一、中药814对肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子基因表达的抑制作用（论文文献综述）
胡艳香[1]（2021）在《TSC1-mTOR在肺泡巨噬细胞稳态维持和IL-13信号应答中的作用研究》文中研究指明目的 肺泡巨噬细胞是驻留在肺泡表面的一类巨噬细胞,在肺免疫应答和肺表面活性物质清除等方面发挥重要作用。然而,调控肺泡巨噬细胞发育和功能的分子机制还有待进一步研究。雷帕霉素哺乳动物靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）是一个丝氨酸/苏氨酸激酶,mTOR的活性受结节性硬化症复合物1/2（tuberous sclerosis 1/2,TSC1/2）调控,TSC1-mTOR通路在细胞发育、增殖和代谢等过程中发挥重要作用,但其在肺泡巨噬细胞中的作用机制还需要更加深入的研究。方法 在本研究中,通过构建在肺泡巨噬细胞中特异性敲除Tsc1基因(Tsc1f/f-Cd11c-Cre,Tsc1f/f-Lys M-Cre)、mTor基因(mTorf/f-Cd11c-Cre)、Rptor（mTORC1,mTOR复合物1）基因(Rptorf/f-Cd11c-Cre)小鼠,研究了TSC1-mTOR信号通路对肺泡巨噬细胞的调控作用。采用流式细胞术检测分析肺泡巨噬细胞Tsc1敲除小鼠、mTor敲除小鼠、Rptor敲除小鼠肺组织单细胞悬液和支气管肺泡灌洗液中肺泡巨噬细胞的占免疫细胞的百分比和数量,以及肺泡巨噬细胞的增殖和死亡情况;采用免疫印迹法检测分析细胞凋亡和坏死信号的激活情况,以及细胞因子白介素-13（Interleukin-13,IL-13）信号通路的激活。通过检测细胞释放到胞外的乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）含量,分析巨噬细胞的死亡程度;采用实时荧光定量PCR检测M2巨噬细胞特征性基因,肺泡巨噬细胞标志基因,以及IL-13受体基因的表达。结果 流式细胞术检测分析发现,与对照组野生型（WT）小鼠相比,Tsc1f/f-Cd11c-Cre和Tsc1f/f-Lys M-Cre小鼠肺组织单细胞悬液和支气管肺泡灌洗液中肺泡巨噬细胞的所占免疫细胞的百分比和数量都显着性降低。此外,与对照组野生型（WT）小鼠相比,mTorf/f-Cd11c-Cre和Rptorf/f-Cd11c-Cre小鼠肺组织单细胞悬液和支气管肺泡灌洗液中肺泡巨噬细胞的所占免疫细胞的百分比和数量也都显着性降低。机制上,Tsc1缺失后,巨噬细胞的凋亡和坏死都显着增高。虽然参与调控肺泡巨噬细胞稳态维持和功能的多种细胞因子,包括粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF）、巨噬细胞集落刺激因子（macrophage colony stimulating factor,M-CSF）、转化生长因子-b（transforming growth factor-β,TGF-b）和IL-13都能激活mTOR,但Tsc1缺失主要影响了IL-13诱导的JAK1和STAT3的磷酸化激活。此外,IL-13诱导的一些基因,包括M2巨噬细胞特征性基因（如Arg1、Fizz、Ym1和Clec7a）、肺泡巨噬细胞标志基因（如Pparg、Fabp4/5、Nfil3和Car4）,以及IL-13受体基因（如Il13ra1、Il13ra2）,均受到TSC1-mTOR信号通路的调控。结论 Tsc1敲除、mTor敲除和Rptor敲除都导致肺泡巨噬细胞的数量显着性降低,表明mTORC1活性的精准调控对肺泡巨噬细胞稳态维持具有至关重要的作用。Tsc1缺失的巨噬细胞容易发生凋亡和坏死,这可能是导致Tsc1敲除小鼠中肺泡巨噬细胞数量减少的原因。同时,TSC1调控肺泡巨噬细胞中IL-13信号通路激活和诱导的基因表达。综上,本研究的结果表明,TSC1-mTOR通路通过整合细胞因子信号和代谢信号,在肺泡巨噬细胞稳态维持和IL-13信号应答中起关键作用,为研究肺泡巨噬细胞的调控机制及肺部免疫反应提供了新思路。
王志超[2]（2021）在《陈皮碱性提取物调控内质网应激治疗肺纤维化的机制研究》文中进行了进一步梳理目的:肺纤维化是一种少见的间质性肺疾病,预后较差,治疗有限。团队前期研究发现,陈皮碱性提取物（Citrus Alkaline Extracts,CAE）能够发挥抗肺纤维化的作用,对肺成纤维细胞有明显抑制作用,但其抗肺纤维化的分子机制仍不完全明确,尤其对肺泡上皮细胞（Alveolar Epithelial Cell,AEC）的作用还有待探索。本研究首先进一步完成对CAE主要成分的鉴定,随后验证CAE对博来霉素（Bleomycin,BLM/Bleo）诱导的小鼠肺纤维化模型的治疗作用,之后利用组织样本及AECⅡ,体内体外探讨CAE对内质网应激（Endoplasmic Reticulum Stress,ERS）、ATF3/PINK1信号通路以及线粒体稳态的调节作用,最后探索AEC Ⅱ和肺成纤维细胞间的交互作用及可能参与这个过程的细胞介质。方法:1.CAE的制备、鉴定和质控:利用95%乙醇反复煎煮陈皮饮片,通过过滤、浓缩、分散、调酸、调减、萃取等步骤从陈皮乙醇煎液中提取黄色粉末CAE;通过UPLC-ESI-MS/MS对CAE进行检测并完成质量控制,获得CAE总离子流图,提取保留时间、母离子分子量、子离子分子量、相对分子质量、峰强度等信息,利用植物次生代谢物数据库Metware对CAE二级谱进行智能匹配完成物质定性分析,采用多反应监测模式检测物质相对含量完成相对定量分析;2.BLM诱导小鼠肺纤维化模型:将120只小鼠分为空白组、腰穿针气管插管模型组、留置针气管插管模型组和气管切开模型组,分别利用腰穿针气管插管造模法、留置针气管插管造模法和气管切开造模法注射BLM诱导肺纤维化模型,观察小鼠一般情况,通过H&E和Masson染色观察肺组织病理学改变,并通过ELISA检测肺组织羟脯氨酸水平;3.CAE对小鼠肺纤维化的抑制作用:将50只小鼠分为空白组、模型组、CAE低剂量组（32 mg/kg/d）、CAE中剂量组（64 mg/kg/d）和CAE高剂量组（96 mg/kg/d）,利用腰穿针气管插管法气管注射BLM诱导肺纤维化模型,并分别以不同浓度CAE的CMC-Na溶液灌胃21天,通过H&E、Masson以及天狼星红染色观察小鼠肺组织病理学改变,并通过Western Blot检测肺组织胶原沉积水平;4.CAE缓解AEC Ⅱ中ERS调控ATF3/PINK1通路:通过Western Blot检测ERS相关蛋白以及ATF3、PINK1在肺组织中的表达情况,通过免疫荧光观察肺组织中ERS标志物BiP以及ATF3、PINK1的变化及重叠情况,再通过免疫荧光观察肺组织中AEC Ⅱ标志物SPC以及ATF3、PINK1的变化及重叠情况;之后将A549细胞分为空白组,模型组,CAE低剂量组（50 μg/mL）,CAE中剂量组（100μg/mL）、CAE高剂量组（200 μg/mL）和阳性对照组（TUDCA,5 μg/mL）,利用衣霉素（Tunicamycin,TM,2μg/ml）干预 12 h 建立 ERS模型,分别用含不同浓度CAE的培养基干预48 h,通过Western Blot检测ERS相关蛋白以及ATF3、PINK1在A549细胞中的表达情况,再通过免疫荧光观察A549细胞中BiP以及ATF3、PINK1的变化及重叠情况;5.CAE通过ATF3/PINK1通路调控AEC Ⅱ线粒体稳态:首先通过JC-10检测A549细胞的线粒体膜电位水平,再通过ROS检测试剂盒检测A549细胞的ROS水平,从而观察A549细胞线粒体功能;之后通过shRNA质粒对A549细胞的ATF3及PINK1进行基因沉默,并再次通过JC-10和ROS检测试剂盒检测A549细胞的线粒体膜电位及ROS水平,从而观察A549细胞线粒体功能;6.CAE通过调控AEC Ⅱ影响肺成纤维细胞:A549细胞经TM和CAE干预后,更换不含CAE的低血清培养基继续培养72 h,收集细胞上清干预MRC5细胞,通过Western Blot检测MRC5细胞的胶原水平,并通过ELISA检测细胞上清中TGF-β1、IL-6及IL-10的水平。结果:1.CAE的制备、鉴定和质控:CAE为黄色粉末,平均产量约1.56 mg/kg;通过UPLC-ESI-MS/MS鉴定出315种物质,包括143黄酮类物质和32种生物碱类物质,其中80种物质的一级结构和二级结构完全匹配,可以确定为CAE的活性成分,包括47黄酮类物质和5种生物碱类物质,其中具有代表性的黄酮类物质有桔皮素、川陈皮素、芸香柚皮苷、新橙皮苷、甜橙素、橙皮苷,具有代表性的生物碱类物质有辛弗林、枸橼苦素Ⅰ、扁平桔碱Ⅰ、芽子碱;不同批次CAE样本间无明显差异;2.BLM诱导小鼠肺纤维化模型:在腰穿针气管插管模型组、留置针气管插管模型组和气管切开模型组三组中,气管切开模型组体重下降最为明显,存活率也最低（60%）,相比而言,留置针气管插管模型组存活率是最高的（90%）;腰穿针气管插管模型组和气管切开模型组肺泡炎及肺纤维化程度较高,且第21天最明显,而留置针气管插管模型组较低;腰穿针气管插管模型组和气管切开模型组羟脯氨酸含量显着高于空白组（P<0.001）;3.CAE对小鼠肺纤维化的抑制作用:CAE干预组肺泡结构改善,炎症浸润减少,胶原沉积减轻,尤以CAE高剂量组最为明显;和模型组相比,CAE高剂量组的肺泡炎评分显着降低（P<0.05）,肺纤维化评分及胶原半定量分析也显着降低（P<0.001）,同时COLlα1和COL3蛋白表达均显着降低（P<0.05）;4.CAE缓解AEC Ⅱ中ERS调控ATF3/PINK1通路:在肺组织中,CAE干预组和模型组相比,BiP、PERK、p-eIF2α、ATF4和ATF3表达均明显降低,PINK1则明显升高,且呈浓度依赖性,其中CAE高剂量组差异最显着（P<0.05;P<0.001;P<0.01;P<0.001;P<0.01;P<0.01）,且BiP和ATF3的免疫荧光变化有较大重叠,ATF3和PINK1的免疫荧光变化均与SPC有较大重叠。在A549细胞中,BiP、PERK、p-eIF2α、ATF4和ATF3表达均明显降低,PINK1则明显升高,且呈浓度依赖性,其中CAE高剂量组差异最显着（P<0.05;P<0.001;P<0.01;P<0.001;P<0.01;P<0.01）,且 BiP 和 ATF3 的免疫荧光变化有较大重叠;5.CAE通过ATF3/PINK1通路调控AEC Ⅱ线粒体稳态:在A549细胞中,CAE干预组和模型组相比,线粒体膜电位明显降低,呈浓度依赖性,其中CAE高剂量组差异最显着（P<0.001）,ROS浓度也明显降低,呈浓度依赖性,其中CAE高剂量组差异最显着（P<0.01）;ATF3沉默后,和模型组相比,CAE干预组和阳性对照组PINK1表达未见显着升高,线粒体膜电位虽略有升高,但没有显着性差异;PINK1沉默后,线粒体膜电位虽略有升高,但同样没有显着性差异;6.CAE通过调控AEC Ⅱ影响肺成纤维细胞:在MRC5细胞中,CAE干预组和模型组相比,COLlαl和COL3表达均有明显降低,且呈浓度依赖性,其中CAE高剂量组有显着差异（P<0.05;P<0.05）;在细胞上清中,CAE干预组和模型组相比,TGF-β1、IL-6和IL-10表达均有明显降低,且呈浓度依赖性,其中CAE高剂量组有显着差异（P<0.001;P<0.05;P<0.05）。结论:1.CAE的活性成分主要为黄酮类物质和生物碱类物质;2.CAE可以缓解AEC Ⅱ的ERS,并通过ATF3/PINK1信号通路调节AEC Ⅱ线粒体稳态;3.CAE通过减少AEC Ⅱ中TGF-β1等细胞因子的分泌,间接降低肺成纤维细胞的胶原表达,最终缓解肺纤维化。
其布日[3]（2021）在《额尔敦-乌日勒的活性成分分析及其对小胶质细胞基因调控作用的研究》文中认为脑卒中是我国第一大死亡原因,是全球仅次于缺血性心脏病的第二大死亡原因。因此,研发新型抗脑卒中药物意义重大。额尔敦-乌日勒（EW）是蒙医治疗神经系统疾病的经典方剂,具有良好的神经保护作用,对脑卒中引起的半身不遂等症状疗效显着,因而得到广泛的临床应用。然而,EW化学成分复杂,作用机制不明确。因此,必需明确EW的生物活性成分,并阐明其神经保护作用机制。本论文中分析了EW的部分有效成分,并发现了EW对大脑中动脉阻塞/再灌注损伤（MCAO/R）模型大鼠脑内小胶质细胞的基因调控作用、极化作用以及从抗神经性炎症作用。【研究目的】（1）验证EW对MCAO/R模型大鼠病变部位组织内基因表达的调控作用,并分析EW中所含有的神经活性化合物;（2）确定EW在脑卒中恢复期间通过调节小胶质细胞极化来抑制神经炎症的主要化合物;（3）确定EW的分级分离组分中的关键抗炎分子及作用机理以及对神经细胞保护及突触生长的影响;（4）EW中关键活性分子的协同作用对小胶质细胞基因表达谱的影响。【研究方法】（1）建立大鼠MCAO/R模型,连续给药两周。第15天,提取大鼠大脑皮质病变区组织的总RNA,并进行转录组测序（RNA-seq）分析。筛选未处理组、MCAO模型组和EW给药组之间显着差异表达的基因,并分析各个基因的功能以及在缺血性脑卒中恢复过程中的可能作用。（2）根据文献报道收集EW药材中与神经相关的生物活性化学分子信息,采用Chem Draw软件画出结构式并建立数据库,命名为“EW神经活性化合物数据库”;其次,采用五种不同溶剂提取EW可溶解组分,并使用UPLC-QTof-MS分析其活性化合物。（3）以调控小鼠小胶质细胞（BV2细胞株）M1表型表达的细胞因子Cxcl10为筛选标准,利用RT-q PCR法对EW的5种溶剂提物进行快速筛选,选出了调控作用最为显着的提取物,通过两次HPLC半制备分离,得到优化的生物活性小分子组,并利用UPLC-QTof-MS鉴定了其生物活性分子。（4）采用UPLC-QTof-MS鉴定EW的分离组分（命名为F4-6）的关键抗炎分子;利用蛋白免疫印迹分析了F4-6对脂多糖（LPS）刺激的BV2小胶质细胞NF-κB信号通路相关蛋白水平的影响;以及分析F4-6处理的小胶质细胞培养液对神经元（N2a细胞）的增值和突触生长的影响。（5）利用RNA-seq分析讨论EW所含关键活性分子土木香内酯（Ala）和去氢二异丁香酚（Deh）单分子以及混合物对LPS刺激的BV2小胶质细胞基因表达谱（Gene expression pattern profile）的影响,并采用RT-q PCR法对RNA-seq结果进行了验证。【研究结果】（1）Bederson评分显示,给药14天后,EW给药组MCAO/R模型大鼠的评分从治疗前的2.07降至治疗后的0.21（P<0.01）,说明EW显着降低了神经系统损伤。与NT组相比,MCAO模型组大鼠大脑皮质区病变组织内有63个差异表达的基因;而与MCAO模型组相比,EW治疗后有186个差异表达的基因;其中生长因子（Igf1、Igf2和Tgfβ）和颗粒蛋白编码基因Grn等的表达在EW治疗后显着上调（P<0.05）;同时也检测到小胶质细胞标记物的表达大幅增强,以及补成分和分泌蛋白酶的表达。（2）五种不同溶剂提取的EW组分的UPLC-QTof-MS分析发现,在我们建库的11种蒙药的32个小分子化合物中,除决明子外其他10种蒙药（红花、肉豆蔻、甘草、草果、川楝子、栀子、土木香、木香、荜茇和黑种草等）中已报道的16个神经活性相关小分子化合物分别出现在五种溶剂提取物中。（3）快速筛选结果表明,EW石油醚提取物（命名为EW-5）对Cxcl10基因表达的抑制作用最强（P<0.05）。采用HPLC半制备法,对EW进行2次分级分离后最终得到12个组分。其中,组分F4-6对促炎细胞因子（Cxcl10、Tnfα、Il1β和Nos2）表达的抑制作用最显着（P<0.05）。通过UPLC-QTof-MS对F4-6进行了分析,共鉴定出20种化合物,其中包括木香烃内酯、肉豆蔻醚、土木香内酯和亚麻酸;这些小分子在LPS刺激的BV2细胞和小鼠原代小胶质细胞中,显着下调关键促炎细胞因子的表达。（4）土木香内酯（Ala）和去氢二异丁香酚（Deh）是F4-6的关键抗炎活性分子。F4-6、Ala和Deh均下调LPS刺激的小胶质细胞中Ccl2、Cox2和Il6等促炎基因的表达;同时上调Hmox1、Tgfβ、Igf1和Creb1等抗炎基因的表达。此外,F4-6处理的小胶质细胞条件培养液能显着促进N2a细胞的增殖,并可能通过上调Nefh和Dlg4来促进突起的生长。从机理上讲,F4-6显着降低了NF-κB p65蛋白的表达,同时抑制了p65的核转位,导致NF-κB启动的促炎基因转录受到抑制。（5）RNA-seq发现,Ala、Deh和Mix均下调促炎基因和上调抗氧化基因。Mix组的作用比Ala组和Deh组的作用更显着（P<0.05）,其作用不仅仅是简单的Ala和Deh作用的加和。【研究结论】综上所示,本论文首次利用RNA-seq技术,系统的分析了蒙药EW对MCAO/R模型大鼠脑卒中病变区周围细胞的基因表达的调控作用,发现EW显着改善缺血性脑卒中后神经损伤的恢复,并促使小胶质细胞从M1表型极化至M2表型;同时利用UPLC-QTof-MS系统的分析了EW中神经炎症及神经保护等相关的生物活性化合物,发现EW中多种活性化合物组分的协同作用可能是平衡小胶质细胞极化和缺血性脑卒中后的恢复,也验证了EW治疗白脉病（神经系统疾病）的传统功效,为进一步研究EW甚至其他传统药物的治疗机理提供了重要的证据。
沙洲[4]（2021）在《松花粉多糖对鸡肠道黏膜免疫的影响及巨噬细胞的免疫调节作用》文中研究指明松花粉作为传统医学中的膳食补充剂已有数百年历史,而具有广泛生物学活性的多糖（Polysaccharides,PS）是松花粉的关键活性成分之一,已经被运用到改善和调节免疫功能等方面。黏膜免疫系统是动物（尤其是家禽）整个免疫网络的重要组成部分,也是抵抗外源抗原感染的第一道防线。肠道黏膜是食物消化和营养吸收的关键部位,其中存在的肠道微生物和大量免疫细胞共同形成坚固的防御屏障,而作为免疫细胞的巨噬细胞（Macrophages,m（?））具有趋化性运动、吞噬、分泌和抗原呈递等功能,在抗感染、抗肿瘤、免疫调节等过程中扮演积极角色。本论文以从山东省泰安市的松花粉中分离纯化的松花粉多糖（Pine pollen Polysaccharides,PPPS）作为研究对象,运用分子生物学等技术在体内探究PPPS对肠道黏膜免疫的影响;通过16S高通量测序分析PPPS对肠道内菌群结构丰度的作用;在体外以鸡巨噬细胞（HD11）作为靶细胞,揭示PPPS对其的免疫调节作用并初步探究作用机制。本研究旨在为研制对黏膜免疫具有免疫增强作用的新型免疫增强制剂提供实验基础和理论依据。主要研究内容和结果如下:1、PPPS对黏膜免疫的影响本试验首先选取120只1日龄的SPF鸡,随机分为PBS组、PPPS低剂量组（LPPPS组）、PPPS中剂量组（MPPPS组）、PPPS高剂量组（HPPPS组）,分别口服PBS和3种不同剂量的PPPS（10 mg/m L,20 mg/m L和40 mg/m L）,0.2 m L/只,持续21天。在试验的第7、14和21天分别收集各组鸡的肠道组织、粪便及血液样品。通过ELISA方法、流式细胞术、CCK-8试剂、实时荧光定量PCR（q PCR）等技术分别检测免疫学相关指标,主要包括:SIg A和Ig G抗体水平、CD4+、CD8+T淋巴细胞水平、T淋巴细胞转化率、细胞因子（白介素2、白介素4、干扰素γ）、黏膜免疫相关分子基因（CD80、CD86、MHC-I、MHC-II）。结果表明PPPS显着提高鸡的黏膜抗体SIg A和血清抗体Ig G水平,并有效促进细胞因子分泌及T淋巴细胞水平,上调黏膜免疫相关基因m RNA水平。通过HE染色观察PPPS对小肠绒毛结构的影响,分别采集PBS组及PPPS组鸡的小肠不同部位组织制成石蜡切片,测量并统计分析各组鸡的十二指肠、空肠和回肠绒毛长度、宽度、隐窝深度及V/C值（长度/深度）的变化。结果表明,PPPS能有效改善小肠绒毛发育以增强肠道黏膜抵御病原体的物理屏障。为了探究PPPS对肠道黏膜的保护作用,试验的第21天,分别对每组鸡滴鼻100μL106TCID50新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）病毒液,记录攻毒后体重变化及死亡率,并取各段小肠及肺脏采用HE染色观察病理变化,通过q PCR检测肠黏膜病毒载量。结果表明,MPPPS、HPPPS组与LPPPS、PBS组相比,显着减轻由NDV引起的体重降低、病理损伤、病毒载量及死亡率。另外通过感染H9N2病毒探究口服PPPS对呼吸道黏膜的保护作用,在口服40 mg/m L的PPPS剂量7天后,PBS组及PPPS组选取5只鸡分别滴鼻100μL 104TCID50H9N2病毒液,在攻毒后第3、5和7天采集肺脏组织HE染色,通过q PCR检测肺脏病毒量,采用免疫荧光对病毒进行定位并分析荧光强度。结果表明PPPS显着降低肺脏中病毒量,减轻肺脏病理变化。证明PPPS不仅能有效保护肠道黏膜损伤,同样对呼吸道黏膜也具有保护作用。2、PPPS对肠道菌群的影响为了探究PPPS对鸡肠道菌群的影响,在口服PPPS的第21天,收集PBS组及HPPPS组（40 mg/m L）鸡粪便样本,通过16S高通量测序对鸡肠道菌群组成、多样性等方面进行分析研究。结果表明,PBS组与PPPS组的肠道菌群组成存在较大差异,通过Venn图结果表明,PPPS组OTU值显着升高。在门水平上分析,PPPS组的Firmicutes（厚壁菌门）、Bacteroidetes（拟杆菌门）、Proteobacteria（变形菌门）与PBS组相比均有较大变化。在科水平上分析,Lactobacillaceae（乳杆菌科）、Bacteroidaceae（拟杆菌科）、Lachnospiraceae（毛螺菌科）、Rikenellaceae（理研菌科）变化较为明显。在属水平上分析,PPPS组与PBS组相比,诸如Enterococcus（肠球菌）、Bacteroides（拟杆菌属）、Alistipes（别样杆菌属）、Helicobacter（螺杆菌属）、Intestinimonas（瘤胃菌属）等均丰度上升。在种水平上分析,Lactobacillus＿reuteri（罗伊氏乳杆菌）,Enterococcus＿cecorum（盲肠链球菌）、Bacteroides＿uniformis、Bacteroides＿thetaiotaomicro（拟杆菌）,Lachnospiraceae＿bacterium＿615、Lachnospiraceae＿bacterium＿M18-1（毛螺菌）,Clostridium＿sp＿AUH-JLC140（梭状杆菌）,Alistipes＿finegoldii（别样杆菌）等丰度上升。在α多样性及UPGMA聚类树等分析发现,PPPS组的菌群物种多样性显着高于PBS组。因此说明PPPS能够改善肠道菌群结构及丰富度。3、PPPS对巨噬细胞的免疫调节作用为了探究PPPS对巨噬细胞HD11的免疫调节作用,首先用CCK-8试剂检测不同浓度的PPPS对HD11细胞的增殖作用,通过中性红及FITC-葡聚糖分析PPPS对HD11细胞的吞噬活性的影响,Griess试剂检测PPPS处理HD11细胞后分泌一氧化氮（NO）水平,荧光探针法测定活性氧（ROS）,ELISA法检测HD11细胞培养液上清液中白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量。通过q PCR法检测诱导型一氧化氮合酶（i NOS）、IL-1β和TNF-α的m RNA水平变化。结果表明,当PPPS浓度高于800μg/m L时,PPPS对HD11细胞增殖具有一定的抑制作用,而在低于400μg/m L时能显着促进增殖效果。因此选用50-400μg/m L浓度范围的PPPS进行后续试验。中性红及FITC-葡聚糖试验显示PPPS均能显着提高HD11细胞吞噬活性,但各浓度间的作用效果无显着差异。PPPS以剂量依赖性方式促进HD11细胞分泌NO、IL-1β、TNF-α,且上调i NOS、IL-1β、TNF-αm RNA水平。通过高通量测序技术,对以200μg/m L PPPS处理24 h的HD11细胞与PBS组细胞进行转录组测序,分析比较差异表达m RNA、mi RNA及信号通路。结果表明,PPPS组有2358个上调表达基因和2028个下调表达基因,其中富集分析与免疫相关主要通路为内吞作用、黏附连接、内质网蛋白质加工、细胞因子-细胞因子受体相互作用、转运蛋白、Toll样受体、MAPK、Notch、C型凝集素受体、NOD样受体、RIG-I样受体等信号通路。mi RNA结果显示10个mi RNA在PPPS组中高表达,21个mi RNA下调表达。KEGG通路富集分析主要通路为内吞作用、紧密连接、溶酶体、黏合连接、细胞粘附分子、内质网蛋白加工、Notch等信号通路。为了探究PPPS作用的HD11细胞的受体以及免疫调节的信号通路,根据转录组结果,我们选择分析验证Toll样受体、MAPK、NF-κB分子对HD11细胞的影响。在PPPS处理HD11细胞后,通过q PCR方法检测Toll样受体2、4（TLR 2、4）、甘露糖受体（MR）和NF-κB分子m RNA水平。TLR4、MAPK三种亚基（p38、JNK、ERK1/2）和NF-κB抑制剂预处理细胞后,Griess法检测NO水平、ELISA法检测IL-1β和TNF-α的分泌量。结果表明,PPPS在不同时间点均上调细胞表面受体TLR4和NF-κB的m RNA水平,证明TLR4是PPPS激活HD11细胞的重要受体,NF-κB是PPPS促进HD11细胞活化的关键核因子。TLR4、MAPK、NF-κB抑制剂均能显着降低HD11细胞NO、IL-1β和TNF-α的分泌量,说明TLR4、MAPK、NF-κB均参与PPPS对HD11细胞的免疫增强作用。结果表明PPPS通过TLR4/MAPK/NF-κB信号通路激活HD11细胞产生免疫应答。综上所述,PPPS显着促进肠道黏膜免疫功能及小肠绒毛发育,有效减轻由NDV和H9N2引发的肠道及肺脏组织病理损伤,改善肠道菌群丰度且通过TLR4/MAPK/NF-κB信号通路激活HD11细胞。本课题不仅探究PPPS对鸡黏膜免疫及肠道菌群的影响,而且揭示了对巨噬细胞的免疫调节作用。因此,PPPS作为天然免疫增强剂具有良好的开发潜力和应用前景。
黄丹[5]（2021）在《雷帕霉素通过lncRNA-LOC102553434介导细胞焦亡途径调控肢体缺血再灌注肺损伤的功能及机制研究》文中认为研究背景:缺血再灌注损伤（IR）是指缺血状态的组织重新恢复血流引起的机体生理、生化和病理性改变,能够影响局部缺血组织的功能、诱发炎症反应和损伤远隔器官。肺是IR过程中最脆弱的远隔器官之一。肢体缺血再灌注损伤（LIR）诱导的急性肺损伤（ALI）是21世纪临床医生面临的常见问题。ALI是临床上十分常见的一类危重症,是由严重创伤、休克、酸中毒或严重感染等多种肺内外因素引起的,病死率高达4031%,以炎症和血管通透性增加为特征,临床上表现为进行性低氧血症和呼吸窘迫,发展至严重阶段被称为急性呼吸窘迫综合征。肺表面活性物质的不足和肺结构发育不成熟增加了肺对IR损伤的敏感性,而炎症和氧化应激有助于LIR诱导的ALI的病理过程。尽管ALI已被广泛探索几十年,但相关研究没有取得较大进展,ALI患者仍然需要面临长期的身体损伤。随着对ALI的认识在不断深入,大部分学者认为炎症风暴是ALI发生的关键因素。雷帕霉素（RAPA）是属于大环内酯类化合物的免疫抑制剂,通过抑制白细胞介素（IL）-2的表达从而阻碍T细胞及B细胞激活实现免疫抑制,被美国食品与药品管理局批准作为免疫抑制剂用于肾移植抗排异治疗和淋巴管肌瘤。大量研究证明RAPA不仅能抑制癌症进展,且在糖尿病、神经退行性疾病以及血液类疾病中疗效显着。总之,RAPA能缓解炎症,具有ALI治疗潜力。LncRNA是一类长度超过200个核苷酸的RNA转录本,参与多种生理和病理过程。研究发现,lncRNA可能通过直接或间接调控焦亡相关蛋白进而调控各种疾病发生发展。LncRNA在LIR诱导的组织损伤中的研究已有报道,然而,lncRNA在LIR肺损伤中的调控机制还尚未清楚。第一部分RAPA通过抑制细胞焦亡保护LIR诱导的ALI研究目的:探究RAPA对LIR诱导的ALI动物模型的疗效和机制。研究方法:本实验以假手术组（sham组）为对照,构建LIR诱导的ALI大鼠模型（IR组）,实验组使用RAPA进行预处理（IR+RAPA组）。使用HE染色确定大鼠肺组织的病理学变化;试剂盒检测大鼠的SOD活性和MDA含量以评估抗氧化能力;免疫组化和western blot检测焦亡标志因子NLRP3、caspase-1蛋白表达水平;ELISA检测炎症因子大鼠血清中IL-1β、IL-18的水平变化。研究结果:1.与IR组相比,IR+RAPA组肺水肿、充血明显减轻,炎性细胞浸润减少,具有异型性的肺组织明显保留。2.与IR组相比,IR+RAPA组显着逆转了由于IR处理导致的大鼠SOD活性、MDA水平、NLRP3和caspase-1蛋白水平以及1L-1β和1L-18含量的改变。第二部分大鼠LIR肺组织转录组测序分析研究目的:通过高通量测序筛选通过焦亡或损伤相关通路参与RAPA改善ALI进程的差异表达lncRNA和mRNA。研究方法:本实验模型组采用LIR诱导大鼠的ALI（IR组）,实验组使用RAPA对LIR大鼠预处理（IR+RAPA组）,最后通过高通量测序表征两组大鼠的肺组织表达谱,以获得IR组和IR+RAPA组肺组织中mRNA和lncRNA的差异表达特征。GO功能富集分析和KEGG通路富集分析探究了差异表达的mRNA和lncRNA的富集情况;Miranda和RNAhybird软件对差异表达的mRNA和lncRNA与miRNA的关系进行预测,构建ce RNA调控关系。研究结果:1.IR组和IR+RAPA组间总计鉴定到220个差异表达mRNA,与IR组相比,IR+RAPA组有149个下调表达的mRNA和71个上调表达的mRNA。此外,鉴定到63个差异表达的lncRNA,与IR组相比,IR+RAPA组有27个下调表达的lncRNA和36个上调表达的lncRNA。2.IR组和IR+RAPA组间的差异表达mRNA及lncRNA主要参与IL-1的细胞反应、IL-6生物合成过程的正调控、中性粒细胞趋化性、细胞因子-细胞因子受体的相互作用以及细胞粘附分子等生物学过程和信号通路。3.IR组和IR+RAPA组间的差异表达基因共得到1945条lncRNA-miRNAmRNA调控网络,表明存在差异表达lncRNA通过海绵吸附miRNA影响mRNA的表达对ALI的发生和治疗产生影响。4.lncRNA LOC102553434和MMP9在IR组的表达量显着高于Sham组和IR+RAPA组,且MMP9是LOC102553434/rno-miR-674-5p/MMP9轴的下游靶基因,因此,RAPA处理降低LOC102553434在ALI肺组织中的表达进而可能通过靶向rno-miR-674-5p/MMP9轴改善肺损伤。第三部分LOC102553434在肺泡上皮细胞损伤中功能研究研究目的:探究RAPA通过LOC102553434介导的ce RNA机制抑制细胞焦亡改善肺损伤中的作用机制。研究方法:本研究选取大鼠肺泡上皮细胞系进行体外实验,通过q RT-PCR检测Blank组、LPS组和LPS+RAPA组中炎症因子（1L-1β、1L-18）以及LOC102553434、rno-miR-674-5p和MMP9的表达变化;利用si RNA干扰LOC102553434的表达,随后使用CCK-8鉴定细胞增殖能力;WB检测Blank组、LPS组、LPS+RAPA+si-NC组和LPS+RAPA+si RNA组中NRPL3、caspase-1以及MMP9的表达。研究结果:1.与LPS组相比,Blank和LPS+RAPA组肺泡上皮细胞的1L-1β、1L-18、LOC102553434和MMP9表达显着下降,而rno-miR-674-5p的表达显着升高。2.干扰LOC102553434后,LPS+si RNA组的肺泡上皮细胞的增殖能力明显较LPS组和LPS+si RNA-NC组增强。3.与LPS组或LPS+RAPA+si-NC组相比,LPS+RAPA+si RNA组的肺泡上皮细胞中NRPL3、caspase-1以及MMP9蛋白表达显着降低。结论:1.RAPA通过抑制细胞焦亡保护LIR诱导的ALI。2.差异表达lncRNA通过海绵吸附miRNA调节mRNA的表达,参与LIR导致的大鼠ALI的病理过程,而RAPA通过调控lncRNA的表达从而达到治疗ALI的目的。3.LOC102553434可能通过作用于rno-miR-674-5p/MMP9轴参与肺泡上皮细胞损伤发生,有望成为ALI潜在的预防和治疗靶点。4.RAPA通过下调LOC102553434的表达进而下调MMP9的表达以及抑制焦亡相关分子的表达的双重抑制作用来减轻ALI,可能是ALI治疗的有效候选药物。
邢源[6]（2021）在《RH005对放射损伤关键效应细胞生物学行为的影响及其机制研究》文中研究表明近年来,电离辐射（ionizing radiation,IR）广泛应用于医学诊断和疾病治疗,人类暴露于IR的机会也越来越多,全身或局部IR导致不同程度放射损伤乃至放射病。不同脏器的放射敏感性不同,如小肠属于放射高度敏感组织、肺属于中度敏感组织、脑属于低度敏感组织。因此本课题针对小肠、肺和脑三个放射敏感性不同组织,选择小肠上皮细胞、肺泡上皮细胞、巨噬细胞和小胶质细胞为研究靶细胞,其中肺泡上皮细胞、小肠上皮细胞分别为肺和小肠放射损伤主要靶细胞,小胶质细胞是脑内重要的免疫细胞,巨噬细胞为全身性的免疫细胞。探讨RH005对放射性肺泡上皮细胞和小肠上皮细胞损伤的保护作用,以及其对照射后小胶质细胞和巨噬细胞生物学行为调控作用。RH005是一种多功能多肽,在许多生理和病理活动中起重要作用,如促进血管生成、促进增殖、抑制凋亡、抗炎等,还能够修复受损心肌、促进毛囊再生、促进皮肤创伤愈合及角膜修复、抑制纤维化等。前期研究发现RH005对于小鼠全身性急性放射损伤具有治疗作用,明显减轻小肠、肺和脑放射损伤,但尚缺乏其对照射后三种组织中放射敏感靶细胞和关键效应细胞影响的研究。本课题主要从以下两方面展开研究:（1）RH005对肺泡上皮细胞和小肠上皮细胞放射损伤的保护作用研究:以肺上皮细胞（RLE-6TN）和小肠上皮细胞（IEC-6）为研究对象,采用8 Gy 60Co源γ射线照射,照后即刻加入10 ng/ml、100 ng/ml、1000 ng/ml的RH005。照射后分别于6 h、12 h、24 h、48 h用CCK-8法检测细胞增殖,照射后1 h用免疫荧光法检测细胞中γH2AX的表达,照射后6 h用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡等指标评价RH005的作用。（2）RH005对照射后小胶质细胞和巨噬细胞生物学行为的调控作用研究:以小胶质细胞（BV-2）和巨噬细胞（RAW264.7）为研究对象,采用8 Gy 60Co源γ射线照射,照后即刻加入10 ng/ml、100 ng/ml、1000 ng/ml的RH005。照射后分别于6 h、12 h、24 h、48 h用CCK-8法检测细胞增殖,照射后6 h用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,照射后24 h用免疫荧光法和免疫印迹法检测BV-2细胞活化（Iba-1的表达）,放射免疫法检测细胞中炎性细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-13和IFN-γ）的表达等指标评价RH005对照射后上述细胞生物学行为的影响。通过以上实验得出结果如下:（1）RH005对放射性肺泡上皮细胞和小肠上皮细胞损伤具有保护作用:RH005促进照射后上皮细胞增殖,RLE-6TN细胞照射后48 h,与R组相比,各剂量RH005组增殖均明显升高;IEC-6细胞照射后24 h,与R组相比,M组增殖活力明显升高,照射后48 h,M和H组增殖活力均明显升高。RH005减轻照射后上皮细胞DNA损伤,RLE-6TN细胞和IEC-6细胞照射后1 h,与R组相比,各剂量RH005组细胞的DNA损伤均明显减轻。RH005抑制照射后上皮细胞凋亡,RLE-6TN细胞照射后6 h,与R组相比,M组晚期凋亡细胞数及各剂量RH005组总凋亡细胞数明显减少;IEC-6细胞照射后6h,与R组相比,各剂量RH005组早期凋亡细胞数及M组晚期凋亡细胞数均显着减少。（2）RH005对照射后小胶质细胞和巨噬细胞生物学行为具有调控作用:RH005抑制放射所致小胶质细胞活化,BV-2细胞照射后24 h,R组BV-2细胞中Iba-1表达增加,RH005处理后,各剂量RH005组细胞中Iba-1表达均降低。RH005抑制放射所致小胶质细胞和巨噬细胞中炎性细胞因子表达,照射后24 h,BV-2细胞中TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-13和IFN-γ表达增加,RH005处理后,L组的IL-4,M组的TNF-α、L-1β和IL-4表达降低。照射后24 h,RAW264.7细胞中TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6和IL-13表达均增加,RH005处理后,各剂量RH005组细胞TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-13和IFN-γ表达均降低,但无显着性差异。但RH005对照射后小胶质细胞和巨噬细胞的增殖和凋亡未见明显影响。根据以上结果,得出结论如下:（1）RH005对肺泡上皮细胞和小肠上皮细胞放射性损伤具有保护作用,主要通过减轻细胞DNA损伤,进而抑制细胞凋亡,并促进照射后细胞增殖。（2）RH005对照射后小胶质细胞和巨噬细胞生物学行为具有调控作用,可抑制小胶质细胞激活,减少小胶质细胞和巨噬细胞中炎性细胞因子的表达。
张程斐[7]（2021）在《基于转录组测序研究甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎大鼠的机制影响》文中研究指明目的:通过观察甲炎康泰复方颗粒对自身免疫性甲状腺炎（AIT）大鼠的保护作用,并基于转录组对大鼠甲状腺组织测序,探讨甲炎康泰对甲状腺组织起保护作用的相关靶点及通路,为临床应用提供实验依据。方法:高碘饮水诱导和猪甲状腺球蛋白佐剂注射Lewis大鼠建立AIT模型大鼠40只,造模成功后,按血清TPOAb浓度随机分为模型组、甲炎康泰低（0.708g/kg）、中（1.417g/kg）、高（2.834g/kg）剂量组,每组10只。正常组与模型组大鼠给予1ml/100g的双蒸水,甲炎康泰三剂量组给予中药复方颗粒剂连续灌胃给药8周。药物干预结束后取材,检测大鼠血清中T3、T4、FT3、FT4、TSH、TGAb、TPOAb及TRAb的浓度;超低温取单侧甲状腺组织放入4%多聚甲醛中固定,用于HE染色与免疫组化检测,另一侧甲状腺组织迅速放入液氮中,待提取RNA,行转录组测序与RT-PCR检测;LC/MS检测甲炎康泰组分;RT-PCR检测甲状腺组织内Jak2、STAT3和HIF-1α mRNA的表达水平;免疫组化检测甲状腺组织中p-Jak2、p-STAT3和HIF-1α IOD/Area值的变化。细胞实验采用雌性lewis大鼠20只,按体重随机分为:正常组（给予双蒸水）和甲炎康泰组（高剂量颗粒剂2.834g/kg）,每组10只。连续给药7天后麻醉取血获得含药血清。IFN-γ干预Nthy-ori 3-1细胞24h建立自身免疫性甲状腺炎细胞损伤模型,含药血清干预后,CCK-8法检测细胞活性;免疫荧光与Western blot法分别检测p-Jak2、p-STAT3和HIF-1α的荧光强度以及蛋白表达情况,验证动物实验结果。结果:1.LC/MS检测:甲炎康泰组分结果得到代谢产物10122个,其中负离子数1870个,正离子数8252个。Score评分得到了最高的10个代谢物。2.甲功检测:与正常组相比,模型组T3,T4,FT3,FT4均显着性升高（P<0.01）,TSH降低（P<0.01）。经甲炎康泰干预后,与模型组相比:低剂量组T3,T4,FT3,FT4下降及TSH上升但无明显差异;中剂量组T3（P<0.0 5）,FT3（P<0.01）,FT4（P<0.01）下调明显但TSH上升无统计学差异;高剂量组T3,T4,FT3,FT4下降以及TSH上升均具有显着性差异（P<0.01）。3.抗体检测:与正常组相比,模型组TGAb、TPOAb及TRAb均显着性升高（P<0.01）。经甲炎康泰干预后,与模型组相比:低、中剂量组TGAb、TPOAb均明显降低（P<0.01）;高剂量组TGAb、TPOAb及TRAb均降低,且具有统计学差异（P<0.01）。4.形态学检测:正常组可见大量完整甲状腺滤泡,大小适中,腔内红色胶质充盈均匀,滤泡上皮细胞完整;模型组甲状腺滤泡间质呈弥漫性淋巴细胞浸润,大量滤泡腔被破坏或变小,腔内胶质分布不均或减少,滤泡壁变薄、破坏;3个治疗组甲状腺滤泡间质内淋巴细胞浸润较模型组明显减少,滤泡上皮细胞较为完整,胶质含量略减少,但较模型组轻微,滤泡结构完整。高剂量组略好于低、中剂量组。5.转录组检测:通过测序得出甲炎康泰可对自身免疫性甲状腺炎大鼠产生49个差异表达基因,其中16个下调基因,33个上调基因。GO富集分析中得到两个免疫相关差异表达基因:Dnase113和JAK3,甲炎康泰可能通过上调Dnase113和下调JAK3在甲状腺组织中的表达,以缓解了甲状腺组织内的炎症反应以及相关免疫反应。KEGG富集分析中,缺氧诱导因子HIF-1信号通路在甲炎康泰组下调趋势中富集得分最高且具有明显差异。除此之外,Jak-STAT信号通路,表皮生长因子受体信号通路,原发性免疫缺陷以及坏死性凋亡都与自身免疫性甲状腺炎具有一定的相关性。6.PT-PCR检测:与正常组比较,模型组Jak2、STAT3和HIF-1αmRNA相对表达量皆显着性上调（P<0.01）;与模型组比较,甲炎康泰高剂量组Jak2（P<0.05）、STAT3（P<0.01）和 HIF-1α（P<0.05）均下调。7.免疫组化检测:比较各组平均光密度值IOD/Area,与正常组比较,模型组大鼠甲状腺组织内有较多p-Jak2、p-STAT3和HIF-1α蛋白表达（P<0.01）。与模型组比较,p-Jak2、p-STAT3和HIF-1α蛋白于甲炎康泰高剂量组表达降低（P<0.05）。8.甲状腺细胞免疫荧光和Western blot检测结果:甲炎康泰组甲状腺细胞活性较模型组显着升高;免疫荧光和Western blot显示,与正常组比较,模型组p-Jak2/Jak2,p-STAT3/STAT3以及HIF-1 α/β-actin表达值均显着性上调（P<0.01）以及其对应的荧光强度也有增加（P<0.01）;与模型组比较,甲炎康泰组p-Jak2/Jak2,p-STAT3/STAT3以及HIF-1α/β-actin表达值均有下调（P<0.05或P<0.01）以及其对应的荧光强度也有下降（P<0.05 或P<0.01）。结论:1.甲炎康泰可一定程度上纠正甲状腺功能和缓解甲状腺结构损伤,可能与其降低循环TGAb、TPOAb及TRAb浓度有关。2.甲炎康泰可能通过上调Dnase113和下调JAK3 mRNA在甲状腺组织中的表达,以缓解了甲状腺组织内的炎症反应以及相关免疫反应;同时,甲炎康泰可能下调HIF-1α信号通路、Jak-STAT信号通路、原发性免疫缺陷信号通路以及坏死性凋亡信号等通路在甲状腺中的表达,以缓解AIT的发展。3.甲炎康泰可能抑制了甲状腺组织中Jak2/STAT3/HIF-1α通路进而缓解了 AIT的发展。4.甲炎康泰对甲状腺细胞具有一定保护作用,可能通过下调p-Jak2/Jak2,p-STAT3/STAT3以及HIF-1α/β-actin的表达及其对应的荧光强度有关,提示甲炎康泰对Jak2/STAT3/HIF-1 α通路有确切的抑制作用。
张勇[8]（2021）在《紫檀芪对LPS致肺损伤保护效果的初步研究与应用》文中进行了进一步梳理急性肺损伤（ALI）是动物饲养过程中严重的呼吸道疾病,严重威胁着畜禽的生命安全。越来越多的研究表明ALI的发生发展过程与炎症和氧化应激反应密不可分。因此,减轻炎症和氧化应激反应对于改善ALI具有重要意义。紫檀芪是一种具有生物活性的纯天然物质,多存在于常见的蓝莓、葡萄等植物中,有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗真菌等药理活性,同时越来越多的研究表明紫檀芪能够显着改善多种组织器官的损伤。本论文以紫檀芪为研究对象,建立LPS诱导的ALI小鼠模型,初步研究紫檀芪对其保护作用及其潜在机制。而后应用紫檀芪防治ALI雏鸡,观察紫檀芪对雏鸡的保护效果。首先,构建LPS诱导的ALI小鼠模型,分别用10、20和40 mg/kg紫檀芪对该模型进行预处理。其次,检测小鼠肺脏湿干重比值（W/D）的变化,并对其HE染色进行病理组织学观察;对支气管肺泡灌洗液（BALF）中总细胞、中性粒细胞、巨噬细胞进行计数,以及测定总蛋白浓度;测定肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性;然后,测定肺组织抗氧化应激指标超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性,以及氧化应激指标丙二醛（MDA）含量;qRT-PCR测定肺组织中COX-2、i NOS、TNF-α、IL-6、IL-1β细胞因子mRNA表达变化;最后,Western blotting检测NF-κB信号转导通路中p-IκB和p-p65蛋白以及Nrf2/HO-1信号转导通路中Nrf2和HO-1蛋白水平。结果显示,LPS诱导的ALI小鼠模型构建成功;紫檀芪降低了ALI小鼠肺脏的W/D值,改善了肺组织损伤程度,如维持肺组织结构完整性、减轻肺间质水肿和肺泡壁增厚、减少浸润性炎性细胞等;减少BALF中总细胞、中性粒细胞、巨噬细胞数目,以及总蛋白浓度;降低肺组织MPO活性;提高肺组织SOD、CAT和GSH-Px活性,并降低MDA含量;降低肺组织中COX-2、i NOS、TNF-α、IL-6、IL-1β细胞因子mRNA的表达;降低肺组织中p-IκB和p-p65蛋白水平,升高肺组织中Nrf2和HO-1蛋白水平。提示紫檀芪对ALI的保护作用机制主要是通过抑制NF-κB和激活Nrf2/HO-1信号转导通路,即抑制炎症反应和氧化应激反应。结果证实紫檀芪对LPS诱导的ALI小鼠模型具有保护作用,可作为治疗或保护LPS诱导的ALI雏鸡的候选药物。构建LPS诱导的ALI雏鸡模型,分别饲喂50、100和200 mg/kg紫檀芪对该模型进行处理。每日对雏鸡进行称重,并观察其采食量以及精神和体征状态;眼观肺脏形状、颜色、充血和坏死情况等组织病理学变化;检测雏鸡肺脏W/D的变化,并对其HE染色进行病理组织学观察;测定肺组织MPO活性;测定肺组织抗氧化应激指标SOD、CAT、GSH-Px活性,以及氧化应激指标MDA含量;qRT-PCR测定肺组织中COX-2、i NOS、TNF-α、IL-6、IL-1β细胞因子mRNA表达变化。结果显示,LPS诱导的ALI雏鸡模型构建成功,但其每日采食量以及精神和体征状态并无明显异常;紫檀芪提升了ALI雏鸡的体重日增长率;雏鸡肺组织随着紫檀芪剂量的增加,形状和颜色逐渐趋于正常,充血和坏死情况有所改善;降低了ALI雏鸡肺脏的W/D值,改善了肺组织损伤程度,如维持肺组织结构完整性、减轻肺间质水肿和肺泡壁增厚、减少浸润性炎性细胞等;降低肺组织MPO活性;提高肺组织SOD、CAT和GSH-Px活性,并降低MDA含量;降低肺组织中COX-2、i NOS、TNF-α、IL-6、IL-1β细胞因子mRNA的表达。结果证实紫檀芪对LPS诱导的ALI雏鸡模型具有保护作用。综上所述,本论文证实紫檀芪对LPS诱导的ALI小鼠模型发挥保护作用,并初步揭示其作用机制是通过抑制炎症和氧化应激反应来实现的,而应用紫檀芪防治雏鸡ALI也证实了良好的保护效果。以上结果不仅为生产实践中有效防治ALI提供借鉴和参考,而且也可为雏鸡功能性饲料添加剂的研发提供实验依据。
马惠苗[9]（2021）在《香烟烟雾诱导慢性阻塞性肺病的发生和向肺癌转化的作用及白头翁皂苷B4的干预机制研究》文中研究指明目的:研究白头翁皂苷B4对单纯香烟烟雾诱导的慢性阻塞性肺病的保护作用并探讨其可能的作用及机制,为治疗慢阻肺防止其向肺癌转变提供实验依据。第一部分白头翁皂苷B4对慢性阻塞性肺病小鼠的药效以及作用机制研究方法:80只C57BL/6小鼠,雌雄各半,通过连续香烟烟雾诱导法建立COPD小鼠模型。在造模第9周,按照体重将小鼠随机分为正常组、CS诱导组、白头翁皂苷B4高中低剂量组,剂量依次为6mg/kg、3mg/kg、1.5mg/kg,阳性对照组为地塞米松,剂量为1.5mg/kg。熏烟前1h给药,持续4周。在造模及给药期间连续观察小鼠体重变化情况。造模及给药结束后,采用肺功能仪测定模型及各给药组小鼠肺功能参数的变化;高通量蛋白芯片技术测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎性因子的含量;HE染色观察肺组织病理变化及上皮细胞增生情况;实时荧光定量PCR法测定小鼠肺组织中转化生长因子-β（TGF-β）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）基因表达水平以及基质金属蛋白酶2（MMP2）、基质金属蛋白酶9（MMP9）、基质金属蛋白酶12（MMP12）、基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP1）的表达;采用试剂盒测定小鼠血浆中髓过氧化物酶（MPO）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活力以及丙二醛（MDA）含量;免疫组织化学法测定肺组织中抑癌基因P53、增殖细胞核抗原ki67以及核内不均一核糖核蛋白hnRNP的表达;蛋白免疫印迹（Western blot）检测小鼠肺组织中DNA甲基转移酶（Dnmt1）、脆性组氨酸三联体（FHIT）、抑癌基因CDKN2A/P16蛋白表达水平的变化。结果:在造模期间,烟雾诱导组小鼠体重增长基本停滞,易聚堆,精神倦怠,偶有脱毛现象。白头翁皂苷B4不同剂量组体重变化不明显,地塞米松组小鼠体重有下降趋势;白头翁皂苷B4能够显着降低吸气时间（Ti）、肺阻力（LR）（P<0.05）,升高最大呼气流速（PEF）（P<0.05）,对肺功能具有一定程度的改善作用;同时,白头翁皂苷B4能够降低支气管肺泡灌洗液中炎性因子白介素2（IL-2）、白介素5（IL-5）、白介素8（IL-18）、白介素10（IL-10）的含量（P<0.01）;HE染色对COPD肺组织病理切片进行观察发现,香烟烟雾诱导组小鼠大量炎症细胞包围肺组织,且肺泡间隔变大,白头翁皂苷B4各个剂量组及地塞米松组可缓解炎性细胞浸润情况;与正常组比较,模型组肺组织上皮细胞基底膜出现细胞增生现象,而给与白头翁皂苷B4后增生现象不明显。RT-PCR结果表明,模型组小鼠肺组织中炎性因子TGF-β、TNF-α及IL-1β基因表达水平显着上调（P<0.01）,白头翁皂苷B4能够显着下调其基因表达水平;此外,白头翁皂苷B4能够显着降低MMP2、MMP12基因表达并升高MMP9、TIMP1基因表达水平（P<0.01）;对于氧化应激指标,模型组MDA含量及MPO显着升高,而GSH-PX活力显着降低（P<0.01）,白头翁皂苷B4给药组能够不同程度降低MDA含量及MPO活力,同时能够显着提升GSH-PX活力（P<0.05,P<0.01）;免疫组织化学实验结果表明模型组P53蛋白表达显着上调,白头翁皂苷B4中剂量和高剂量组均能够显着上调P53蛋白表达（P<0.01）,模型组Ki67及hnRNP蛋白表达与正常组相比无差异;最后,western blot结果表明模型组Dnmt1、Cdkn2a/P16蛋白表达显着降低（P<0.01）,白头翁皂苷B4不同剂量组对Dnmt1、Cdkn2a/P16蛋白表达无影响。模型组FHIT蛋白表达显着升高,白头翁皂苷B4不同剂量组及地塞米松组可显着下调该蛋白表达水平（P<0.01）。结论:1、白头翁皂苷B4对COPD小鼠肺功能具有一定程度改善作用,能够缓解肺功能相关参数变化,减轻肺组织炎性症状。2、白头翁皂苷B4能够通过平衡小鼠肺组织中蛋白酶与抗蛋白酶表达,降低氧化应激水平,改善肺组织氧化应激进而起到抗炎作用。3、白头翁皂苷B4对慢性阻塞性肺病小鼠具有一定的保护作用,可通过减轻支气管柱状上皮细胞增生,降低肺组织中FHIT,升高P53蛋白表达进而延缓COPD向肺癌转化。第二部分白头翁皂苷B4对香烟烟雾提取物CSE诱导的人支气管上皮细胞16HBE的影响方法:自制香烟烟雾CSE提取装置,作用于人支气管上皮细胞进而建立COPD体外实验模型,CCK8细胞毒性实验探究不同浓度香烟烟雾CSE,不同浓度白头翁皂苷B4及地塞米松对16HBE细胞的安全剂量范围和最适作用时间。此外,CCK8法继续探究造模24/36/48h后,白头翁皂苷B4对16HBE细胞活力的影响;PT-PCR测定CSE作用不同时间点时炎性细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8,TGF-β基因表达水平及白头翁皂苷B4干预CSE诱导48h后TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8,TGF-β,Slug,Snail1基因表达水平的影响;WB检测CSE诱导的16HBE细胞中MAPK信号通路相关蛋白及TTF-1、E-cadherin、Fox A2、ZO-1蛋白表达。结果:CCK8结果表明,随着CSE作用时间,作用浓度的不断延长,细胞活力显着下降,当香烟烟雾CSE浓度达到5%及以上时,细胞存活率显着降低（P<0.01）。当白头翁皂苷B4孵育24及36h时,B4不同浓度对细胞存活率无影响,当时间延长至48h时,细胞存活率显着下降（P<0.01）。与对照组相比,在24h及36h时,地塞米松给药浓度达到2000μM,细胞活力显着下降。此外,白头翁皂苷B4药效实验结果显示,与对照组比较,5%CSE诱导不同时间组细胞活力显着降低（P<0.01）,与模型组比较白头翁皂苷B4不同浓度组对细胞活力有一定升高趋势,但无明显差异。RT-PCR结果表明,随着CSE孵育时间的延长,炎性因子IL-6,IL-1β,TGF-β基因表达水平逐渐升高（P<0.05,P<0.01）,而TNF-α,IL-8在CSE诱导48h时有一定升高趋势,但无显着差异。白头翁皂苷B4干预后能够显着降低IL-1β,TGF-β、IL-8、TNF-α基因表达水平（P<0.05,P<0.01）。同时,可显着降低Snail1 mRNA表达（P<0.05,P<0.01）。WB结果表明,CSE诱导后MAPK信号通路中p-P38、AP-1（c-jun/c-Fos）蛋白表达显着升高（P<0.01）,白头翁皂苷B4中高剂量组及地塞米松组均能显着降低蛋白表达（P<0.01）。同时,白头翁皂苷B4可上调TTF-1、E-cadherin、ZO-1的表达,下调Fox A2蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论:香烟烟雾提取物（CSE）对人支气管上皮细胞（16HBE）具有不同程度的抑制作用,呈现浓度和时间依赖性,随着时间的延长,细胞存活率越来越低。且香烟烟雾提取物能够上调相关炎性因子的表达。白头翁皂苷B4能够通过降低炎性因子,调节MAPK信号通路相关蛋白及上皮细胞分化蛋白表达,从而发挥一定程度保护16HBE细胞免受CSE损害的作用。其机制可能与调节MAPK/TGFβ/TTF-1信号通路有关。
姜涛[10]（2021）在《丹参联合三氧化二砷瘀毒同治调控糖酵解逆转巨噬细胞极化的抗肝癌机制研究》文中指出目的 对肿瘤“瘀毒”病因病机理论的源流,以及基于“瘀毒”理论所衍生的治则治法和组方用药进行研究。论证“瘀毒”理论指导下丹参联合三氧化二砷治疗肝癌的有效性,并研究其作用机制。以方证因,以方证机,验证“瘀毒”病因病机理论的科学性,并为其提供一定的实验支撑。方法 通过理论研究与实验研究相结合的方式,以理论研究指导实验研究,以实验研究反证并支撑理论研究。1.理论研究:通过查阅古今文献,总结团队相关研究成果,分析“瘀”和“毒”作为肿瘤病因病机的优势和局限性,对“瘀毒”理论产生的原因进行剖析,阐述“瘀毒”理论的含义和价值。基于肿瘤“瘀毒”理论,研究“祛瘀”和“祛毒”的代表性治则治法,分析其适用情况,探讨不同阶段的瘀毒同治治疗原则和治疗方案。基于“瘀毒”理论,枚举代表性的瘀毒同治药物,论证丹参联合三氧化二砷的理论合理性和科学性。2.实验研究:基于“瘀毒”理论,筛选合适的丹参提取物,并与三氧化二砷联用,获得肝癌抑制效果较佳,正常细胞杀伤较小的联用组合,并分析其最佳药物配比关系。在此基础上,建立Hep1-6原位移植瘤和H22皮下移植瘤模型,验证联合用药的体内外抗肝癌效果。以巨噬细胞极化和糖酵解作为机制研究出发点,通过流式细胞术、免疫荧光染色、病理学染色、PCR技术、Western Blot等技术检测巨噬细胞分型情况,并通过原代巨噬细胞体外诱导模型验证对巨噬细胞极化的影响。通过转录组测序技术研究联合用药对巨噬细胞糖酵解网络的调控作用,选取与糖酵解密切相关的HIF-α/NF-κB、AMPK信号通路开展研究,阐明其起效的分子机制。结果1.“瘀毒”理论的产生是“瘀”“毒”病因病机理论的延伸和发展,其出现是中医内在发展规律所决定的。其中,中医对肿瘤疾病认识的深入,中医理论自身的发展,现代医学理论的充分融入均是其形成的重要促进因素。2.以活血化瘀、破血逐瘀、清热解毒、以毒攻毒为代表的治法及药物配伍是瘀毒同治的核心治疗方案。依据患者病情、病性、病位的不同,可以选择不同的同治方案,其中活血化瘀联合以毒攻毒是各阶段均合适的瘀毒同治方案。3.丹参联合三氧化二砷的药物组合是基于活血化瘀、以毒攻毒治法下,合理的瘀毒同治药物配伍形式,该配伍形式兼具了肿瘤杀伤力强、不易伤正的特点,并规避了促肿瘤转移的风险。4.丹参中的隐丹参酮是联合三氧化二砷治疗肝癌的较佳瘀毒同治组分,二者配伍可在体内外有效抑制肝癌进展,最佳配比为10:1左右。5.隐丹参酮联合三氧化二砷治疗肝癌的机制与促进巨噬细胞的激活,提升其吞噬能力,促使其向M1型巨噬细胞活化,抑制其向M2型巨噬细胞活化有关。6.隐丹参酮联合三氧化二砷通过激活AMPK信号通路、抑制HIF-α/NF-κB信号通路实现对巨噬细胞和肿瘤细胞的糖代谢调控。二者联合促进巨噬细胞的糖酵解并抑制肿瘤细胞的糖酵解,促进葡萄糖的重分配,以达到逆转巨噬细胞极化,抑制肝癌细胞增殖的目的。结论“瘀毒互结”是肿瘤的核心病因病机,活血化瘀、以毒攻毒是瘀毒同治的科学治法,丹参联合三氧化二砷是有效的配伍组合。中医“瘀毒”理论可以有效的应用于肝癌的治疗,值得临床进一步深入研究。
二、中药814对肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子基因表达的抑制作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、中药814对肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子基因表达的抑制作用（论文提纲范文）
（1）TSC1-mTOR在肺泡巨噬细胞稳态维持和IL-13信号应答中的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验小鼠 |
| 1.2 主要实验仪器 |
| 1.3 抗体 |
| 1.4 刺激剂 |
| 1.5 细胞培养试剂 |
| 1.6 抑制剂与药物 |
| 1.7 试剂盒 |
| 1.8 普通化学试剂 |
| 1.9 常用缓冲液配方 |
| 1.10 RT-PCR引物列表 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 肺组织单细胞悬液的制备 |
| 2.2 支气管肺泡灌洗液(BAL Fluid)的制备 |
| 2.3 流式细胞术 |
| 2.4 细胞培养 |
| 2.5 骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)的分化 |
| 2.6 RNA的制备和实时荧光定量PCR |
| 2.7 蛋白印迹分析技术 |
| 2.8 测量细胞的死亡程度 |
| 2.9 数据统计分析 |
| 结果 |
| 1.Tsc1缺失导致AMs减少 |
| 2.mTORC1缺失影响小鼠AMs稳态维持 |
| 3.Tsc1缺失影响AMs的存活与增殖 |
| 4.Tsc1调节IL-13信号通路 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 肺泡巨噬细胞稳态维持和功能发挥的调控机制研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 附录:缩略词表 |
| 致谢 |
（2）陈皮碱性提取物调控内质网应激治疗肺纤维化的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 绪论 |
| 第一章 肺纤维化中西医研究进展 |
| 第一节 中医对肺纤维化的认识 |
| 1. 中医病名 |
| 2. 病因病机 |
| 3. 辨证论治 |
| 4. 方药进展 |
| 第二节 西医对肺纤维化的认识 |
| 1. 疾病简介 |
| 2. 流行病学 |
| 3. 诊断方法 |
| 4. 治疗方法 |
| 4.1 吡非尼酮 |
| 4.2 尼达尼布 |
| 4.3 吡非尼酮和尼达尼布 |
| 5. 未来展望 |
| 5.1 精准医疗 |
| 5.2 新的靶点 |
| 第三节 ERS与肺纤维化的关系 |
| 1. 肺纤维化发病机制 |
| 2. ERS的分子机制 |
| 3. ERS与肺纤维化 |
| 3.1 上皮细胞 |
| 3.2 成纤维细胞 |
| 3.3 巨噬细胞 |
| 4. 通过ERS治疗肺纤维化 |
| 第二章 陈皮碱性提取物制备、鉴定与质控 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 实验药材 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验耗材 |
| 2.4 实验仪器 |
| 2.5 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 CAE的制备 |
| 3.2 CAE的鉴定 |
| 3.3 CAE的质控 |
| 4. 讨论 |
| 第三章 陈皮碱性提取物对小鼠肺纤维化的作用 |
| 第一节 BLM诱导小鼠肺纤维化模型 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验耗材 |
| 2.4 实验仪器 |
| 2.5 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 造模后小鼠体重变化 |
| 3.2 造模后小鼠存活率 |
| 3.3 造模后肺组织病理变化 |
| 3.4 造模后肺组织羟脯氨酸水平变化 |
| 4. 讨论 |
| 第二节 CAE对小鼠肺纤维化的作用 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验耗材 |
| 2.4 实验仪器 |
| 2.5 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 CAE对肺组织肺泡炎水平的影响 |
| 3.2 CAE对肺组织纤维化水平的影响 |
| 3.3 CAE对肺组织胶原沉积水平的影响 |
| 3.4 CAE对肺组织胶原蛋白水平的影响 |
| 4. 讨论 |
| 第四章 陈皮碱性提取物抗肺纤维化的分子机制 |
| 第一节 CAE对AEC Ⅱ中ERS及ATF3/PINK1的调控作用 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 实验细胞 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验耗材 |
| 2.4 实验仪器 |
| 2.5 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 CAE对肺组织ERS相关蛋白水平的影响 |
| 3.2 CAE对A549细胞ERS相关蛋白水平的影响 |
| 3.3 CAE对肺组织ATF3/PIINK1共表达的影响 |
| 3.4 CAE对A549细胞ATF3/PINK1共表达的影响 |
| 4. 讨论 |
| 第二节 CAE对AEC Ⅱ中线粒体稳态的调控作用 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 实验细胞 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验耗材 |
| 2.4 实验仪器 |
| 2.5 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 CAE对A549细胞线粒体膜电位水平的影响 |
| 3.2 CAE对A549细胞ROS水平的影响 |
| 3.3 A549细胞shRNA质粒载体构建 |
| 3.4 A549细胞ATF3 & PINK1基因沉默 |
| 3.5 CAE对ATF3-/- A549细胞中PINK1及线粒体膜电位水平的影响 |
| 3.6 CAE对PINK1-/- A549细胞中线粒体膜电位水平的影响 |
| 4. 讨论 |
| 第三节 CAE通过AEC Ⅱ对肺成纤维细胞的影响 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 实验细胞 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验耗材 |
| 2.4 实验仪器 |
| 2.5 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 CAE对MRC5细胞胶原蛋白水平的间接影响 |
| 3.2 CAE对A549细胞上清细胞因子水平的影响 |
| 4. 讨论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一: 缩略词表 |
| 附录二：文献综述 内质网应激：特发性肺纤维化的潜在治疗方向 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）额尔敦-乌日勒的活性成分分析及其对小胶质细胞基因调控作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 额尔敦-乌日勒的简介 |
| 1.1.1 额尔敦-乌日勒历史沿革 |
| 1.1.2 额尔敦-乌日勒研究进展 |
| 1.1.3 额尔敦-乌日勒所含单药化学成分的国内外研究进展 |
| 1.2 脑卒中简介 |
| 1.2.1 脑卒中分类及病因 |
| 1.2.2 缺血性脑卒中的主要病理生理机制 |
| 1.2.3 治疗脑卒中的策略 |
| 1.3 小胶质细胞简介 |
| 1.3.1 小胶质细胞简介 |
| 1.3.2 小胶质细胞的极化 |
| 1.3.3 小胶质细胞极化与信号通路 |
| 1.3.4 小胶质细胞与其它神经细胞的相互作用 |
| 1.3.5 作用于小胶质细胞的药物 |
| 1.4 中草药的研究方法及进展 |
| 1.5 立题依据及主要研究内容 |
| 1.5.1 立题依据 |
| 1.5.2 主要研究内容 |
| 1.5.3 创新性 |
| 第二章 额尔敦-乌日勒对大鼠大脑中基因表达调控作用及其活性成分的分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 主要试剂与耗材 |
| 2.2.3 主要仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 动物饲养 |
| 2.3.2 MCAO模型 |
| 2.3.3 治疗组 |
| 2.3.4 收集样品,提取RNA和 RNA-seq |
| 2.3.5 序列过滤、比对和组装(Assembly) |
| 2.3.6 差异表达分析 |
| 2.3.7 EW的提取方法 |
| 2.3.8 建立数据库 |
| 2.3.9 UPLC-QTof-MS分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 治疗后MCAO/R模型大鼠的神经功能评估 |
| 2.4.2 Illumina测序和参考基因组比对 |
| 2.4.3 EW处理后差异基因表达 |
| 2.4.4 EW-1 中神经活性成分分析 |
| 2.4.5 EW-2 中神经活性成分分析 |
| 2.4.6 EW-3 中神经活性成分分析 |
| 2.4.7 EW-4 中神经活性成分分析 |
| 2.4.8 EW-5 中神经活性成分分析 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第三章 额尔敦-乌日勒中活性小分子对小胶质细胞分泌的促炎型细胞因子的转录调控作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 细胞品系 |
| 3.2.3 主要试剂耗材 |
| 3.2.4 仪器设备 |
| 3.2.5 引物 |
| 3.2.6 主要试剂的配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 样品的提取制备 |
| 3.3.2 HPLC半制备分离 |
| 3.3.3 UPLC-QTof-MS分析 |
| 3.3.4 小鼠原代小胶质细胞的分离及培养 |
| 3.3.5 BV2 小胶质细胞培养 |
| 3.3.6 EW对小胶质细胞表达的促炎因子的影响 |
| 3.3.7 实时荧光定量PCR |
| 3.3.8 统计学分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 EW不同溶剂提取物对Cxcl10 表达的下调作用 |
| 3.4.2 EW-5 半制备馏分的UPLC分析及其对促炎因子表达的下调作用 |
| 3.4.3 F4 半制备馏分的UPLC分析及其对促炎因子表达的下调作用 |
| 3.4.4 F4-6 中生物活性化学物质的分析及鉴定 |
| 3.4.5 木香烃内酯对小胶质细胞释放的促炎因子表达的影响 |
| 3.4.6 肉豆蔻醚对小胶质细胞释放的促炎因子表达的影响 |
| 3.4.7 土木香内酯对小胶质细胞中促炎因子表达的影响 |
| 3.4.8 亚麻酸对小胶质细胞中促炎因子表达的影响 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第四章 额尔敦-乌日勒中活性小分子土木香内酯和去氢二异丁香酚抑制小胶质细胞NF-κB信号通路 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 细胞品系 |
| 4.2.2 主要试剂与耗材 |
| 4.2.3 主要仪器 |
| 4.2.4 引物 |
| 4.2.5 抗体 |
| 4.2.6 主要试剂的配置 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 样品的提取制备 |
| 4.3.2 UPLC-QTof-MS法对F4-6 定性分析 |
| 4.3.3 UPLC-QTof-MS法对F4-6中Ala和 Deh进行定量分析 |
| 4.3.4 细胞培养 |
| 4.3.5 细胞毒性测定 |
| 4.3.6 N2a细胞的细胞增值活力和神经突触生长测定 |
| 4.3.7 提取总RNA和 RT-q PCR |
| 4.3.8 蛋白免疫印迹(Western blot) |
| 4.3.9 统计学分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 EW提取物中活性分子的Ala和 Deh的定性 |
| 4.4.2 F4-6 抑制LPS刺激的BV2 细胞促炎因子的表达 |
| 4.4.3 F4-6 促进BV2 细胞LPS刺激后抗炎基因表达 |
| 4.4.4 F4-6 的神经保护作用 |
| 4.4.5 F4-6对LPS诱导的BV2 细胞中NF-κB信号通路激活的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第五章 天然产物小分子土木香内酯和去氢二异丁香酚对小胶质细胞基因表达的联合调控作用 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 细胞品系 |
| 5.2.2 主要试剂与耗材 |
| 5.2.3 主要仪器 |
| 5.2.4 引物 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 细胞培养 |
| 5.3.2 提取RNA和文库构建 |
| 5.3.3 序列过滤、比对和组装 |
| 5.3.4 差异表达分析 |
| 5.3.5 差异表达基因的GO和 KEGG富集分析 |
| 5.3.6 实时荧光定量PCR |
| 5.3.7 统计学分析 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 Illumina测序和参考基因组比对 |
| 5.4.2 Ala、Deh和 Mix处理后的差异表达基因 |
| 5.4.3 DEG的GO富集分析 |
| 5.4.4 DEG的 KEGG代谢通路富集分析 |
| 5.4.5 通过RT-qPCR验证DEG数据 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 第六章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 附录一 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表的学术论文 |
（4）松花粉多糖对鸡肠道黏膜免疫的影响及巨噬细胞的免疫调节作用（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1 松花粉及多糖概述 |
| 2 多糖的生物活性 |
| 2.1 多糖的免疫调节活性 |
| 2.2 多糖的抗病毒活性 |
| 2.3 多糖的抗肿瘤活性 |
| 2.4 多糖的其他生物学活性 |
| 3 黏膜免疫 |
| 3.1 肠道黏膜免疫屏障 |
| 3.2 多糖对肠道黏膜免疫的影响 |
| 4 肠道菌群 |
| 4.1 肠道菌群高通量测序 |
| 4.2 多糖对肠道菌群的影响 |
| 5 巨噬细胞 |
| 5.1 多糖对巨噬细胞的免疫调节活性 |
| 5.2 巨噬细胞表面受体 |
| 5.3 多糖对巨噬细胞的免疫调节信号转导途径 |
| 6 研究目的与意义 |
| 第二章 松花粉多糖对黏膜免疫的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 多糖 |
| 1.1.2 实验动物及毒株 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.1.4 主要仪器 |
| 1.1.5 多糖溶液配制 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 实验动物分组及处理 |
| 1.2.2 体重及免疫器官称重 |
| 1.2.3 外周血淋巴细胞转化率测定 |
| 1.2.4 外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞含量检测 |
| 1.2.5 SIg A含量测定 |
| 1.2.6 血清中IgG含量的检测 |
| 1.2.7 qPCR检测肠道黏膜细胞因子 |
| 1.2.8 qPCR检测肠道黏膜免疫相关分子 |
| 1.2.9 PPPS对肠绒毛结构的影响 |
| 1.2.10 PPPS的攻毒保护作用 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 PPPS对体重及免疫器官的影响 |
| 2.2 PPPS对外周血淋巴细胞转化率的影响 |
| 2.3 PPPS对外周血CD4+、CD8+T 淋巴细胞含量变化的影响 |
| 2.4 PPPS对肠道黏膜SIgA和血清IgG的影响 |
| 2.5 PPPS对肠道黏膜细胞因子的影响 |
| 2.6 PPPS对肠道黏膜免疫相关分子mRNA的影响 |
| 2.7 PPPS对肠绒毛结构的影响 |
| 2.7.1 PPPS对十二指肠绒毛长度、宽度、隐窝深度及V/C值的影响 |
| 2.7.2 PPPS对空肠绒毛长度、宽度、隐窝深度及V/C值的影响 |
| 2.7.3 PPPS对回肠绒毛长度、宽度、隐窝深度及V/C值的影响 |
| 2.8 PPPS对肠绒毛形态的影响 |
| 2.8.1 口服PPPS7 天对肠绒毛形态的影响 |
| 2.8.2 口服PPPS14 天对肠绒毛形态的影响 |
| 2.8.3 口服PPPS21 天对肠绒毛形态的影响 |
| 2.9 PPPS对 NDV攻毒保护作用 |
| 2.9.1 攻毒后PPPS对体重及存活率的影响 |
| 2.9.2 攻毒后PPPS对肠道黏膜中病毒载量的影响 |
| 2.9.3 攻毒后肠道黏膜及肺脏组织学观察 |
| 2.10 PPPS对 H9N2 攻毒保护作用 |
| 2.10.1 攻毒后PPPS对肺脏病理变化影响 |
| 2.10.2 攻毒后PPPS对肺脏中病毒载量的影响 |
| 3 分析与讨论 |
| 第三章 松花粉多糖对鸡肠道菌群的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 多糖及溶液配制 |
| 1.1.2 实验动物 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.1.4 主要仪器 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 样品采集 |
| 1.2.2 样本DNA提取 |
| 1.2.3 PCR扩增与产物纯化 |
| 1.2.4 生物信息学和统计分析 |
| 1.2.5 测序数据质量优化 |
| 1.2.6 OTU聚类及Venn图绘制 |
| 1.2.7 物种相对丰度图及热图 |
| 1.2.8 α多样性及UPGMA聚类树分析 |
| 1.2.9 qPCR验证测序结果 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 数据质量分析 |
| 2.2 基于OTU的 Venn图 |
| 2.3 物种相对丰度图 |
| 2.4 α多样性指数分析 |
| 2.5 等级聚类曲线 |
| 2.6 稀释曲线 |
| 2.7 UPGMA聚类树 |
| 2.8 qPCR验证 |
| 3 分析与讨论 |
| 第四章 松花粉多糖对巨噬细胞的免疫调节作用 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 多糖及溶液配制 |
| 1.1.2 细胞 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.1.4 主要仪器 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 巨噬细胞的复苏与培养 |
| 1.2.2 PPPS对 HD11 细胞增殖的影响 |
| 1.2.3 PPPS对 HD11 细胞吞噬作用的影响 |
| 1.2.4 PPPS对 HD11 细胞活性氧水平的影响 |
| 1.2.5 PPPS对 HD11 细胞分泌NO的影响 |
| 1.2.6 PPPS对 HD11 细胞分泌IL-1β和TNF-α的影响 |
| 1.2.7 细胞总RNA提取及质量检测 |
| 1.2.8 mRNA测序及数据分析 |
| 1.2.9 miRNA测序及数据分析 |
| 1.2.10 PPPS对 HD11 细胞受体的影响 |
| 1.2.11 MAPK抑制剂对HD11 细胞分泌NO、TNF-α和IL-1β的影响 |
| 1.2.12 PPPS对 HD11 细胞NF-κB分子的影响 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 PPPS对 HD11 细胞的免疫增强作用 |
| 2.1.1 PPPS对 HD11 细胞增殖作用 |
| 2.1.2 PPPS对 HD11 细胞吞噬作用的影响 |
| 2.1.3 PPPS对 HD11 细胞释放ROS的影响 |
| 2.1.4 PPPS对 HD11 细胞释放NO和 i NOS mRNA水平的影响 |
| 2.1.5 PPPS对 HD11 细胞分泌细胞因子的影响 |
| 2.2 PPPS对 HD11 细胞免疫调节作用转录组分析 |
| 2.2.1 测序数据与参考序列比对结果 |
| 2.2.2 皮尔逊相关系数和PCA分析结果 |
| 2.2.3 DEGs的鉴定和分析 |
| 2.2.4 DEGs的 GO和 KEGG通路富集分析 |
| 2.2.5 差异表达mRNA qPCR验证 |
| 2.2.6 miRNA测序分析及测序数据质量 |
| 2.2.7 miRNA差异表达鉴定和分析 |
| 2.2.8 miRNA靶基因的GO和 KEGG通路富集分析 |
| 2.2.9 差异表达miRNA的 qPCR验证 |
| 2.3 PPPS对 HD11 细胞受体的影响 |
| 2.3.1 PPPS对 HD11 细胞受体TLR2、4、MR的影响 |
| 2.3.2 TLR4 抑制剂抑制HD11 细胞分泌IL-1β、TNF-α、NO |
| 2.4 MAPK抑制剂抑制PPPS诱导HD11 细胞分泌IL-1β、TNF-α、NO |
| 2.5 PPPS对 HD11 细胞NF-κB分子的影响 |
| 2.5.1 PPPS上调HD11 细胞NF-κB分子mRNA水平 |
| 2.5.2 NF-κB抑制剂抑制HD11 细胞分泌IL-1β、TNF-α、NO |
| 3 分析与讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
（5）雷帕霉素通过lncRNA-LOC102553434介导细胞焦亡途径调控肢体缺血再灌注肺损伤的功能及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 引言 |
| 1、肢体缺血再灌注急性肺损伤概述 |
| 2、炎症小体的作用机制 |
| 3、细胞焦亡参与ALI发病过程 |
| 4、LncRNA对细胞焦亡和ALI的影响 |
| 5、雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)对疾病的影响 |
| 6、本课题研究目的及内容 |
| 第一部分 RAPA通过抑制细胞焦亡保护LIR诱导的ALI |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验步骤 |
| 3 结果 |
| 3.1 RAPA缓解LIR诱导的ALI |
| 3.2 RAPA在 ALI大鼠中发挥抗氧化作用 |
| 3.3 RAPA通过抑制细胞焦亡保护LIR诱导的ALI |
| 3.4 RAPA减轻LIR诱导的炎症 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 大鼠LIR肺组织转录组测序分析 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验步骤 |
| 3 结果 |
| 3.1 数据质量评估与比对 |
| 3.2 Clean reads的基因结构分析和染色体位置分布 |
| 3.3 差异表达的lncRNA和 mRNA |
| 3.4 差异表达mRNA和 lncRNA功能富集分析 |
| 3.5 lncRNA-miRNA-mRNA的 ceRNA分析结果 |
| 3.6 候选lnRNA的 qRT-PCR验证 |
| 3.7 lncRNA-miRNA-mRNA共表达网络 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 LOC102553434 在肺泡上皮细胞损伤中功能研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 RAPA保护肺泡上皮细胞免受LPS损伤 |
| 3.2 RAPA调控LOC102553434、rno-miR-674-5p和 MMP9 的表达 |
| 3.3 干扰LOC102553434 恢复LPS损伤的肺泡上皮细胞的增殖能力 |
| 3.4 LOC102553434 干扰抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞焦亡和MMP9 的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 肢体缺血再灌注急性肺损伤概述 |
| 参考文献 |
（6）RH005对放射损伤关键效应细胞生物学行为的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 胸腺素β4功能及应用研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）基于转录组测序研究甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎大鼠的机制影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一: 自身免疫性甲状腺炎的中医药研究进展 |
| 1 自身免疫性甲状腺炎的中医概念 |
| 2 自身免疫性甲状腺炎的中医病因病机 |
| 3 自身免疫性甲状腺炎的辨证分型及分期分型 |
| 4 自身免疫性甲状腺炎的中医治疗 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二: 自身免疫性甲状腺炎的研究进展 |
| 1 发病诱因 |
| 2 发病机制 |
| 3 诊断与治疗 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 综述三: STAT3/HIF1α通路在自身免疫性甲状腺炎中的研究进展 |
| 1 STAT3在免疫细胞中的作用 |
| 2 HIF1α在免疫细胞中的作用 |
| 3 STAT3/HIF1α通路在AIT中的作用 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 实验一: LC/MS分析甲炎康泰成分并对其药效进行观察 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 5 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二: 转录组分析甲炎康泰对AIT大鼠甲状腺组织的机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 5 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三: 甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎大鼠STAT3/HIF1α信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 5 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四: 甲炎康泰对Nthy-ori-3-1细胞STAT3/HIF1α信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 5 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 致谢 |
（8）紫檀芪对LPS致肺损伤保护效果的初步研究与应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩写表 |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 急性肺损伤研究进展 |
| 1 急性肺损伤概述 |
| 2 急性肺损伤发病机制 |
| 2.1 炎症反应 |
| 2.2 细胞凋亡 |
| 2.3 凝血/纤溶系统失衡 |
| 2.4 氧化应激 |
| 3 急性肺损伤治疗研究 |
| 3.1 机械通气治疗 |
| 3.2 药物治疗 |
| 4 常见急性肺损伤模型 |
| 4.1 机械通气法 |
| 4.2 LPS肺部或全身给药法 |
| 4.3 滴注活菌法 |
| 第二章 紫檀芪研究进展 |
| 1 紫檀芪理化性质 |
| 2 紫檀芪药理活性 |
| 2.1 紫檀芪的抗炎作用 |
| 2.2 紫檀芪的抗氧化作用 |
| 2.3 紫檀芪的抗肿瘤作用 |
| 2.4 紫檀芪的降血脂作用 |
| 2.5 紫檀芪的抑制真菌作用 |
| 3 紫檀芪检测方法 |
| 4 紫檀芪代谢研究 |
| 5 紫檀芪合成研究 |
| 第二篇 实验部分 |
| 第一章 紫檀芪对LPS致小鼠急性肺损伤保护效果的初步研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验药品及试剂 |
| 1.3 主要仪器及设备 |
| 1.4 所需试剂配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验分组及处理 |
| 2.2 小鼠急性肺损伤模型构建 |
| 2.3 实验样本采集 |
| 2.4 小鼠肺组织湿干重比值(W/D)的测定 |
| 2.5 小鼠肺组织病理学评估 |
| 2.6 小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数及蛋白浓度测定 |
| 2.7 小鼠肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性的测定 |
| 2.8 小鼠肺组织氧化应激指标变化的测定 |
| 2.9 qRT-PCR检测小鼠肺组织中促炎性细胞因子mRNA的表达 |
| 2.10 Western blotting实验检测NF-κB和 Nrf2/HO-1 信号通路蛋白的表达 |
| 2.11 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 紫檀芪降低LPS诱导的ALI小鼠肺组织湿干重比值(W/D) |
| 3.2 紫檀芪减轻LPS诱导的ALI小鼠肺组织病理学变化 |
| 3.3 紫檀芪降低LPS诱导的ALI小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞数目与蛋白浓度 |
| 3.4 紫檀芪降低LPS诱导的ALI小鼠肺组织MPO活性 |
| 3.5 紫檀芪提升LPS诱导的ALI小鼠肺组织抗氧化能力 |
| 3.6 紫檀芪抑制LPS诱导ALI小鼠肺组织中促炎性细胞因子mRNA表达 |
| 3.7 紫檀芪抑制LPS诱导的ALI小鼠肺组织中NF-κB信号转导通路 |
| 3.8 紫檀芪激活LPS诱导的ALI小鼠肺组织中Nrf2/HO-1信号转导通路 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 紫檀芪对LPS致雏鸡肺损伤保护效果的观察 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验药品及试剂 |
| 1.3 主要仪器及设备 |
| 1.4 所需试剂配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验分组及给药操作方法 |
| 2.2 实验样本采集 |
| 2.3 雏鸡肺组织眼观病变及湿干重比值(W/D)的测定 |
| 2.4 雏鸡肺组织病理学评估 |
| 2.5 雏鸡肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性的测定 |
| 2.6 雏鸡肺组织氧化应激指标变化的测定 |
| 2.7 qRT-PCR检测雏鸡肺组织中促炎性细胞因子mRNA的表达 |
| 2.8 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 紫檀芪提升LPS致 ALI雏鸡体重增长率 |
| 3.2 紫檀芪减轻LPS致 ALI雏鸡肺脏眼观病变 |
| 3.3 紫檀芪降低LPS致 ALI雏鸡肺组织湿干重比值(W/D) |
| 3.4 紫檀芪减轻LPS致 ALI雏鸡肺组织病理学变化 |
| 3.5 紫檀芪降低LPS致 ALI雏鸡肺组织MPO活性 |
| 3.6 紫檀芪提升LPS致 ALI雏鸡肺组织抗氧化能力 |
| 3.7 紫檀芪抑制LPS致 ALI雏鸡肺组织中促炎性细胞因子mRNA表达 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（9）香烟烟雾诱导慢性阻塞性肺病的发生和向肺癌转化的作用及白头翁皂苷B4的干预机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 文献综述 慢性阻塞性肺病的发病机制及其向肺癌转化的研究进展 |
| 第一部分 白头翁皂苷B4对慢性阻塞性肺病小鼠的药效及作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 慢性阻塞性肺病小鼠模型的建立及分组给药 |
| 2.2 形态学观察 |
| 2.3 肺功能测定 |
| 2.4 COPD小鼠支气管肺泡灌洗液BALF中炎性因子的测定 |
| 2.5 HE染色观察小鼠肺组织病理形态学变化及支气管上皮化生的影响 |
| 2.6 RT-PCR测定COPD小鼠肺组织中相关炎性因子mRNA的表达 |
| 2.7 肺组织中氧化应激指标MPO、MDA、GSH-PX酶活性检测 |
| 2.8 免疫组织化学法测定肺组织中相关癌变蛋白表达 |
| 2.9 Western Blot检测小鼠肺组织中癌变相关蛋白Dnmt1、CDKN2A/P16、FHIT蛋白的表达 |
| 2.10 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 白头翁皂苷B4对COPD小鼠形态学及体重的影响 |
| 3.2 白头翁皂苷B4对COPD小鼠肺功能的影响 |
| 3.3 白头翁皂苷B4对COPD小鼠支气管肺泡灌洗液BALF中炎性因子表达水平的影响 |
| 3.4 白头翁皂苷B4对COPD小鼠肺组织病理形态学的影响 |
| 3.5 白头翁皂苷B4对COPD小鼠肺支气管上皮增生的影响 |
| 3.6 白头翁皂苷B4对COPD小鼠肺组织中相关基因表达水平的影响 |
| 3.7 白头翁皂苷B4对COPD小鼠肺组织中氧化应激指标MPO、MDA、GSH-PX酶活力的影响 |
| 3.8 白头翁皂苷B4对COPD小鼠肺组织中癌变相关蛋白P53、Ki67、hnRNPA2/B1 表达水平的影响 |
| 3.9 白头翁皂苷B4对COPD小鼠肺组织中甲基化相关蛋白Dnmt1、P16、FHIT表达水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二部分 白头翁皂苷B4对香烟烟雾提取物CSE诱导的人支气管上皮细胞16HBE的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 药物及配制 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 人支气管上皮细胞16HBE的培养 |
| 2.2 香烟烟雾提取物CSE的制备 |
| 2.3 CSE对16HBE细胞活力的影响 |
| 2.4 白头翁皂苷B4对16HBE细胞活力的影响 |
| 2.5 地塞米松(DEX)对16HBE细胞活力的影响 |
| 2.6 白头翁皂苷B4对CSE诱导的16HBE细胞活力的影响 |
| 2.7 RT-PCR检测16HBE细胞炎性因子表达水平 |
| 2.8 荧光探针DCFH-DA法检测CSE诱导的16HBE细胞内活性氧(ROS)水平 |
| 2.9 Western Blot法测定CSE诱导的16HBE细胞中相关蛋白表达 |
| 2.10 统计学分析 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 香烟烟雾提取物CSE对16HBE细胞活力的影响 |
| 3.2 白头翁皂苷B4对16HBE细胞活力的影响 |
| 3.3 地塞米松(DEX)对16HBE细胞活力的影响 |
| 3.4 白头翁皂苷B4对CSE诱导的16HBE细胞活力的影响 |
| 3.5 不同时间点香烟烟雾提取物CSE对16HBE细胞炎性因子mRNA表达水平的影响 |
| 3.6 白头翁皂苷B4对CSE诱导的16HBE细胞活性氧ROS表达水平的影响 |
| 3.7 白头翁皂苷B4对CSE诱导的16HBE细胞炎性因子mRNA表达水平的影响 |
| 3.8 白头翁皂苷B4对CSE诱导的16HBE细胞Snail1、Slug mRNA表达水平的影响 |
| 3.9 白头翁皂苷B4对CSE诱导的16HBE细胞MAPK信号通路相关蛋白表达水平的影响 |
| 3.10 白头翁皂苷B4对CSE诱导的16HBE细胞上皮化生相关蛋白表达水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简介 |
（10）丹参联合三氧化二砷瘀毒同治调控糖酵解逆转巨噬细胞极化的抗肝癌机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 肿瘤瘀毒病因病机理论研究 |
| 一、肿瘤瘀毒病因病机理论的源流研究 |
| (一) 以瘀作为肿瘤发生发展的核心 |
| 1. 瘀的定义 |
| 2. 瘀成为肿瘤发生发展核心要素的原因 |
| 3. 以瘀作为肿瘤核心病机取得的临床效果和局限性 |
| (二) 以毒作为肿瘤发生发展的核心 |
| 1. 毒的定义 |
| 2. 毒成为肿瘤发生发展核心要素的原因 |
| 3. 以毒作为肿瘤核心病机取得的临床效果和局限性 |
| (三) 瘀毒理论的出现及其出现原因 |
| 1. 瘀毒出现的时间 |
| 2. 瘀毒出现的原因 |
| (四) 当代肿瘤瘀毒理论代表性学者和医家观点 |
| 1. 以周仲瑛、程海波为代表的瘀毒理论 |
| 2. 以张光霁为代表的瘀毒理论 |
| 3. 以郑伟达为代表的瘀毒理论 |
| 4. 以王行宽为代表的瘀毒理论 |
| (五) 总结 |
| 二、瘀毒理论衍生的的治则治法研究 |
| (一) 瘀的治疗原则 |
| (二) 瘀的代表性治疗方法 |
| 1. 活血化瘀 |
| 2. 破血逐瘀 |
| (三) 毒的治疗原则 |
| (四) 毒的代表性治疗方法 |
| 1. 清热解毒 |
| 2. 以毒攻毒 |
| (五) 瘀毒的治疗原则 |
| (六) 瘀毒的代表性治疗方法 |
| 1. 活血化瘀联合清热解毒 |
| 2. 活血化瘀联合以毒攻毒 |
| 3. 破血逐瘀联合清热解毒 |
| 4. 破血逐瘀联合以毒攻毒 |
| (七) 总结 |
| 三、活血化瘀和以毒攻毒治法下的用药研究 |
| (一) 活血化瘀治法下代表性的药物 |
| 1. 丹参 |
| 2. 当归 |
| 3. 赤芍 |
| (二) 以毒攻毒治法下的代表性药物 |
| 1. 以山慈菇为代表的草药类攻毒药 |
| 2. 以斑蝥为代表的动物昆虫类药物 |
| 3. 以雄黄为代表的金石类药物 |
| (三) 丹参联合三氧化二砷瘀毒同治科学性及合理性分析 |
| (四) 以隐丹参酮为代表的中药提取物是否能够代表传统中药的若干问题 |
| (五)总结 |
| 四、瘀毒理论与肝癌 |
| 1. 瘀的形成是肝癌发生的前提 |
| 2. 因瘀致毒,因毒致变是肝癌进展的关键因素 |
| 3. 瘀毒互结是肝癌的核心病因病机 |
| 4. 肝癌巨噬细胞是瘀毒互结的效应靶标 |
| 第二部分 基于瘀毒病因病机理论的实验研究 |
| 一、基于瘀毒理论的丹参联合三氧化二砷药效学研究 |
| (一) 实验材料 |
| 1. 实验药品 |
| 2. 实验细胞系 |
| 3. 实验动物 |
| 4. 实验仪器 |
| 5. 实验试剂及耗材 |
| (二) 实验方法 |
| 1. 丹参有效成分的提取 |
| 2. 丹参有效成分的溶解 |
| 3. 细胞培养 |
| 4. 细胞增殖抑制实验 |
| 5. 小鼠Hep1-6原位癌模型的建立 |
| 6. 小鼠H22皮下移植瘤模型的建立 |
| 7. 动物分组及给药 |
| 8. 基础指标检测及分析 |
| 9. 病理组织化学染色 |
| 10. 统计学分析 |
| (三) 实验结果 |
| 1. 隐丹参酮是丹参提取物中理想的候选有效成分 |
| 2. 隐丹参酮联合三氧化二砷对肝癌细胞的体外抑制作用 |
| 3. 隐丹参酮联合三氧化二砷对小鼠H22移植瘤的生长抑制作用 |
| 4. 隐丹参酮联合三氧化二砷对小鼠H22移植瘤的增殖抑制作用 |
| (四) 分析与讨论 |
| 二、隐丹参酮联合三氧化二砷逆转巨噬细胞表型转化研究 |
| (一) 实验材料 |
| 1. 实验药品 |
| 2. 实验细胞 |
| 3. 实验仪器 |
| 4. 实验试剂及耗材 |
| (二) 实验方法 |
| 1. 小鼠血常规及血生化检测 |
| 2. 肿瘤组织中巨噬细胞的分型检测 |
| 3. 原代巨噬细胞的提取 |
| 4. 原代巨噬细胞的鉴定和分型检测 |
| 5. 原代巨噬细胞刺激实验 |
| 6. 原代巨噬细胞的吞噬能力检测 |
| 7. 原代巨噬细胞特征性分泌因子的检测 |
| 8. 统计学分析 |
| (三) 实验结果 |
| 1. 隐丹参酮联合三氧化二砷改善荷瘤小鼠血象并影响单核巨噬细胞 |
| 2. 隐丹参酮联合三氧化二砷改变小鼠肿瘤组织中巨噬细胞的分型 |
| 3. 隐丹参酮联合三氧化二砷体外促进巨噬细胞伪足形成 |
| 4. 隐丹参酮联合三氧化二砷体外增强巨噬细胞的吞噬能力 |
| 5. 隐丹参酮联合三氧化二砷体外促进原代巨噬细胞的激活和M1型活化 |
| (四) 分析与讨论 |
| 三、隐丹参酮联合三氧化二砷通过糖酵解途径调控巨噬细胞的抗肝癌机制研究 |
| (一) 实验材料 |
| 1. 实验药物 |
| 2. 实验仪器 |
| 3. 试剂及耗材 |
| (二) 实验方法 |
| 1. 细胞糖酵解代谢产物及关键代谢酶的检测 |
| 2. 细胞转录组测序及分析 |
| 3. 糖酵解关键信号通路蛋白和基因检测 |
| 4. 肿瘤细胞和巨噬细胞的葡萄糖竞争实验 |
| 5. 统计学分析 |
| (三) 实验结果 |
| 1. 隐丹参酮联合三氧化二砷体内调节荷瘤鼠糖酵解水平 |
| 2. 隐丹参酮联合三氧化二砷体外促进原代巨噬细胞的糖酵解水平 |
| 3. 隐丹参酮联合三氧化二砷体外抑制H22肝癌细胞的糖酵解水平 |
| 4. 隐丹参酮联合三氧化二砷通过AMPK信号通路促进巨噬细胞糖酵解 |
| 5. 隐丹参酮联合三氧化二砷通过抑制HIF-1α通路抑制H22肝癌细胞糖酵解 |
| 6. 隐丹参酮联合三氧化二砷通过HIF-1α和AMPK信号通路综合调节糖酵解发挥抗肿瘤作用 |
| (四) 分析与讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 文献综述 肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤中的作用及中医药调控研究发展 |
| 1. TAMs的起源和分化 |
| 2. TAMs的类型 |
| 3. TAMs的极化 |
| 4. TAMs调控肿瘤进展 |
| 5. TAMs作为肿瘤治疗的靶点 |
| 6. 中医药对巨噬细胞的影响 |
| 7. 总结 |
| 参考文献 |
四、中药814对肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子基因表达的抑制作用（论文参考文献）
- [1]TSC1-mTOR在肺泡巨噬细胞稳态维持和IL-13信号应答中的作用研究[D]. 胡艳香. 青岛大学, 2021
- [2]陈皮碱性提取物调控内质网应激治疗肺纤维化的机制研究[D]. 王志超. 南京中医药大学, 2021(01)
- [3]额尔敦-乌日勒的活性成分分析及其对小胶质细胞基因调控作用的研究[D]. 其布日. 内蒙古大学, 2021(11)
- [4]松花粉多糖对鸡肠道黏膜免疫的影响及巨噬细胞的免疫调节作用[D]. 沙洲. 山东农业大学, 2021
- [5]雷帕霉素通过lncRNA-LOC102553434介导细胞焦亡途径调控肢体缺血再灌注肺损伤的功能及机制研究[D]. 黄丹. 南昌大学, 2021(01)
- [6]RH005对放射损伤关键效应细胞生物学行为的影响及其机制研究[D]. 邢源. 河北北方学院, 2021(01)
- [7]基于转录组测序研究甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎大鼠的机制影响[D]. 张程斐. 北京中医药大学, 2021(01)
- [8]紫檀芪对LPS致肺损伤保护效果的初步研究与应用[D]. 张勇. 吉林大学, 2021(01)
- [9]香烟烟雾诱导慢性阻塞性肺病的发生和向肺癌转化的作用及白头翁皂苷B4的干预机制研究[D]. 马惠苗. 江西中医药大学, 2021
- [10]丹参联合三氧化二砷瘀毒同治调控糖酵解逆转巨噬细胞极化的抗肝癌机制研究[D]. 姜涛. 浙江中医药大学, 2021