的表达水平均被下调,与模型组比较,差异均有统计学意义（P<0.01）;HMGB1mRNA表达水平方面,相对于西药组,中药中剂量组、大黄素组表达水平更低,差异有统计学意义（P<0.01,P<0.05）,而RAGE mRNA各给药组之间无显着差异（P>0.05）。（3）在对肠道菌群和代谢产物的影响方面,与正常组比较,模型组乙酸、丙酸、丁酸的含量均明显降低,以丁酸最为显着（P<0.01）。与模型组比较,西药组乙酸、丙酸含量略有升高;中药中剂量组、中药高剂量组、大黄素组乙酸含量呈下降趋势,丙酸、丁酸均明显上升,其中中药中剂量组丙酸、丁酸含量最高。综合分析后将丁酸作为主要差异代谢产物,与先前分析得到的组间主要差异菌群进行关联性分析。结果显示,Akkermansiaceae（阿克曼菌科）、Rikenellaceae（理研菌科）、Ruminococcaceae（瘤胃菌科）、Sutterellaceae与丁酸水平呈正相关,Enterococcaceae（肠球菌科）与丁酸水平呈负相关。Akkermansiaceae（阿克曼菌科）与丁酸的组间变化趋势基本一致。（4）粪便菌群移植能显着逆转AECOPD小鼠肺组织炎症情况,移植正常组、移植中药组、移植大黄素组小鼠一般情况尚可,体质量在予以菌群移植后平稳上升;肺组织病理提示肺泡结构破坏及炎症细胞浸润程度较模型组明显减轻,肺平均内衬间隔较模型组明显降低（P<0.05）;肺泡灌洗液内中性粒细胞计数较模型组减少,中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）降低。Western blot结果显示,与模型组比较,移植正常组、移植中药组、移植大黄素组小鼠肺组织C-casp3、C-casp3/Casp3均升高,差异有统计学意义（P<0.01）,其中移植中药组效果略优于移植正常组和移植大黄素组,差异无统计学意义;Casp3在各移植组中均明显下降,与模型组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。各移植组小鼠HMGB1、RAGE呈现下降趋势,与模型组比较,移植中药组、移植大黄素组差异有统计学意义（P<0.05）,移植组之间比较,无明显差异（P>0.05）。PCR结果显示,与正常组相比,模型组小鼠肺组织中HMGB1mRNA、RAGE mRNA表达量均显着升高（P<0.01,P<0.05）;与模型组比较,各移植组HMGB1mRNA、RAGE mRNA的表达水平均被下调（P<0.01,P<0.05）,以移植中药组下降明显,但组间比较无统计学意义（P>0.05）。结论:清源化痰颗粒能够影响HMGB1-RAGE通路,下调促炎因子HMGB1及其受体RAGE的蛋白和mRNA的表达,同时上调凋亡执行蛋白C-casp3的水平,诱导中性粒细胞为主的炎症细胞凋亡,减轻中性粒细胞介导的肺部炎症,具有“治肺”的作用;AECOPD模型小鼠伴有短链脂肪酸及肠道菌群的紊乱,而清源化痰颗粒能够升高模型小鼠丁酸水平,同时调节相关肠道菌群的结构和丰度,纠正肠道菌群和代谢产物的紊乱,说明清源化痰颗粒具有“调肠”的特点;清源化痰颗粒干预后的粪便菌群移植能够明显减轻AECOPD小鼠肺组织炎症反应,调节HMGB1-RAGE通路及凋亡蛋白C-casp3的表达,体现了清源化痰颗粒“从肠治肺”“肺肠同调”的中医特色。
朱长乐[9]（2020）在《清金化痰汤及黄芩苷通过TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3通路抑制LPS诱导的急性肺损伤的研究》文中研究说明本论文分为综述和实验研究两部分综述综述一对中药复方及中药单体治疗急性肺损伤的国内外相关文献进行了综述。综述二对急性肺损伤的病因、临床表现等相关文献进行了综述,并对急性肺损伤的发病机制进行了重点综述。实验研究实验研究分为两部分,第一部分主要研究了清金化痰汤对急性肺损伤的干预作用,分为四个实验;第二部分主要研究了黄芩苷对急性肺损伤的干预作用,分为五个实验。第一部分:清金化痰汤对急性肺损伤的干预作用实验一目的:通过LPS干预建立急性肺损伤大鼠模型,评价清金化痰汤对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响。方法:采用气道滴注LPS溶液的方式建立急性肺损伤模型并给予低剂量清金化痰汤、高剂量清金化痰汤和克拉霉素灌胃。检测肺湿/干比、BALF蛋白质浓度、炎症因子分泌情况、肺组织病理变化。结果:气道滴注LPS可显着上调大鼠肺重量的湿/干比和大鼠BALF的蛋白质浓度,增加肺泡毛细血管膜通透性,促进炎症因子CXCL-1、IL-6和MPO的释放,诱导中性粒细胞的聚集浸润,引起肺泡壁增厚、支气管上皮细胞水肿。清金化痰汤可显着降低肺重量湿/干比和大鼠BALF的蛋白质浓度,减轻ALI大鼠的肺泡毛细血管膜通透性,减少蛋白质由毛细血管、间质向肺泡的渗透,减少中性粒细胞聚集,抑制炎症因子CXCL-1、IL-6和MPO的分泌,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验二目的:通过LPS干预建立急性肺损伤大鼠模型,评价清金化痰汤对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响。方法:采用气道滴注LPS溶液的方式建立急性肺损伤模型并给予低剂量清金化痰汤、高剂量清金化痰汤和克拉霉素灌胃。WB法检测蛋白表达变化、IHC检测肺组织蛋白表达改变。结果:气道滴注LPS可显着促进TLR4、MYD88、NLRP3的蛋白表达的升高和NF-κB磷酸化。清金化痰汤可显着降低TLR4、MYD88、NLRP3蛋白的表达,抑制了 NF-κB的磷酸化,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验三目的:探索清金化痰汤含药血清冻干粉对BEAS-2B细胞损伤炎症因子表达的影响。方法:使用冻干机将含药血清冻干为含药血清冻干粉。以空白含药血清冻干粉、清金化痰汤含药血清冻干粉、克拉霉素含药血清冻干粉干预支气管上皮细胞。采用CCK8法检测各药物的细胞毒性,并检测各药物抑制炎症因子分泌的效果。结果:清金化痰汤含药血清冻干粉和克拉霉素含药血清冻干粉可以引起细胞明显的水肿,细胞内可见黑色颗粒物质,并且无明显抑制炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α、MPO分泌的作用,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验四目的:分析中药复方清金化痰汤的主要化学成分及入血成分。方法:大鼠灌胃纯水、清金化痰汤和克拉霉素7天后采血、离心,制备含药血清。采用液质联用技术检测并分析各药物及其含药血清的主要化学成分。结果:清金化痰汤中含有9个化学成分,分别为黄芩苷、伪麻黄碱、绿原酸、咖啡酸、芦丁、连翘苷、大黄酸、甘草酸铵、齐墩果酸,其中3个为入血成分,分别为黄芩苷、伪麻黄碱、甘草酸铵。第二部分:黄芩苷对急性肺损伤的干预作用实验五目的:探索黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症因子表达的影响。方法:以黄芩苷标准品、克拉霉素标准品干预支气管上皮细胞。采用CCK8法检测各药物的细胞毒性,并检测各药物抑制炎症因子分泌的效果。结果:黄芩苷标准品浓度在10μg/ml及以下时,对细胞存活率无明显影响,细胞生长状态较好,细胞扁平,呈多边形。黄芩苷用药对炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α、MPO的表达有一定的抑制作用。实验六目的:探索黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症反应的影响。方法:以黄岑苷标准品、克拉霉素标准品干预LPS诱导的上皮细胞急性损伤模型,检测细胞培养上清中的炎症因子的含量、观察细胞形态、用Transwell小室检测上皮细胞趋化中性粒细胞的作用。结果:LPS干预BEAS-2B细胞可显着促进细胞因子IL-8、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-1β和GM-CSF的分泌,刺激支气管上皮细胞趋化中性粒细胞,诱导上皮细胞损伤。黄芩苷可显着地抑制IL-8、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-1β和GM-CSF等炎症因子的分泌,减少中性粒细胞的迁移数量。实验七目的:探索黄芩苷对LPS诱导的BEAS-2B细胞损伤的TLR4信号通路的影响。方法:以黄芩苷标准品、克拉霉素标准品干预LPS诱导的上皮细胞急性损伤模型,检测细胞中TLR4、MYD88、TRIF、NF-κB、NLRP3蛋白含量及mRNA表达情况。结果:LPS干预BEAS-2B细胞可激活TLR4信号通路,显着上调TLR4、MyD88、NLRP3蛋白的表达和NF-κB的磷酸化,黄芩苷可显着地下调TLR4、MyD88、p-NF-κB和NLRP3蛋白含量和mRNA的表达,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验八目的:探索黄芩苷对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响。方法:气道滴注LPS溶液建立急性肺损伤大鼠模型并给予低剂量黄芩苷、高剂量黄芩苷和克拉霉素灌胃。检测肺湿/干比、BALF蛋白质浓度、炎症因子分泌情况、肺组织病理变化。结果:LPS干预上调了 BALF和血清中的炎症因子CXCL-1、IL-6、IL-1β、TNF-α和MPO的分泌,增加了肺泡毛细血管膜通透性。黄芩苷干预可显着降低大鼠肺组织重量的湿/干比和BALF的蛋白质浓度,抑制大量中性粒细胞浸润到肺泡间质和肺泡间隙,减轻支气管上皮细胞的水肿,抑制上皮细胞的黏液分泌,抑制BALF和血清中炎症因子CXCL-1、IL-6、IL-1β、TNF-α和MPO的分泌,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验九目的:探索黄芩苷对急性肺损伤大鼠TLR4和MAPK信号通路的影响。方法:气道滴注LPS溶液建立急性肺损伤大鼠模型并给予低剂量黄芩苷、高剂量黄芩苷和克拉霉素灌胃。WB法检测蛋白表达变化、IHC检测肺组织蛋白表达改变。结果:LPS干预促进TLR4信号通路和MAPK信号通路的激活。黄芩苷可以显着地抑制TLR4、MYD88、P-NF-κB、NLRP3、P-ERK和P-p38蛋白的表达,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论1.气道滴注5mg/kg的LPS溶液可诱导大鼠的肺泡毛细血管通透性增加、炎症因子分泌增加、肺组织病理变化,符合急性肺损伤的病理改变,可以用于急性肺损伤的实验研究。2.清金化痰汤能够通过抑制TLR4/MYD88/NF-κB/NLRP3信号通路的激活,抑制炎症因子分泌和炎性细胞的浸润,减轻LPS诱导的炎症反应,缓解急性肺损伤模型大鼠的肺泡毛细血管通透性的增加和大鼠的急性肺损伤。3.清金化痰汤的主要化学成分之一黄芩苷可显着抑制LPS诱导BEAS-2B细胞的损伤以及炎症因子的分泌。4.黄芩苷可以抑制LPS诱导的急性大鼠肺损伤模型炎症因子的分泌和炎性细胞的浸润,减轻LPS诱导的炎症反应,缓解急性肺损伤模型大鼠的肺泡毛细血管通透性的增加、肺水肿和大鼠的急性肺损伤。5.黄芩苷可通过抑制TLR4/MYD88/NF-κB/NLRP3信号通路的激活与转录,减少炎症因子、趋化因子的分泌,抑制炎症细胞的聚集以及炎症风暴的爆发。6.黄芩苷能够通过抑制MAPK信号通路的激活,减少炎症因子、趋化因子的分泌,抑制炎症细胞的聚集以及炎症反应的扩大。
江银玲[10]（2020）在《原花青素β2对百草枯所致急性呼吸窘迫综合征的保护作用及机制研究》文中进行了进一步梳理研究背景与目的:急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）是常见的呼吸危重症,可由多种原因引起,其发生与发展过程复杂,发病机理尚未完全阐明。可能的机制包括氧化应激损伤、炎症因子风暴等损伤肺上皮细胞与微血管内皮细胞,引起肺血管通透性增加,大量含蛋白质的液体进入肺间质和肺泡腔,从而诱发顽固性呼吸衰竭。百草枯是一种常用的杂环除草剂,因其具有嗜肺性,中毒后主要引起急性呼吸窘迫综合征而具有较高的毒性,可用于制作ARDS动物模型,且百草枯中毒目前暂无有效解毒剂,故进一步深入探究其引起急性呼吸窘迫综合征的致病机制具有极大的临床价值。鉴于氧化损伤与炎症反应是引起百草枯的系列毒性反应的主要原因,我们设想抗氧化与抗炎治疗可有效防治百草枯引起的肺损伤。抗氧化应激损伤、减轻炎症反应也一直是这几年来ARDS治疗领域的研究热点。原花青素是具有很强抗氧化能力的天然提取物,其对于百草枯所致ARDS有无治疗作用及相关作用机理暂未见报道。本研究通过使用原花青素β2处理百草枯染毒大鼠ARDS模型观察其疗效,并探究其可能的机制。研究方法:1.ARDS模型的建立:通过腹腔注射百草枯染毒SD大鼠,观察动物一般情况及肺组织切片HE染色,确定成功制备ARDS动物模型。2.对氧化应激、肺血管通透性的影响:实验动物分为对照组（control组）,百草枯组（PQ组）,低剂量原花青素β2组（25mg/kg-PCβ2）,中等剂量原花青素β2组（50mg/kg-PCβ2）,高剂量原花青素β2组（100mg/kg-PCβ2）。处死大鼠后测定肺组织MDA、SOD、MPO等过氧化指标、肺湿干比及肺泡灌洗液中PMN。3.机制研究:Elisa法测定肺泡灌洗液中IL-1β、IL-18,RT-PCR法测定肺组织中IL-1β、IL-18 m RNA含量,western blot测定肺组织NLRP3炎性小体的表达。4.静默NLRP3基因,观察各组大鼠肺通透性、BALF中PMN的变化,测定肺组织中IL-1β、IL-18含量进一步探究NLRP3炎性小体在百草枯所致ARDS中的作用及原花青素β2发挥肺保护作用的机制。研究结果:1.大鼠一般情况:生理盐水组活泼强壮,食欲、反应均正常,活动敏捷,毛色均匀有光泽,呼吸平稳。造模组大鼠腹腔注射百草枯溶液30分钟-2小时左右即开始出现进食饮水减少、活动减少、反应迟钝、毛发竖起。72小时后精神萎靡、毛发蓬松、饮食欠佳、呼吸急促,口唇、肢端、鼠尾发绀明显,有的出现鼻腔、口腔出血,深大呼吸等。PCβ2组一般状况较PQ组有所改善,呈剂量依赖性。2.肺组织病理改变:对照组大鼠肺组织镜下肺泡结构清晰正常,肺泡腔清晰,肺泡壁结构无异常,肺泡间隔均匀一致,没有出血、坏死及炎症渗出。PQ组大鼠肺泡内皮细胞肿胀、毛细血管充血、肺泡腔内大量渗出、有大量炎性细胞浸润、肺泡壁明显增厚;PCβ2组肺组织内皮细胞肿胀、毛细血管充血、炎性细胞浸润均较PQ组减轻,且呈剂量依赖性。PQ组肺损伤评分显着高于空白对照组（P<0.001）,PCβ2组肺损伤评分较PQ组下降（P<0.05）,且呈剂量依赖性。3.肺湿干比计算:对照组大鼠未见明显肺水肿,PQ组大鼠肺含水量增加,肺水肿明显,肺湿干比明显高于对照组（P<0.001）,而PCβ2组大鼠肺含水量随剂量增加依次减轻,肺湿干比呈下降趋势,且呈剂量依赖性（P<0.05）。4.肺通透指数检测:PQ组肺通透指数显着高于对照组,P<0.001,PCβ2组肺通透指数明显下降,且随着给药剂量的增加,肺通透指数下降更明显,较PQ组变化均有统计学意义,但仍高于空白对照组。5.肺泡灌洗液PMN计数:PQ组BALF中PMN计数显着高于空白对照组,而PCβ2组BALF中PMN计数呈下降趋势,且呈剂量依赖性。6.氧化应激指标的变化:PQ组与PCβ2组较对照组MDA水平、MPO活性明显升高,PCβ2组（低、中、高剂量组）与PQ组相比较,MDA水平、MPO活性均有不同程度的下降。PQ组与PCβ2组较对照组SOD活性明显下降,PCβ2组（低、中、高剂量组）与PQ组相比较,SOD均有不同程度的上升。7.BALF中IL-1β、IL-18含量的变化:PQ组IL-1β、IL-18水平较对照组明显升高,PCβ2组（低、中、高剂量组）与PQ组相比较,IL-1β、IL-18含量均有不同程度的下降,且随着原花青素剂量的增加,IL-1β、IL-18含量均呈下降趋势。8.肺组织中IL-1β、IL-18 m RNA的变化:PQ组IL-1β、IL-18m RNA水平较对照组明显升高,PCβ2组（低、中、高剂量组）与PQ组相比较,IL-1β、IL-18 m RNA含量均有不同程度的下降,且随着原花青素剂量的增加,IL-1β、IL-18 m RNA含量均呈下降趋势。9.肺组织中NLRP3、ASC、caspase-1水平的变化:PQ组NLRP3、ASC、caspase-1水平较对照组明显升高,PCβ2组（低、中、高剂量组）与PQ组相比较,NLRP3、ASC、caspase-1含量均有不同程度的下降,且呈剂量依赖性。10.静默NLRP3基因对肺组织及IL-1β、IL-18水平的影响:NLRP3基因静默组肺组织W/D、肺通透性及BALF中PMN较PQ组明显下降,其肺组织中IL-1β与IL-18的含量较PQ组明显下降（P<0.01）,PCβ2组IL-1β与IL-18的含量与基因静默组相仿,差异无统计学意义。NLRP3基因静默组大鼠IL-1β、IL-18较空白对照组明显上升,差异有统计学意义（P<0.05）。研究结论:本实验通过腹腔注射百草枯成功建立ARDS模型,可用于ARDS的研究。原花青素β2可降低ARDS大鼠肺血管通透性,减轻肺水肿,降低BALF中PMN。其抗氧化作用可降低肺组织中MDA水平与MPO活性,上调SOD活性从而减轻肺损伤。静默NLRP3基因提示NLRP3炎性小体参与介导百草枯所致的ARDS。原花青素β2可通过抑制NLRP3炎性小体而下调IL-1β、IL-18的表达从而对百草枯所致ARDS起到一定的干预效果。
二、慢性阻塞性肺疾病大鼠模型支气管肺组织细胞间粘附分子1及部分中性粒细胞炎症因子的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、慢性阻塞性肺疾病大鼠模型支气管肺组织细胞间粘附分子1及部分中性粒细胞炎症因子的研究（论文提纲范文）
（1）ACO疾病动物模型的建立及其潜在机制靶点、候选药物的发现研究（论文提纲范文）
| 缩略词 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1 ACO研究进展 |
| 1.1 ACO的流行病学 |
| 1.2 病因 |
| 1.3 临床表现 |
| 1.4 发病机制 |
| 1.5 ACO诊断标准 |
| 1.6 治疗 |
| 2 脾酪氨酸激酶SYK与气道炎症 |
| 2.1 Syk的分子结构及及表达 |
| 2.2 Syk的激活 |
| 2.3 Syk抑制剂的研究进展 |
| 2.4 Syk在哮喘和COPD中的作用 |
| 3 本论文的研究思路与内容 |
| 第二章 ACO动物模型的建立 |
| 前言 |
| 第一节 构建ACO小鼠模型的条件摸索 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品试剂 |
| 1.3 仪器设备 |
| 1.4 溶液配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 不同实验条件诱导的小鼠ACO气道炎症模型 |
| 2.2 样本采集 |
| 2.3 血球分类计数仪检测小鼠BALF中炎症细胞数量 |
| 2.4 ELISA法检测小鼠BALF中炎症因子水平和血清中抗体水平 |
| 2.5 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 不同方案小鼠BALF中白细胞分类计数结果 |
| 3.2 不同方案小鼠BALF中炎症因子与血清中抗体的水平 |
| 4. 小结 |
| 第二节 构建ACO小鼠模型条件的确立 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品试剂 |
| 1.3 仪器设备 |
| 1.4 溶液配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 OVA+LPS+CS诱导的小鼠ACO气道炎症模型 |
| 2.2 样本采集 |
| 2.3 H&E染色检测小鼠肺组织病理学改变 |
| 2.4 血球分类计数仪检测小鼠BALF中炎症细胞数量 |
| 2.5 ELISA法检测小鼠BALF中炎症因子水平和血清中抗体水平 |
| 2.6 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 ACO小鼠肺组织病理学改变 |
| 3.2 ACO小鼠BALF中白细胞分类计数结果 |
| 3.3 ACO小鼠BALF中炎症因子与血清中抗体的水平 |
| 4. 小结 |
| 第三节 讨论 |
| 第三章 基于RNA-SEQ转录组技术发现ACO小鼠炎症的潜在靶点 |
| 前言 |
| 第一节 基于RNA-Seq转录组技术发现ACO小鼠炎症的潜在靶点 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 组织标本 |
| 1.2 主要药品试剂 |
| 1.3 仪器设备 |
| 1.4 数据库、生物信息学软件信息 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 RNA-seq对转录组测序 |
| 2.2 RNA-seq测序结果及分析 |
| 2.3 差异表达基因的分析 |
| 2.4 qPCR验证差异表达基因 |
| 2.5 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 RNA质量检测结果 |
| 3.2 转录组测序质量分析 |
| 3.3 差异表达基因分析 |
| 3.4 qRT-PCR验证差异基因表达 |
| 第二节 讨论 |
| 第四章 基于白藜芦醇的呼吸系统疾病分子靶点文献挖掘ACO的潜在候选物的结构特性及其治疗靶点机制 |
| 前言 |
| 第一节 基于白藜芦醇的呼吸系统疾病分子靶点文献挖掘ACO的潜在候选物的结构特性及其治疗靶点机制 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 数据库和软件 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 白藜芦醇基本信息 |
| 2.2 白藜芦醇作用靶点预测 |
| 2.3 呼吸系统疾病靶点筛选 |
| 2.4 白藜芦醇-靶点-呼吸系统疾病PPI网络构建与拓扑分析 |
| 2.5 KEGG通路和GO基因富集分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 白藜芦醇与呼吸系统疾病共有靶点 |
| 3.2 白藜芦醇靶点-呼吸系统疾病靶点互作网络 |
| 3.3 核心靶点拓扑关系图 |
| 3.4 PPI网络中核心靶点的关键模块 |
| 3.5 核心靶点KEGG通路和GO功能富集分析 |
| 第二节 讨论 |
| 第五章 EAPP-2抗ACO气道炎症作用及作用机制研究 |
| 前言 |
| 第一节 EAPP-2抗ACO气道炎症作用的研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 细胞系及培养条件 |
| 1.3 主要药品试剂 |
| 1.4 仪器设备 |
| 1.5 溶液配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 OVA+LPS+CS诱导的小鼠ACO模型的建立 |
| 2.2 样本采集 |
| 2.3 H&E染色检测小鼠肺组织病理学改变 |
| 2.4 血球分类计数仪检测小鼠BALF中炎症细胞数量 |
| 2.5 细胞处理 |
| 2.6 酶联免疫吸附实验(ELISA) |
| 2.7 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 EAPP-2对ACO小鼠肺组织病理学改变的影响 |
| 3.2 EAPP-2对ACO小鼠BALF中白细胞分类计数的影响 |
| 3.3 EAPP-2对ACO小鼠血清中总IgE和IgG1生成水平的影响 |
| 3.4 EAPP-2对ACO小鼠BALF中炎症因子生成水平的影响 |
| 3.5 EAPP-2对RAW264.7细胞活力的影响 |
| 3.6 EAPP-2对RAW264.7细胞NO生成水平的影响 |
| 3.7 EAPP-2对RAW264.7细胞炎症因子生成水平的影响 |
| 4 小结 |
| 第二节 EAPP-2抗ACO气道炎症的靶点及作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 组织标本 |
| 1.2 细胞系及培养条件 |
| 1.3 主要药品试剂 |
| 1.4 仪器设备 |
| 1.5 溶液配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 用于Western blot的RAW264.7细胞处理 |
| 2.2 Western blot法检测蛋白表达 |
| 2.3 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 EAPP-2对ACO气道炎症小鼠肺组织Syk表达及其磷酸化的影响 |
| 3.2 EAPP-2对ACO气道炎症小鼠肺组织NF-κB表达及其磷酸化的影响 |
| 3.3 EAPP-2对ACO气道炎症小鼠肺组织NLRP3和iNOS表达的影响 |
| 3.4 EAPP-2对LPS诱导的RAW264.7细胞Syk表达及其磷酸化的影响 |
| 3.5 EAPP-2对LPS诱导的RAW264.7细胞NF-κB表达及其磷酸化的影响 |
| 3.6 EAPP-2对LPS诱导的RAW264.7细胞NLRP3和iNOS表达的影响 |
| 4 小结 |
| 第三节 EAPP-2抗ACO气道炎症的靶点及作用机制验证 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 靶向抑制剂验证EAPP-2抗LPS诱导的RAW264.7细胞中炎症作用机制 |
| 2.2 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 靶点抑制剂验证EAPP-2通过调控Syk通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子的生成 |
| 3.2 靶点抑制剂验证EAPP-2以Syk为靶点发挥其抗ACO气道炎症作用 |
| 4 小结 |
| 第四节 讨论 |
| 第六章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 博士期间的主要研究成果 |
| 项目资助情况 |
| 致谢 |
（2）PPARγ参与有氧运动调控chemerin改善COPD膈肌功能障碍的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 1.研究背景 |
| 2.研究目的意义 |
| 3.研究内容 |
| 文献综述 |
| 1.Chemerin及其受体 |
| 2.Chemerin与 COPD炎症反应 |
| 2.1 COPD肺内外的炎症反应 |
| 2.2 Chemerin对 COPD炎症的双向作用 |
| 2.3 Chemerin对 COPD相关炎症的影响 |
| 3.Chemerin与 COPD糖脂代谢 |
| 3.1 COPD糖脂代谢异常 |
| 3.2 chemerin调节COPD糖脂代谢 |
| 4.运动调控机体chemerin与运动防治COPD |
| 4.1 慢性阻塞性肺病的炎症与代谢异常 |
| 4.2 PPARγ-运动调节的chemerin的潜在机制 |
| 5.小结 |
| 第一部分 运动对 COPD大鼠膈肌功能障碍和对 PPARγ-chemerin/CMKLR1 通路及其下游炎性因子的影响 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 主要仪器及试剂 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要试剂配置 |
| 2.2 技术路线图 |
| 2.3 实验对象 |
| 2.4 实验分组 |
| 2.5 模型建立方案 |
| 2.6 运动干预 |
| 2.7 大鼠体重 |
| 2.8 肺功能检测 |
| 2.9 膈肌离体肌力检测 |
| 2.10 取材 |
| 2.11 肺与膈肌组织学检测 |
| 2.12 Western blot |
| 2.12.1 蛋白抽提 |
| 2.12.2 蛋白浓度测定 |
| 2.12.3 Western blot蛋白免疫印迹 |
| 2.13 统计学方法 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 CSE与运动训练影响大鼠体重 |
| 3.2 运动训练提升COPD大鼠肺功能 |
| 3.3 有氧运动提升大鼠膈肌功能 |
| 3.4 运动训练对COPD大鼠肺结构影响不明显 |
| 3.5 有氧运动影响COPD大鼠膈肌结构 |
| 3.6 运动影响膈肌PPARγ、chemerin/CMKLR1 的表达 |
| 3.7 运动抑制大鼠膈肌炎症因子的表达 |
| 3.8 运动调节大鼠膈肌降解与生长水平失衡 |
| 4.讨论分析 |
| 4.1 CSE及运动训练对COPD大鼠体重的影响 |
| 4.2 运动训练对COPD大鼠肺功能的影响 |
| 4.3 运动训练对COPD大鼠膈肌功能障碍的影响 |
| 4.4 运动训练对COPD大鼠肺与膈肌结构的影响 |
| 4.5 运动训练对COPD大鼠膈肌PPARγ-chemerin/CMKLR1 信号的影响 |
| 4.6 运动训练对COPD大鼠膈肌炎症因子的影响 |
| 4.7 运动训练对COPD大鼠膈肌泛素E3 连接酶的影响。 |
| 5.结论 |
| 第二部分 机械牵拉对LPS诱导炎症环境下L6细胞增殖水平及PPARγ-chemerin/CMKLR1通路及下游因子的影响 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 主要仪器及试剂 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要试剂配置 |
| 2.2 技术路线图 |
| 2.3 实验对象 |
| 2.4 细胞冻存和复苏 |
| 2.5 适宜LPS浓度诱导L6 成肌细胞炎症环境下培养 |
| 2.6 细胞牵拉 |
| 2.7 CCK-8 检测细胞增殖水平 |
| 2.8 Western blot |
| 2.8.1 蛋白抽提 |
| 2.8.2 BCA蛋白浓度测定 |
| 2.8.3 Western blot蛋白免疫印迹 |
| 2.9 统计学方法 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 不同浓度LPS对L6 细胞增殖水平的影响 |
| 3.2 机械牵拉促进炎症环境中L6 细胞增殖水平 |
| 3.3 机械牵拉影响PPARγ、chemerin/CMKLR1 信号表达 |
| 3.4 机械牵拉抑制L6 细胞促炎症因子的表达 |
| 3.5 机械牵拉影响L6 细胞蛋白降解与细胞激活情况 |
| 4.分析与讨论 |
| 4.1 LPS对L6 细胞增殖的影响 |
| 4.2 机械牵拉应力对LPS环境中L6 细胞活性的影响 |
| 4.3 机械牵拉对LPS刺激下L6 细胞PPARγ、chemerin/CMKLR1 表达的影响 |
| 4.4 机械牵拉对LPS刺激下L6 成肌细胞炎症水平的影响 |
| 4.5 机械牵拉对LPS刺激下L6 细胞蛋白降解与激活的影响 |
| 5.结论 |
| 第三部分 PPARγ在机械牵拉调控chemerin/CMKLR1 信号促LPS诱导炎症环境下L6 细胞增殖中的作用 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 主要仪器及试剂 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要试剂配置 |
| 2.2 技术路线图 |
| 2.3 LPS诱导L6 细胞炎症培养环境 |
| 2.4 不同浓度GW9662 和罗格列酮对LPS环境中L6 细胞活性的影响 |
| 2.5 实验对象及分组 |
| 2.6 细胞牵拉 |
| 2.7 CCK-8 检测细胞增殖水平 |
| 2.8 Western blot |
| 2.9 统计学方法 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 不同浓度GW9662 和罗格列酮对L6 细胞活性的影响 |
| 3.2 调控PPARγ的表达影响机械牵拉促炎症环境下L6 细胞增殖的作用 |
| 3.3 调控PPARγ表达影响细胞机械牵拉后chemerin/CMKLR1 信号表达 |
| 3.4 调控PPARγ表达影响细胞机械牵拉后炎症因子表达 |
| 3.5 调控PPARγ表达影响细胞机械牵拉后细胞降解与激活 |
| 4.分析与讨论 |
| 4.1 PPARγ对细胞增殖活性的影响 |
| 4.2 抑制或激活PPARγ后机械牵拉对细胞增殖活性的影响 |
| 4.3 抑制或激活PPARγ后机械牵拉对细胞PPARγ、chemerin/CMKLR1 蛋白表达的影响 |
| 4.4 抑制或激活PPARγ后机械牵拉对LPS环境下细胞炎症因子的影响 |
| 4.5 抑制或上调PPARγ后机械牵拉对肌蛋白降解、成肌细胞激活的影响 |
| 5.结论 |
| 全文总结 |
| 1.主要结论 |
| 2.研究创新点 |
| 3.研究不足及展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 大学本科至研究生学习经历 |
| 攻读博士学位期间学术科研成果及获奖情况 |
（3）健脾益肺Ⅱ号治疗慢阻肺临床疗效及减轻香烟暴露联合流感病毒感染小鼠肺炎症作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 慢性阻塞性肺疾病研究背景 |
| 第二节 慢性阻塞性肺疾病防治策略 |
| 一、慢性阻塞性肺疾病早期干预 |
| 二、中医药防治慢性阻塞性肺疾病作用机制研究 |
| 三、健脾益肺Ⅱ号防治慢性阻塞性肺疾病前期基础 |
| 第三节 慢性阻塞性肺疾病急性加重与呼吸道病毒感染的关系 |
| 一、呼吸道病毒感染在诱发慢阻肺急性加重过程中的免疫病理改变 |
| 二、吸烟对呼吸道病毒感染后宿主免疫应答的影响 |
| 第四节 气道炎症反应在慢性阻塞性肺疾病急性加重中的作用 |
| 一、慢阻肺炎症反应过程中的免疫细胞 |
| 二、炎症反应过程中的炎症介质 |
| 第五节 慢性阻塞性肺疾病急性加重动物模型的研究概况 |
| 一、病毒及其模拟物致慢性阻塞性肺疾病急性加重动物模型 |
| 二、细菌感染致慢性阻塞性肺疾病急性加重动物模型 |
| 三、熏烟联合LPS致慢性阻塞性肺疾病急性加重动物模型 |
| 第二章 健脾益肺Ⅱ号干预治疗COPD Ⅰ-Ⅱ级患者探索性临床研究 |
| 一、研究目标 |
| 二、研究对象 |
| 三、治疗方案 |
| 四、数据管理 |
| 五、统计分析 |
| 六、研究结果 |
| 七、讨论 |
| 第三章 健脾益肺Ⅱ号减少熏烟联合流感病毒感染小鼠肺部炎症的主要环节和作用机制 |
| 第一节 香烟暴露对低剂量流感病毒诱导的气道炎症的影响 |
| 一、实验仪器及材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第二节 健脾益肺Ⅱ号方对香烟暴露、低剂量流感病毒感染及二者联合诱导的气道免疫细胞的影响 |
| 一、实验仪器及材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第三节 熏烟期间给药对熏烟联合低剂量流感病毒感染小鼠持续预防作用的研究 |
| 一、实验仪器及材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 结语 |
| 一、研究总结 |
| 二、研究创新点 |
| 三、不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况、参与课题与获奖情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（4）金丝桃苷对PM2.5诱导的气道损伤及COPD急性加重的保护作用和机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩写词表 |
| 引言 |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 大气污染的现状及健康危害 |
| 1.1.1 大气污染的现状 |
| 1.1.2 大气污染对健康的危害 |
| 1.1.3 PM2.5对呼吸系统疾病的影响 |
| 1.1.4 PM2.5对慢性阻塞性肺疾病的影响 |
| 1.1.5 PM2.5对支气管哮喘的影响 |
| 1.1.6 PM2.5对肺纤维化的影响 |
| 1.1.7 PM2.5对肺癌的影响 |
| 1.2 PM2.5致呼吸系统损伤的机制 |
| 1.2.1 氧化应激 |
| 1.2.2 炎症机制 |
| 1.2.3 表观遗传机制 |
| 1.2.4 细胞自噬 |
| 1.2.5 细胞凋亡 |
| 1.3 金丝桃苷的药理学研究进展 |
| 1.3.1 金丝桃苷的化学结构及理化性质 |
| 1.4 金丝桃苷现代药理学研究概况 |
| 1.4.1 抗炎作用 |
| 1.4.2 抗氧化作用 |
| 1.4.3 抗肿瘤作用 |
| 1.4.4 肾脏保护作用 |
| 1.4.5 调节自噬相关的保护作用 |
| 第2章 PM2.5可以过度激活自噬诱导BEAS-2B细胞凋亡及金丝桃苷通过调节自噬对PM2.5诱导BEAS-2B细胞损伤发挥保护作用 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验细胞 |
| 2.1.2 仪器 |
| 2.1.3 药品和试剂 |
| 2.1.4 实验试剂的配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 制备水溶性PM和有机可萃取PM |
| 2.2.3 CCK8 法测定细胞存活率 |
| 2.2.4 Annexin-V/PI法检测细胞凋亡 |
| 2.2.5 Hoechst/PI染色 |
| 2.2.6 免疫荧光 |
| 2.2.7 Western blotting法检测目的蛋白的表达 |
| 2.2.8 图像和数据统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 O-PMs对Beas-2b细胞具有更强的毒性作用 |
| 2.3.2 O-PMs可以过度激活自噬 |
| 2.3.3 O-PMs可以引起促凋亡蛋白的激活 |
| 2.3.4 O-PMs可以引起AMPK/mTOR通路的激活 |
| 2.3.5 Hyp明显改善O-PMs诱导的Beas-2b细胞毒性和形态改变 |
| 2.3.6 Hyp显着抑制O-PMs诱导的Beas-2b细胞凋亡 |
| 2.3.7 Hyp抑制了O-PMs诱导的Beas-2b细胞凋亡通路相关蛋白的表达 |
| 2.3.8 Hyp抑制O-PMs诱导的Beas-2b细胞中自噬小体的形成 |
| 2.3.9 Hyp抑制了O-PMs诱导的Beas-2b细胞中自噬相关蛋白表达和AMPK/mTOR通路的激活 |
| 2.3.10 自噬抑制剂(3-MA)和Hyp减少O-PMs诱导的细胞凋亡(Hoechst 33342/PI染色) |
| 2.3.11 自噬抑制剂(3-MA)和Hyp抑制O-PMs诱导的LC3Ⅱ表达 |
| 2.3.12 3-MA增强Hyp对O-PMs诱导的自噬相关蛋白表达的抑制作用 |
| 2.3.13 3-MA增强Hyp对O-PMs诱导的凋亡相关蛋白表达的抑制作用 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 金丝桃苷通过AMPK/MTOR调控自噬减少BEAS-2B细胞凋亡 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 实验细胞 |
| 3.1.2 仪器 |
| 3.1.3 药品和试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞培养 |
| 3.2.2 Western blotting法检测目的蛋白的表达 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 CC增强金丝桃苷对AMPK/mTOR通路的调控作用 |
| 3.3.2 CC增强金丝桃苷对自噬相关蛋白的抑制作用 |
| 3.3.3 CC增强金丝桃苷对凋亡相关蛋白的抑制作用 |
| 3.3.4 AICAR减弱金丝桃苷对AMPK/mTOR通路的调控作用 |
| 3.3.5 AICAR减弱金丝桃苷对自噬相关蛋白的抑制作用 |
| 3.3.6 AICAR减弱金丝桃苷对凋亡相关蛋白的抑制作用 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 金丝桃苷对PM2.5诱导小鼠气道损伤的保护作用及其机制研究 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 实验用仪器 |
| 4.1.2 药品和试剂 |
| 4.1.3 实验试剂的配制 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 PM2.5诱导小鼠肺损伤模型的建立 |
| 4.2.3 支气管肺泡灌洗液(BALF)的收集 |
| 4.2.4 肺组织病理学检查和评分 |
| 4.2.5 支气管肺泡灌洗液中细胞计数的测定 |
| 4.2.6 支气管肺泡灌洗液中细胞因子的测定 |
| 4.2.7 Western Blot检测肺组织蛋白水平 |
| 4.2.8 数据统计与分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 Hyp显着抑制PMs诱导小鼠肺损伤中的炎症反应 |
| 4.3.2 Hyp显着抑制PMs诱导小鼠肺损伤的肺组织病理损伤 |
| 4.3.3 Hyp在小鼠肺组织中可以调控AMPK/mTOR通路 |
| 4.3.4 Hyp抑制PMs诱导小鼠肺组织中自噬相关蛋白表达 |
| 4.3.5 Hyp抑制PMs诱导小鼠肺组织中凋亡相关蛋白表达 |
| 4.3.6 Hyp通过AMPK抑制PMs诱导小鼠肺损伤的炎症反应 |
| 4.3.7 Hyp通过AMPK抑制PMs诱导小鼠肺组织病理损伤 |
| 4.3.8 PMs诱导小鼠肺损伤中Hyp通过AMPK/mTOR调控LC3表达 |
| 4.3.9 Hyp可以通过AMPK抑制PMs诱导小鼠肺损伤中LC3和caspase-3水平 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 金丝桃苷对PM2.5诱导COPD肺损伤加重的保护作用及其机制研究 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 实验用仪器 |
| 5.1.2 药品和试剂 |
| 5.1.3 实验试剂的配制 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 COPD小鼠模型的建立 |
| 5.2.3 支气管肺泡灌洗液(BALF)的收集 |
| 5.2.4 肺组织病理学检查和评分 |
| 5.2.5 支气管肺泡灌洗液中细胞计数的测定 |
| 5.2.6 支气管肺泡灌洗液中细胞因子的测定 |
| 5.2.7 Western Blot检测肺组织蛋白水平 |
| 5.2.8 数据统计与分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 金丝桃苷显着抑制PM2.5诱导COPD模型肺损伤炎症反应加重 |
| 5.3.2 金丝桃苷显着缓解PM2.5诱导COPD模型肺损伤加重的肺组织病理学损伤 |
| 5.3.3 金丝桃苷显着抑制PM2.5诱导COPD模型肺损伤加重的气道粘液分泌增多 |
| 5.3.4 金丝桃苷显着抑制PM2.5诱导COPD肺损伤加重模型中NF-κB通路激活 |
| 5.3.5 金丝桃苷显着抑制PM2.5诱导COPD肺损伤加重模型中NLRP3 炎症小体激活 |
| 5.3.6 金丝桃苷显着抑制PM2.5诱导COPD肺损伤加剧模型中PM2.5诱导的自噬蛋白表达 |
| 5.3.7 金丝桃苷显着抑制PM2.5诱导COPD模型肺损伤加重中凋亡蛋白表达 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（5）从三焦“膜性四通管道”论治肺结节病的理论及临床研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 肺结节病的中医药研究进展 |
| 1 病名探讨 |
| 2 病因 |
| 3 病机 |
| 4 中医药治疗 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 综述二 肺结节病的西医学研究进展 |
| 1 病因 |
| 2 发病机制 |
| 3 临床表现和辅助检查 |
| 4 诊断 |
| 5 治疗 |
| 6 动物模型 |
| 参考文献 |
| 第一部分 糖皮质激素治疗肺结节病的Meta分析 |
| 前言 |
| 1 资料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 研究意义及不足 |
| 参考文献 |
| 第二部分 从三焦“膜性四通管道”论治肺结节病的理论研究 |
| 前言 |
| 研究一 三焦理论演变 |
| 1 三焦形质的演变 |
| 2 三焦功能的演变 |
| 3 三焦辨证 |
| 4 小结 |
| 研究二 姜良铎教授三焦“膜性四通管道”理论 |
| 1 三焦“膜性四通管道”的形质 |
| 2 三焦“膜性四通管道”的生理功能 |
| 3 三焦“膜性四通管道”的病因病机 |
| 4 治疗原则 |
| 5 小结 |
| 研究三 从三焦“膜性四通管道”论治肺结节病 |
| 1 从三焦理论认识肺结节病基本病机 |
| 2 姜良铎教授论治肺结节病 |
| 3 通化方的由来 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 通化方治疗肺结节病的临床研究 |
| 前言 |
| 1 临床资料 |
| 2 研究方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 “通化方”治疗肺结节病作用机制的网络药理学研究 |
| 前言 |
| 研究一 肺结节病相关基因 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 研究二 通化方有效活性成分和基因靶点 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 研究三 通化方-肺结节病-靶点调控网络及PPI网络 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 研究四 靶点基因生物功能注释分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1 结论 |
| 2 创新性 |
| 3 不足与展望 |
| 致谢 |
| 附录 纳入研究资料提取表 |
| 病例报告表 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（6）固本止咳中药对COPD模型小鼠呼吸道损伤修复的调控机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述一 扶正固卫、肺主皮毛理论与慢性阻塞性肺疾病呼吸道损伤修复 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 蛋白质组学在中医药中的应用研究 |
| 参考文献 |
| 第一部分 固本止咳中药对COPD模型小鼠的治疗作用和调控呼吸道损伤修复作用研究 |
| 前言 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 基于组学的固本止咳中药调控COPD模型小鼠呼吸道损伤修复机制的整体研究 |
| 前言 |
| 实验一 基于质谱技术的固本止咳中药成分分析 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 实验二 基于蛋白组学的固本止咳中药调控COPD模型小鼠损伤修复机制研究 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 基于JAK-STAT信号通路的固本止咳中药调控COPD模型小鼠呼吸道损伤修复机制研究 |
| 前言 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）和调血脉通肺方防治慢阻肺肺部炎症的作用机理研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 引言 |
| 第一部分 实验研究 |
| 技术路线 |
| 1、实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器设备 |
| 1.3 实验试剂及耗材 |
| 1.4 实验药物 |
| 1.5 指标选择依据及意义 |
| 2、实验方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 复制慢阻肺大鼠模型 |
| 2.3 模型评价 |
| 2.4 药物干预 |
| 2.5 指标检测方法 |
| 2.6 统计分析 |
| 3、实验结果 |
| 3.1 和调血脉通肺方对大鼠行为学的影响 |
| 3.2 和调血脉通肺方对大鼠脏器指数的影响 |
| 3.3 和调血脉通肺方对大鼠肺组织病理形态(HE染色)的影响 |
| 3.4 和调血脉通肺方对大鼠结肠组织病理形态的影响 |
| 3.5 和调血脉通肺方对大鼠炎症相关指标的影响 |
| 3.5.1 和调血脉通肺方对大鼠血中性粒细胞计数和中性粒细胞百分比的影响 |
| 3.5.2 和调血脉通肺方对大鼠血清IL-8 含量的影响 |
| 3.5.3 和调血脉通肺方对大鼠肺组织IL-1β和 TNF-αm RNA相对表达的影响 |
| 3.6 和调血脉通肺方对大鼠肺血管重构相关指标的影响 |
| 3.6.1 和调血脉通肺方对大鼠肺血管病理形态(维多利亚蓝+Van Gieson染色)的影响 |
| 3.6.2 和调血脉通肺方对大鼠血清ET-1和VEGF含量的影响 |
| 3.6.3 和调血脉通肺方对大鼠肺组织HIF-1αm RNA相对表达的影响 |
| 3.7 和调血脉通肺方对大鼠气道黏膜免疫相关指标的影响 |
| 3.7.1 和调血脉通肺方对大鼠肺组织SIg A含量的影响 |
| 3.7.2 和调血脉通肺方对大鼠肺部菌群相对丰度的影响 |
| 3.8 和调血脉通肺方对大鼠肠黏膜屏障相关指标的影响 |
| 3.8.1 和调血脉通肺方对大鼠结肠组织ZO-1和Claudin-1含量的影响 |
| 3.8.2 和调血脉通肺方对大鼠结肠组织SIg A含量的影响 |
| 3.8.3 和调血脉通肺方对大鼠肠内容物菌群相对丰度的影响 |
| 4、讨论 |
| 4.1 和调血脉通肺方能够改善慢阻肺模型大鼠肺部及全身炎症水平 |
| 4.2 和调血脉通肺方能够下调肺部炎症因子水平、抑制肺血管重构,改善慢阻肺模型大鼠肺部炎症 |
| 4.3 和调血脉通肺方能够调节气道黏膜免疫,改善慢阻肺模型大鼠肺部炎症 |
| 4.4 和调血脉通肺方能够修复肠黏膜屏障损伤,减缓全身慢性炎症水平,改善慢阻肺模型大鼠肺部炎症 |
| 4.5 小结 |
| 5、结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 文献研究 中医药调节慢性炎症防治慢阻肺的机理 |
| 1、慢性炎症贯穿慢阻肺发生发展全过程 |
| 2、慢阻肺是一种可先后累及多个系统、脏器的全身性疾病 |
| 3、中医对慢阻肺炎症的认识 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表文章及参与科研课题情况 |
| 致谢 |
（8）基于“肺与大肠相表里”研究清源化痰颗粒对慢阻肺急性加重期炎症反应及肠道菌群的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 绪论 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1. 中医学经典理论研究的价值 |
| 2. 中医学经典理论——肺与大肠相表里 |
| 2.1 阴阳属性 |
| 2.2 气机升降 |
| 2.3 经络络属 |
| 3. “肺与大肠相表里”理论与现代医学的关系 |
| 3.1 胚胎发育同源 |
| 3.2 粘膜免疫相关 |
| 3.3 微生物相互影响 |
| 3.4 神经内分泌联系 |
| 4. 慢阻肺病程中肺与大肠的关系 |
| 5. 前期研究基础 |
| 6. 清源化痰颗粒的组方立义 |
| 7. 本实验的研究意义 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究 |
| 1. COPD“从肠治肺”的国内外研究 |
| 1.1 国外研究 |
| 1.2 国内研究 |
| 2. 清源化痰颗粒对“从肠治肺”的继承与发展 |
| 2.1 主要证型 |
| 2.2 临床基础 |
| 3. 清源化痰颗粒整体研究思路 |
| 参考文献 |
| 第三部分 网络药理学研究 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 清源化痰颗粒中活性化合物的鉴定 |
| 1.2 药物活性成分相关靶标预测 |
| 1.3 确定疾病相关靶标 |
| 1.4 确定“药物-疾病”共同靶点 |
| 1.5 蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络的构建 |
| 1.6 “复方-活性成分-作用靶点”网络的构建 |
| 1.7 G0和KEGG途径富集分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 清源化痰颗粒的有效成分和对应靶标 |
| 2.2 疾病相关靶标 |
| 2.3 药物-疾病靶标 |
| 2.4 PPI目标网络 |
| 2.5 “复方-活性成分-作用靶点”网络 |
| 2.6 富集结果分析 |
| 3. 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 清源化痰颗粒对慢阻肺急性加重期肺部炎症反应的影响 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 造模及给药 |
| 2.2 小鼠血清、组织及粪便样本的收集 |
| 2.3 观察各组小鼠一般情况 |
| 2.4 组织HE病理染色及肺气肿评价 |
| 2.5 肺泡灌洗液炎性细胞汁数 |
| 2.6 小鼠肺组织免疫荧光检测 |
| 2.7 Western blot检测相关蛋白表达 |
| 2.8 PCR检测肺组织中HMGB1 mRNA、RAGE mRNA的表达水平 |
| 2.9 数据统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 各组小鼠一般情况 |
| 3.2 清源化痰颗粒对小鼠肺组织炎症程度的影响 |
| 3.3 清源化痰颗粒对肺泡灌洗液中性粒细胞的影响 |
| 3.4 清源化痰颗粒对肺组织中性粒细胞凋亡的影响 |
| 3.5 清源化痰颗粒对Casp3、C-casp3、HMGB1、RAGE蛋白表达水平的影响 |
| 3.6 清源化痰颗粒对HMGBlmRNA、RAGEmRNA表达水平的影响 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 第五部分 清源化痰颗粒对AECOPD小鼠肠道菌群及代谢产物的影响 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 造模及给药 |
| 2.2 小鼠粪便样本的收集 |
| 2.3 16S rDNA小鼠粪便菌群测序 |
| 2.4 短链脂肪酸检测 |
| 2.5 数据分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 OUT分析 |
| 3.2 群落组成分析 |
| 3.3 p多样性分析 |
| 3.4物种差异分析 |
| 3.5 短链脂肪酸检测 |
| 3.6 物种与代谢产物相关性分析 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 第六部分 菌群移植对AECOPD小鼠炎症状态的影响 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 造模及给药 |
| 2.2 小鼠血清、组织及粪便样本的收集 |
| 2.3 实验指标 |
| 2.4 数据统计分析 |
| 3. 结果 |
| 3.1 菌群耗竭模型验证 |
| 3.2 各组小鼠一般情况 |
| 3.3 菌群移植对小鼠肺组织炎症程度的影响 |
| 3.4 清源化痰颗粒对肺泡灌洗液中性粒细胞的影响 |
| 3.5 菌群移植对小鼠Casp3、C-casp3、HMGB1、RAGE蛋白表达水平的影响 |
| 3.6 菌群移植对小鼠HMGB1mRNA、RAGE mRNA表达水平的影响 |
| 4. 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 附录 |
| 附录A COPD表型相关靶标 |
| 附录B |
| 附录C |
| 附录D 综述 基于“肺与大肠相表里”运用通腑法治疗慢阻肺研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（9）清金化痰汤及黄芩苷通过TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3通路抑制LPS诱导的急性肺损伤的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药防治急性肺损伤的研究进展 |
| 1 中医对急性肺损伤的认识 |
| 2 急性肺损伤的病因病机 |
| 3 中药复方药干预急性肺损伤的研究 |
| 4 中药单体干预急性肺损伤的研究 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 综述二 急性肺损伤发病机制及治疗药物的研究进展 |
| 1 病因与临床表现 |
| 2 病理特征 |
| 3 ALI的发病机制 |
| 4 ALI的治疗药物 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 第一部分 清金化痰汤干预急性肺损伤的研究 |
| 前言 |
| 实验一 清金化痰汤对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 清金化痰汤对急性肺损伤大鼠TLR4信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 清金化痰汤含药血清冻干粉对BEAS-2B细胞损伤炎症因子表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 质谱分析清金化痰汤及其含药血清的主要成分 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 黄芩苷对急性肺损伤干预作用的研究 |
| 前言 |
| 实验五 黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症因子表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验六 黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症反应的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验七 黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的TLR4信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验八 黄芩苷对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验九 黄芩苷对急性肺损伤大鼠TLR4和MAPK信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足及展望 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（10）原花青素β2对百草枯所致急性呼吸窘迫综合征的保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 百草枯所致ARDS模型的建立及原花青素β2的干预作用 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 动物及材料 |
| 2.2 实验动物分组及处理 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 大鼠一般情况监测 |
| 3.2 肺组织大体观察 |
| 3.3 肺湿干比 |
| 3.4 各组大鼠肺通透指数的改变 |
| 3.5 各组大鼠肺组织及肺泡灌洗液中炎症细胞的变化 |
| 3.6 肺组织病理学观察及肺损伤评分 |
| 4 讨论 |
| 4.1 ARDS模型的建立与评价 |
| 4.2 百草枯与ARDS |
| 4.3 原花青素β2对肺通透性的影响 |
| 4.4 原花青素β2对炎症反应的影响 |
| 4.5 原花青素β2对百草枯所致ARDS的治疗作用 |
| 5 结论 |
| 第二部分 原花青素β2改善百草枯所致急性呼吸窘迫综合征的机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验药品与试剂 |
| 2.2 溶液配制 |
| 2.3 实验仪器 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.5 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 原花青素β2对百草枯所致中性粒细胞炎症和氧化应激的影响 |
| 3.2 原花青素对百草枯中毒大鼠肺泡灌洗液中IL-1β、IL-18含量的影响 |
| 3.3 原花青素对百草枯中毒大鼠肺组织中IL-1β、IL-18 mRNA的影响 |
| 3.4 原花青素对百草枯中毒大鼠肺组织中NLRP3、ASC、caspase-1水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 氧化应激与ARDS |
| 4.2 原花青素β2通过抗氧化应激作用减轻肺损伤 |
| 4.3 NLRP3炎性小体与ARDS |
| 4.4 IL-1β与ARDS |
| 4.5 IL-18与ARDS |
| 5 结论 |
| 第三部分 NLRP3炎性小体在百草枯所致急性呼吸窘迫综合征中的作用研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料与动物分组 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 静默NLRP3基因对大鼠一般状况的影响 |
| 3.2 静默NLRP3基因对肺湿干比的影响 |
| 3.3 静默NLRP3基因对肺通透性的影响 |
| 3.4 静默NLRP3基因对肺泡灌洗液PMN的影响 |
| 3.5 静默NLRP3基因对肺组织中IL-1β与IL-18的表达情况的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本课题的创新点与局限性 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 急性呼吸窘迫综合征发病机制及治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
四、慢性阻塞性肺疾病大鼠模型支气管肺组织细胞间粘附分子1及部分中性粒细胞炎症因子的研究（论文参考文献）
- [1]ACO疾病动物模型的建立及其潜在机制靶点、候选药物的发现研究[D]. 李姝仪. 北京协和医学院, 2021
- [2]PPARγ参与有氧运动调控chemerin改善COPD膈肌功能障碍的机制研究[D]. 李健. 上海体育学院, 2021
- [3]健脾益肺Ⅱ号治疗慢阻肺临床疗效及减轻香烟暴露联合流感病毒感染小鼠肺炎症作用研究[D]. 蔡甜甜. 广州中医药大学, 2021(02)
- [4]金丝桃苷对PM2.5诱导的气道损伤及COPD急性加重的保护作用和机制研究[D]. 高云. 吉林大学, 2021(01)
- [5]从三焦“膜性四通管道”论治肺结节病的理论及临床研究[D]. 满君. 北京中医药大学, 2021(01)
- [6]固本止咳中药对COPD模型小鼠呼吸道损伤修复的调控机制研究[D]. 王明哲. 北京中医药大学, 2021(01)
- [7]和调血脉通肺方防治慢阻肺肺部炎症的作用机理研究[D]. 李玉卿. 云南中医药大学, 2021(02)
- [8]基于“肺与大肠相表里”研究清源化痰颗粒对慢阻肺急性加重期炎症反应及肠道菌群的影响[D]. 薛佳茜. 南京中医药大学, 2021(01)
- [9]清金化痰汤及黄芩苷通过TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3通路抑制LPS诱导的急性肺损伤的研究[D]. 朱长乐. 北京中医药大学, 2020(04)
- [10]原花青素β2对百草枯所致急性呼吸窘迫综合征的保护作用及机制研究[D]. 江银玲. 安徽医科大学, 2020(04)