一、老年痴呆的早期信号（论文文献综述）
宋晓晨[1]（2021）在《基于古今医案的痴呆中医因机证治规律研究》文中指出目的:对于痴呆的治疗,始终是国内外研究的热点与难点。本课题拟从中医医籍及国内较为权威的学术数据库所记载的中医痴呆古今医案入手,梳理中医治疗痴呆的古今医案情况,呈现大历史观下医家临证诊治痴呆的演变与发展,挖掘整理古今医家对痴呆的病因病机等理论的认识及古今医家对痴呆的诊疗规律和经验,为痴呆的中医临床治疗与科学研究提供借鉴、拓展思路。同时,结合对痴呆古代文献的梳理与中医相关研究的概述,对痴呆的中医药治疗进行总体论述。方法:1.基于《中华医典》对痴呆的古代文献进行搜集整理,应用理论归纳与分析法,按照病名溯源、病因病机、治疗沿革等进行分析。2.基于黑龙江中医药大学图书馆库存的中医学经典医籍以及中国知网、万方数据库、维普中文期刊服务平台、中国生物医学文献服务系统等电子数据库对痴呆的古今医案进行搜集整理,应用数理统计、数据挖掘与网络药理学方法,按照医案年代分布情况、患者性别年龄分布情况、病因分布情况、病性病位分布情况、症状分布情况、方药应用情况等进行分析。3.基于中国知网、万方数据库、维普中文期刊服务平台、中国生物医学文献服务系统等电子数据库对近10年来痴呆（阿尔茨海默病）的中医研究进行搜集整理,应用文献计量学方法,按照发文年份、发文地域、发文单位、文献类型、研究内容、项目支持、核心期刊、核心作者等进行分析。结果:1.痴呆首见于唐代的《华佗神医秘传》,又名“呆痴”“愚痴”“痴病”“神呆”“呆证”“呆病”等。明代以前多作为其他疾病的症状。可由药邪、先天因素、外伤、七情内伤、他病继发等诱发,病机以脏腑气血虚损为本,痰、瘀、火热为标。病位以心、脑为主,兼有肝、脾、肾。治疗兼见针灸与中药疗法。针灸选穴多为心经与肾经上的穴位。中药疗法包含藜芦、牵牛、石菖蒲、远志等化痰药及多个化痰补虚方的应用。2.共录入医案376则,分为少量的古代医案与近代医案,以及大量的现代医案。患者以60-79岁的男性居多。常见病因依次为他病继发、情志因素、毒邪、先天因素和外伤。常见病性依次为痰、血瘀、精髓亏虚、气虚、火热、气滞、阴虚等。常见病位依次为肾、心神（脑）、脾、心、肝、肺、胃、胆。常见症状依次为善忘、神情淡漠、反应迟钝、智能降低、性情改变等。常见方剂依次为补益剂、祛痰剂、活血剂、祛湿剂、行气剂、清热剂等。常见药物依次为补虚药、清热药、化痰止咳平喘药、活血化瘀药、理气药、解表药等。应用频率最高的方剂依次为地黄饮子、补阳还五汤、菖蒲郁金汤、六味地黄丸、通窍活血汤、温胆汤等。应用频率最高的药物依次为石菖蒲、远志、川芎、茯苓、丹参、甘草等。常用药物可聚类为补虚类、活血类、化痰类。经关联规则分析,结合临床应用情况与疗效评估,得到常用药对及核心药物组成为石菖蒲-远志、熟地黄-山茱萸、桃仁-红花-川芎、郁金-陈皮-半夏-茯苓-石菖蒲。对支持度百分比最高的石菖蒲-远志药对进行网络药理学分析,得到9个活性成分,73个潜在靶点,流体剪切应力与动脉粥样硬化、c AMP信号通路、蛋白质去泛素化、甲状腺激素信号通路、活性氧代谢过程、节律周期过程等多个生物学过程及通路。3.共纳入近10年痴呆（阿尔茨海默病）的中医研究文献1558篇。年发文数量呈波动增长。主要发文地域依次为北京、湖北、广东、黑龙江、山东等。主要发文单位依次为湖北中医药大学、北京中医药大学、黑龙江中医药大学、广州中医药大学、南京中医药大学等。文献类型以期刊论文为主。研究内容包含临床观察,实验研究,理论分析,以及治未病、护理、康复等早期防护与病后调护的相关研究。治疗方法囊括中药、针灸、贴敷、推拿、砭法、导引等。研究受到了国家自然科学基金、国家重大新药创制等多项资助与支持。载文量最多的中华中医药学刊、中国老年学杂志、中华中医药杂志、辽宁中医杂志等18种期刊为“核心区”期刊,尚未形成“核心作者”。结论:1.历代医家对痴呆的认识由以虚、痰为主要病机演变为以虚及正虚夹痰夹瘀为主,并兼见火热、气滞、湿阻、寒凝、水停等,治法也由补虚、化痰发展为补虚、化痰、活血、开郁、清热、燥湿、驱寒、利水等。2.痴呆的病因有他病继发、七情内伤、外伤、毒邪、先天因素等,病性以痰、血瘀、精髓亏虚为主,病位以肾、脑、脾、心、肝为主,症状表现为善忘、神情淡漠、反应迟钝、智能低下等,证型以正气不足的虚证与虚中夹痰夹瘀的本虚标实证为主,治疗时多应用补虚药、化痰药、活血药、清热药等,依据具体证型进行辨证施治。3.常用方剂有地黄饮子、补阳还五汤、菖蒲郁金汤、通窍活血汤、温胆汤等,常用中药有石菖蒲、远志、川芎、茯苓、丹参、甘草、黄芪、半夏、郁金、当归等,常用药对及核心药物组成为石菖蒲-远志、熟地黄-山茱萸、桃仁-红花-川芎、郁金-陈皮-半夏-茯苓-石菖蒲。4.痴呆的中医研究处于稳步发展阶段,形成了中药、针灸、贴敷、推拿、砭法、导引等内服外治相结合、多靶点靶向治疗的日臻完善的治疗模式,研究趋势为痴呆的早期干预与病后调护。
朱晓婷[2]（2021）在《解毒益智方对阿尔茨海默病双转基因小鼠行为学及大脑皮层内β-淀粉样蛋白沉积及BACE1表达影响的研究》文中进行了进一步梳理选题依据:阿尔茨海默病（AD）致残、致死率高,发病机制复杂,大脑内Aβ异常沉积是AD发生发展的重要病理变化及核心环节,前期研究已证实了解毒益智方具有抑制AD线虫头部Aβ斑块沉积及相关基因表达的作用,随之开展的随机对照临床研究证实解毒益智方应用6个月后MMSE、MoCA、ADL评分变化明显优于口服尼莫地平片的对照组。黄连为解毒益智方中的君药,为该方的主要成分,在本方中发挥“解毒”的重要功效。经查阅国内外文献发现黄连中发挥“解毒”作用的主要物质为黄连多糖（CCP）,因此设计体外细胞实验探究解毒益智方中的君药黄连的主要有效成分CCP对Aβ25-35损伤PC12的保护作用,为“毒损”的病机及“解毒”的治法提供理论依据,为后续研究提供研究基础。因前期开展的研究均是以单基因单细胞的生物为研究对象,不能很好地模拟AD的疾病特点,因此选用APP/PS1双转基因小鼠作为研究对象,该小鼠很好的模拟了中枢神经系统Aβ异常沉积的状态,通过对小鼠的行为学研究及分子生物学研究,进一步评价解毒益智方的治疗作用。目的:通过体外细胞实验探讨基于“补肾益髓、活血化痰解毒”法形成的解毒益智方其中君药的有效成分CCP对Aβ25-35损伤PC12的保护作用。通过行为学、分子生物学等研究手段,对APP/PS1小鼠的认知功能、Aβ沉积、BACE1表达的相关蛋白、基因等方面进行检测和分析,探讨解毒益智方对APP/PS1小鼠的作用机制,为中药治疗AD的推广应用提供可靠的研究证据。方法:1.本研究分别从体外实验、动物实验探究解毒益智方的作用机制。体外实验部分采用MTT还原法、Hoechst33258荧光染色等方法对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤模型进行线粒体活性、细胞活力、细胞凋亡的测定,探究CCP对PC12细胞的保护作用。动物实验部分选用APP/PS1双转基因小鼠为研究对象,随机分为5组,分别是模型组（APP/PS1组）、盐酸多奈哌齐组（Donepezil组）、解毒益智方低剂量组（JDYZFL组）、解毒益智方中剂量组（JDYZFM组）、解毒益智方高剂量组（JDYZFH组）,每组16只小鼠,另选用16只C57小鼠作为正常对照组（Control组）,于每日早晨8:30进行灌胃治疗,各组每日灌胃药物及剂量分别是,正常组和模型组0.5%CMC溶液0.20g·kg-1·d-1;阳性对照组:盐酸多奈哌齐溶液0.30g·kg-1·d-1;解毒益智方高、中、低剂量组药物浓度依次为0.60g·kg-1·d-1,0.3g·kg-1·d-1,0.15g·kg-1·d-1。持续6个月治疗结束。2.以Aβ25-35损伤的PC12细胞为研究对象,通过测定细胞活力、LDH释放率、细胞凋亡率、和线粒体膜电位的水平等评价CCP的神经保护作用。3.通过水迷宫实验,记录解毒益智方对APP/PS1小鼠学习记忆能力的影响。4.通过ELISE及免疫荧光法检测APP/PS1小鼠脑内Aβ水平的变化,观察解毒益智方对APP/PS1小鼠脑内Aβ沉积的影响。5.采用PCR方法检测脑组织SIRT1、NF-κB、BACE1基因量变化,并进一步采用Western blot方法检测大脑皮层内SIRT1、BACE1、NF-κB蛋白的变化,观察解毒益智方对APP/PS1小鼠脑内AMPK/SIRT1-PPARγ-PGC1α-BACE1转运蛋白通路SIRT1、BACE1、NF-κB的影响。结果:1.通过体外研究观察CCP对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的影响PC12细胞活力测定结果显示:PC12细胞经过浓度为5-50μM的Aβ25–35处理24h后,细胞活力随着Aβ25–35浓度的增加从24%下降至61%。当Aβ25–35在浓度范围为5至50μM时引起PC12细胞中LDH释放增加至对照组的约130-160%。在用不同浓度的CCP（5至200μg/ml）处理PC12细胞24h后,未观察到显着的细胞损失。通过Hoechst33258染色及FCM测定细胞凋亡结果显示:细胞核在荧光显微镜下具有显着的浓缩核和凋亡的细胞形成。与在未处理的PC12细胞中观察到的完整,圆形和相对大的细胞核相比,暴露于50μMAβ25–35 24h的细胞显示出典型的细胞凋亡特征,包括染色质浓缩,核碎裂和凋亡小体的出现。用CCP不同浓度（5,25,50,100,200μg/ml）处理后可有效逆转细胞凋亡,其中100μg/ml效果最明显,FCM分析显示单独暴露于50μMAβ25–35 24h导致58.88±6.12%的凋亡率,这与正常对照组中的7.21±0.82%的值显着不同（P<0.01）。加入100μg/ml的CCP后,细胞凋亡下降至12.51±1.32%。通过JC-1红色荧光与JC-1绿色荧光的比率的变化来检测Aβ诱导的线粒体功能障碍结果显示:当PC12细胞暴露于50μM的Aβ25–35中24h后,与正常对照组相比,显着减弱了JC-1的红色荧光比例,提高了JC-1绿色荧光比例（P<0.01）。用CCP（100μg/ml）预处理Aβ25–35处理的PC12细胞显着抵消了Aβ25–35损伤引起的膜电位损失,JC-1从Aβ25–35处理的PC12细胞中的22.1%变为绿色荧光至84.3%,与正常对照组相近（P>0.05）。通过蛋白质印迹法检测细胞色素C结果显示:经50μMAβ25–35处理PC12细胞24h后细胞色素C在细胞质中的蛋白质表达增加,而预先用CCP（100μg/ml）处理的PC12细胞显着减弱线粒体释放的胞质细胞色素C。2.观察JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力的影响。水迷宫实验结果显示:随着实验天数的后移,各组小鼠潜伏期、路径长度、游泳距离均有所缩短,表明随着训练次数的增加各组小鼠对象限平台的定位记忆能力随之有所提升。与Control组相比,APP/PS1组逃避潜伏期、路径长度、游泳距离均明显延长,差异显着（P<0.01）。首次到达平台的时间明显延长,目标停留次数明显减少,差异显着（P<0.01）。与APP/PS1组相比,Donepezil组、JDYZFL组、JDYZFM组逃避潜伏期、路径长度、游泳距离有所缩短,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。首次到达平台的时间缩短,目标停留次数增多,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。与Donepezil组相比,JDYZFL组作用与其相当,JDYZFM组略优于Donepezil组,差异有统计学意义（P<0.05）。干预治疗6个月的12月龄小鼠的定位航行实验及空间搜索实验结果优于干预治疗3个月的9月龄小鼠,差异有统计学意义（P<0.05）。3.观察JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠脑内Aβ沉积的影响。各组小鼠结果如下:与Control组比较,APP/PS1组大脑皮层内可溶性及不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42沉积极数量明显增多,具有极显着统计学意义（P<0.01）。与APP/PS1组相比,JDYZFL组、JDYZFM组及Donepezil组大脑皮层内可溶性及不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42沉积数量不同程度降低,具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。与Donepezil组比较,JDYZFM组大脑皮层内可溶性及不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42沉积数量有所降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。通过免疫荧光法测得小鼠大脑皮层内Aβ表达发现,Control组只产生微量Aβ,而APP/PS1组Aβ表达量明显增高,经过用药干预后,12月龄干预组小鼠可溶性及不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42沉积数量较9月龄小鼠明显减少,免疫荧光标记从宏观上可以发现干预组Aβ沉积明显减少,APP/PS1组Aβ沉积明显增多。4.调控BACE1表达的相关因子结果（1）PCR检测结果各组小鼠进行的PCR检测结果显示:与Control组相比,APP/PS1组小鼠大脑皮层内BACE1/GAPDH、NF-κB/GAPDH表达含量明显增高,SIRT1/GAPDH明显降低,差异有显着统计学意义(（P<0.01）。与APP/PS1组相比,Donepezil组、JDYZFL组及JDYZFM组小鼠海马体内BACE1/GAPDH、NF-κB/GAPDH表达含量不同程度降低,SIRT1/GAPDH表达含量不同程度增高,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。JDYZFH组在NF-κB/GAPDH表达上无统计学差异。与Donepezil组相比,JDYZFL组及JDYZFM组BACE1/GAPDH、NF-κB/GAPDH表达含量不同程度降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。PCR结果证实药物干预组可通过提高SIRT1mRNA的含量降低NF-κBmRNA、BACE1mRNA的表达,从而抑制Aβ的产生而起到神经保护的作用。各治疗组大脑皮层Aβ的表达均有所降低。连续灌胃6个月的各组小鼠与连续灌胃3个月的小鼠相比,除APP/PS1组及Control组,其他各组SIRT1mRNA的表达均有所提高,NF-κBmRNA、BACE1mRNA的表达均有所降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。（2）Westorn blot检测结果各组小鼠的Western blot检测结果显示:与Control组相比,APP/PS1组小鼠大脑皮层SIRT1的蛋白表达明显降低,NF-κB、BACE1蛋白表达显着升高（P<0.01）。与APP/PS1相比,Donepezil组、JDYZFL组、JDYZFM组BACE1、NF-κB表达降低,SIRT1蛋白表达增高差异有统计学意义（P<0.05）。与Donepezil比较,JDYZFL组、JDYZFM组NF-κB蛋白表达有所降低,差异有统计学意义（P<0.05）。JDYZFL组SIRT1、BACE1蛋白表达无显着差异,JDYZFM组SIRT1表达有所提高,BACE1蛋白表达量略有降低,差异有统计学意义（P<0.05）。经过为期3个月及6个月的干预后,各治疗组大脑皮层Aβ的表达均有所降低。连续灌胃6个月的各组小鼠与连续灌胃3个月的小鼠相比,除APP/PS1组及Control组,其他各组SIRT1的蛋白表达均有所提高,NF-κB、BACE1蛋白的表达均有所降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1 CCP能够保护Aβ25-35损伤的PC12细胞,其机制可能与提高细胞活力、抑制细胞凋亡、减少LDH释放、阻断膜电位的丧失,并阻止线粒体细胞色素C释放,修复线粒体功能障碍有关。2 JDYZF各剂量组可不同程度提高APP/PS1双转基因小鼠定位航行实验及空间搜索实验的成绩,说明JDYZF可改善小鼠空间学习及记忆能力。3 JDYZF可不同程度降低APP/PS1双转基因小鼠大脑皮层内Aβ的异常沉积。4 JDYZF抑制BACE1的异常表达,其作用机制可能是通过调控大脑内AMPK/SIRT1-PPARγ-PGC1α-BACE1信号通路的相关因子表达实现的。
高炎[3]（2021）在《黄连解毒汤治疗阿尔茨海默病的临床观察及实验研究》文中提出目的:阿尔兹海默病（Alzeimer disease,AD）以起病隐匿、进行性认知功能损害为特征,属神经系统变性疾病,给患者生存质量及生命健康带来严重危害,目前我国老龄人口逐渐增加,AD的患病人数也逐年上升,药物治疗可改善AD患者临床症状,但不能彻底阻断其病程发展,服药疗程较长。既往临床研究结果显示,黄连解毒汤对AD具有治疗作用,在实验研究方面,黄连解毒汤对AD模型小鼠具有抑制AD特征性病理改变,下调炎性因子表达等作用效应。本研究采用单中心、随机、阳性药物对照、非劣效性设计,以多奈哌齐为对照药物,通过整体认知功能、日常生活活动能力、生活质量、中医证候方面综合评价黄连解毒汤对AD的疗效,通过观察不同时间点疗效以及不同时间段的疗效维持效应,分析黄连解毒汤治疗AD的时效特征。通过分析中医证候要素与整体认知功能、日常生活活动能力、生活质量的相关性,从现代医学角度理解AD患者中医证候的临床意义。为中医诊疗AD及应用黄连解毒汤治疗AD提供研究依据。本研究从学习记忆能力、Aβ及相关炎性因子、组织病理表现、小胶质细胞活化状态、NLRP3炎性小体相关蛋白及基因表达多层面观察黄连解毒汤对AD模型小鼠的作用效应,探讨黄连解毒汤干预AD的可能性机制。方法:1.临床观察:本研究收集符合纳入标准的50例AD患者,研究过程包含筛选AD患者、基线评价、随机分组、治疗阶段（12周）、随访阶段（12周）。经筛选后的AD患者随机分为试验组和对照组,均进行基线评价,评估可比性。在治疗阶段,对照组用多奈哌齐治疗,试验组用黄连解毒汤治疗。在随访阶段,停用黄连解毒汤和多奈哌齐。在疗效评价的指标方面,主要观察指标为MMSE量表与ADAS-Cog量表的评分以评价整体认知功能,ADL量表评分评价日常生活活动能力,QOL-AD量表评分评价生活质量,次要观察指标为PES-D/11量表评分评价中医证候要素分布及程度。分别比较两组患者主要观察指标在治疗后各时间点（入组第4、8、12、16、20、24周）与治疗前的差异,并分析同一时间点两组患者主要观察指标的组间差异。分析两组患者于入组第12周至第16周、入组第16周至第20周、入组第20周至第24周的主要观察指标差异率,进而比较两组疗效维持效应的差异。通过分析PES-D/11量表评分与MMSE、ADAS-Cog、ADL、QOL-AD量表评分的相关性,探讨中医证候要素与整体认知功能、日常生活活动能力、生活质量的相关性。比较两组患者次要观察指标于入组第12周的组间差异,观察黄连解毒汤与多奈哌齐对中医证候的影响并分析疗效差异。最后对两组服药的安全性以及依从性进行评价。2.实验研究:本实验以9月龄Tau/APP/PS1三转基因的AD模型小鼠为研究对象,随机分为模型组、多奈哌齐组、黄连解毒汤（Huanglian Jiedu Decoction,HLJDT）大剂量组、黄连解毒汤中剂量组、黄连解毒汤小剂量组。模型组予以羧甲基纤维素钠溶液,多奈哌齐组予以盐酸多奈哌齐片溶液,黄连解毒汤大、中、小剂量组分别予以865mg·kg-1·d-1、433mg·kg-1·d-1、216mg·kg-1·d-1不同浓度的黄连解毒汤提取物溶液,均灌胃给药3个月。实验一应用Morris水迷宫实验评价五组小鼠的学习能力与记忆能力。实验二通过ELISA法检测五组小鼠海马组织中可溶性及不可溶性的Aβ 1-40及Aβ 1-42、IL-1 β、IL-18的表达水平。实验三运用HE染色法观察五组小鼠海马CA1区的组织形态改变,用免疫组化方法观察五组小鼠海马CA1区的小胶质细胞形态及活化的小胶质细胞数量。实验四通过免疫印迹法检测五组小鼠海马组织NLRP3、ASC、Pro-caspase-1、Caspase-1 p20的蛋白表达量,采用实时荧光定量PCR检测五组小鼠海马组织NLRP3、ASC、Caspase-1的mRNA表达水平。结果:1.临床观察（1）患者招募情况本研究纳入AD患者50例,脱落8例,最终完成研究患者42例,试验组21例,对照组21例。（2）基线资料试验组与对照组患者治疗前在一般资料、痴呆评价相关量表评分、中医证候要素分布及证候程度、神经影像学评分方面,组间无统计学差异（P>0.05）。（3）各时间点疗效指标比较在MMSE量表评分方面,试验组与对照组于入组第4、8、20、24周的评分较治疗前无统计学差异（P>0.05）,两组于入组第12、16周的评分较治疗前增加（P<0.05）,入组第4、8、12、16、20、24周试验组与对照组评分的组间比较均无统计学差异（P>0.05）。在ADAS-Cog量表评分方面,试验组与对照组于入组第4、8、20、24周的评分较治疗前无统计学差异（P>0.05）,两组于入组第12、16周的评分较治疗前降低（P<0.05）,入组第4、8、12、16、20、24周试验组与对照组评分的组间比较均无统计学差异（P>0.05）。在ADL量表评分方面,试验组于入组第4、8、20、24周的评分较治疗前无统计学差异（P>0.05）,对照组于入组第4、8、16、20、24周的评分较治疗前无统计学差异（P>0.05）,试验组于入组第12、16周的评分较治疗前降低（P<0.05）,对照组于入组第12周的评分较治疗前降低（P<0.05）,入组第4、8、12、16、20、24周试验组与对照组评分的组间比较均无统计学差异（P>0.05）。在QOL-AD量表评分方面,试验组于入组第4、20、24周的评分较治疗前无统计学差异（P>0.05）,对照组于入组第4、8、20、24周的评分较治疗前无统计学差异（P>0.05）,试验组于入组第8、12、16周的评分较治疗前评分升高（P<0.05）,对照组于入组第12、16周的评分较治疗前评分升高（P<0.05）,入组第4、8、12、16、20、24周试验组与对照组评分的组间比较均无统计学差异（P>0.05）。重复测量数据的方差分析结果显示时间因素影响两组患者的MMSE、ADAS-Cog、ADL、QOL-AD评分。两组MMSE、QOL-AD评分在时间与组别间不存在交互效应,两组ADAS-Cog、ADL评分在时间与组别间存在交互效应。在MMSE、ADAS-Cog、ADL、QOL-AD评分方面,作为主体内差异因素的各时间点,其评分间有统计学差异（P<0.05）,作为主体间差异因素的两治疗方法,其评分间无统计学差异（P>0.05）。MMSE、QOL-AD评分随两组治疗时间的延长而增加,均在入组第12周升至最高水平。ADAS-cog、ADL评分随两组治疗时间的延长而降低,均在入组第12周降至最低水平。疗程结束后两组MMSE、QOL-AD评分出现降低,ADAS-cog、ADL评分出现升高。（4）疗效的维持效应入组第12周至第16周试验组与对照组ADL、QOL-AD评分差异率的组间比较有统计学差异（P<0.05）,显示试验组的疗效维持效应优于对照组,而同时间段MMSE、ADAS-cog评分差异率的组间比较无统计学差异（P>0.05）;入组第16周至第20周以及入组第20周至第24周试验组与对照组MMSE、ADAS-cog、ADL、QOL-AD评分差异率的组间比较均无统计学差异（P>0.05）。（5）中医证候要素与认知功能、日常生活活动能力、生活质量的相关性Spearman相关系数分析结果显示髓减、毒盛积分与MMSE评分呈负相关（r=-0.31,P=0.04;r=-0.33,P=0.03）,肾虚、毒盛积分与 ADAS-Cog评分呈正相关（r=0.39,P=0.01;r=0.31,P=0.04）。髓减、毒盛积分与ADL 评分呈正相关（r=0.35,P=0.02;r=0.32,P=0.04）。肾虚、痰浊、毒盛积分与QOL-AD评分呈负相关（r=-0.35,P=0.03;r=-0.36,P=0.02;r=-0.32,P=0.04）。（6）黄连解毒汤对中医证候要素的影响与治疗前比较,试验组治疗结束后（入组第12周）阳亢证、火毒证、痰浊证的积分均降低（P<0.05）,对照组治疗结束后（入组第12周）肾虚证、气虚证、血虚证、髓减证、血瘀证、阳亢证、痰浊证、火毒证的积分均无显着改变（P>0.05）。于两组治疗结束后（入组第12周）,试验组阳亢证、火毒证的积分均较对照组降低（P<0.05）,而两组肾虚证、气虚证、血虚证、髓减证、痰浊证、血瘀证积分无统计学差异（P>0.05）。（7）安全性观察两组患者于入组、治疗、随访期间的安全性相关实验室指标均未发生异常。不良反应方面,对照组恶心1例,试验组腹胀2例,均为轻度。两组不良反应发生率无统计学差异（P>0.05）。（8）依从性观察试验组服药依从率为85.71%（18/21）,对照组为80.95%（17/21）,两组服药依从率无统计学差异（P>0.05）。2.实验研究（1）黄连解毒汤对AD模型小鼠学习记忆能力的影响在前4天训练期以及第5天的定位航行实验中,5组小鼠的逃避潜伏期与游泳总路程逐渐缩短。第5天定位航行实验结果显示,与模型组相比,多奈哌齐组、HLJDT大剂量组、HLJDT中剂量组的逃避潜伏期均显着减少（P<0.01）,HLJDT小剂量组的逃避潜伏期也较模型组减少（P<0.05）,多奈哌齐组与HLJDT大、中、小剂量组的游泳总路程均较模型组减少（P<0.05）。空间探索实验结果显示,多奈哌齐组、HLJDT大剂量组及中剂量组的穿越平台次数与目标象限时间比均较模型组显着增加（P<0.01）,第一次抵达原平台时间均较模型组显着减少（P<0.01）。HLJDT小剂量组的穿越平台次数与目标象限时间比均较模型组增加（P<0.05）,HLJDT小剂量组的第一次抵达平台时间较模型组减少（P<0.05）。（2）黄连解毒汤对AD模型小鼠海马Aβ及相关炎性因子表达的影响在小鼠海马的A β 1-40及Aβ 1-42表达水平方面,与模型组相比,HLJDT大、中、小剂量组的可溶性与不可溶性Aβ 1-40、可溶性与不可溶性Aβ 1-42、总A β 1-40、总Aβ 1-42均显着降低（P<0.01）,多奈哌齐组的不可溶性A β 1-40表达降低（P<0.05）,多奈哌齐组的可溶性与不可溶性Aβ 1-42、可溶性A β 1-40、总Aβ 1-40、总Aβ 1-42的表达量显着降低（P<0.01）;与多奈哌齐组相比,HLJDT大剂量组的可溶性与不可溶性A β 1-40、可溶性与不可溶性A β 1-42、总A β 1-42表达量均降低（P<0.05）,HLJDT大剂量组的总A β 1-40表达水平显着降低（P<0.01）。HLJDT中剂量组的可溶性与不可溶性A β 1-40、可溶性与不可溶性Aβ 1-42、总Aβ 1-40、总A β 1-42表达量均较多奈哌齐组降低（P<0.05）;与HLJDT小剂量组相比,HLJDT大剂量组的可溶性A β 1-40和总A β 1-40表达量降低（P<0.05,P<0.01）,HLJDT中剂量组的可溶性A β 1-40和总Aβ 1-40表达量降低（P<0.05）。在小鼠海马IL-1 β表达量方面,HLJDT大、中、小剂量组与多奈哌齐组的表达量均较模型组降低（P<0.05）。在小鼠海马IL-18表达量方面,HLJDT大、中、小剂量组与多奈哌齐组的表达量均较模型组显着降低（P<0.01）,HLJDT大剂量组、HLJDT中剂量组的表达量均较多奈哌齐组降低（P<0.05）,HLJDT大剂量组、HLJDT中剂量组的表达量均较HLJDT小剂量组降低（P<0.05）。（3）黄连解毒汤对AD模型小鼠海马组织形态学及小胶质细胞活化情况的影响海马CA1区HE染色结果显示,模型组细胞层次减少,组织结构松散,排列紊乱,轮廓不清,神经细胞肿胀,部分细胞有空泡变性或固缩坏死。多奈哌齐组、HLJDT大剂量组、HLJDT中剂量组、HLJDT小剂量组的海马CA1区形态学表现较模型组改善,椎体细胞排列较整齐,组织结构更清晰,空泡变性或固缩坏死的细胞更少。在海马CA1区神经元总数目方面,HLJDT大剂量组、HLJDT中剂量组较模型组显着增加（P<0.01）,多奈哌齐组、HLJDT小剂量组较模型组增加（P<0.05）。海马CA1区免疫组化结果显示,模型组小胶质细胞为活化状态,呈阿米巴状。多奈哌齐组、HLJDT大、中、小剂量组均较模型组的小胶质细胞体积小,染色浅,细胞突起长,活化的小胶质细胞数量减少。在活化小胶质细胞数量方面,HLJDT大剂量组、HLJDT中剂量组较模型组显着减少（P<0.01）,多奈哌齐组、HLJDT小剂量组较模型组减少（P<0.05）,HLJDT大剂量组、HLJDT中剂量组较多奈哌齐组减少（P<0.05）。（4）黄连解毒汤对海马NLRP3炎性小体相关蛋白及mRNA表达的影响免疫印迹法检测结果显示,多奈哌齐组及HLJDT大、中、小剂量组海马NALRP3、ASC、Caspase-1 p20的蛋白表达水平均较模型组显着降低（P<0.01）;多奈哌齐组、HLJDT大剂量组、HLJDT中剂量组海马NALRP3、ASC、Caspase-1 p20的蛋白表达水平均较HLJDT小剂量组降低（P<0.05）;五组海马Pro-caspase-1蛋白表达无统计学差异（P>0.05）。实时荧光定量PCR检测结果显示,多奈哌齐组与HLJDT大、中、小剂量组海马NLRP3、ASC、Caspase-1的mRNA表达较模型组显着降低（P<0.01）。其余组间NLRP3、ASC、Caspase-1的mRNA表达均无统计学差异（P>0.05）。结论:1.经临床观察认为,黄连解毒汤治疗AD患者可改善整体认知功能、日常生活活动能力、生活质量。与多奈哌齐相比,黄连解毒汤在改善生活质量方面起效时间更早,在改善日常生活活动能力以及生活质量的疗效维持效应方面优于多奈哌齐。AD患者肾虚、髓减、毒盛与整体认知功能,髓减、毒盛与日常生活能力,毒盛、痰浊与生活质量均存在相关性。黄连解毒汤可有效减轻AD患者阳亢证、火毒证、痰浊证的严重程度,对阳亢证、火毒证的改善作用优于多奈哌齐。黄连解毒汤在服药安全性与患者依从性方面表现良好。2.实验研究表明黄连解毒汤对Tau/APP/PS1三转基因小鼠的学习记忆能力具有改善作用,可下调海马可溶性与不可溶性Aβ 1-40、总Aβ 1-40、可溶性与不可溶性A β 1-42、总A β 1-42以及IL-18、IL-1 β的表达水平,可减轻海马的组织病理损害,对海马小胶质细胞的活化状态具有抑制作用,可下调海马 NLRP3、ASC、Caspase-1 p20 蛋白以及 NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA的表达水平。在不同剂量黄连解毒汤的作用差异方面,大剂量组与中剂量组对海马可溶性A β 1-40、总Aβ 1-40、IL-18表达的抑制作用以及对海马NLRP3、ASC、Caspase-1 p20蛋白表达的下调作用均优于小剂量。上述实验结果提示黄连解毒汤改善Tau/APP/PS1三转基因小鼠的学习记忆能力可能与其抑制海马NLRP3炎性小体相关蛋白及基因表达、调节小胶质细胞活化状态、抑制神经炎症、保护神经元的作用有关。
刘欣媛[4]（2021）在《针灸对不同月龄SAMP8小鼠行为学及海马齿状回神经元新生障碍的影响》文中提出【目的】本实验选用3、6、10月龄的快速老化小鼠SAMP8作为实验对象,结合“针灸治未病”思想,观察针灸“肾俞”穴、“百会”穴、“神门”穴对小鼠行为学、海马齿状回Aβ1-42表达、海马Tau蛋白表达、海马齿状回神经元数目以及神经元新生障碍的影响,探索阿尔茨海默病病理下海马齿状回神经元新生障碍的特点,以期为阿尔茨海默病病理形成与发展的机制研究提供新的切入点,并为针灸作为有效治疗手段改善神经元新生障碍以防治AD提供新的实验依据。【方法】选用3、6、10月龄的SAMP8小鼠及同龄且遗传背景相同的SAMR1小鼠作为实验对象。随机将3月龄SAMP8小鼠分为3M针灸组、3M模型组,每组各6只;3M正常组为6只3月龄SAMR1小鼠。随机将6月龄SAMP8小鼠分为6M针灸组、6M模型组,每组各6只;6M正常组为6只6月龄SAMR1小鼠。随机将10月龄SAMP8小鼠分为10M针灸组、10M模型组,每组各6只;10M正常组为6只10月龄SAMR1小鼠。3M针灸组、6M针灸组、10M针灸组分别在“百会”穴、双侧“神门”穴进行针刺,双侧“肾俞”穴进行艾灸,15min/次,1次/d。6d为1个疗程共进行4个疗程,疗程间间隔1d。疗程结束后,采用Morris水迷宫实验、开场实验、新物体识别实验检测各组小鼠行为学变化;免疫组化法检测各组小鼠海马Aβ1-42表达、Neu N（成熟神经元标记蛋白）表达,免疫印迹法检测各组小鼠Tau蛋白表达;免疫荧光双标法检测各组小鼠海马齿状回PCNA（增殖细胞核抗原）/Neu N、PCNA/DCX（未成熟神经元标记蛋白）阳性细胞表达。【结果】1.各组小鼠行为学变化:（1）Morris水迷宫实验显示,在水迷宫实验中,3M针灸组平均逃避潜伏期短于3M模型组（P<0.01）,跨越平台次数多于3M模型组（P<0.05）。6M针灸组平均逃避潜伏期短于6M模型组（P<0.01）,跨越平台次数多于6M模型组（P<0.05）。10M针灸组平均逃避潜伏期短于10M模型组,跨越平台次数多于10M模型组,但差异均无统计学意义。（2）开场实验显示,3M针灸组在中央区活动时间均长于3M模型组（P<0.05）。6M针灸组在中央区活动时间均长于6M模型组（P<0.01）。10M针灸组在中央区活动时间均长于10M模型组（P>0.05）（3）新物体识别实验显示,3M针灸组新物体识别系数高于3M模型组（P<0.05）。6M针灸组新物体识别系数高于6M模型组（P<0.05）。10M针灸组新物体识别系数高于10M模型组（P>0.05）。2.各组小鼠海马齿状回Aβ1-42、Neu N表达以及海马Tau蛋白表达免疫组化检测结果显示:与3M正常组相比,3M模型组小鼠海马齿状回Aβ1-42平均光密度值（MOD）升高（P<0.05）,而Neu N平均光密度值降低（P<0.05）;3M针灸组小鼠海马齿状回Aβ1-42平均光密度值（MOD）低于3M模型组（P<0.05）,而Neu N平均光密度值高于3M模型组（P<0.05）。与6M正常组相比,6M模型组小鼠海马齿状回Aβ1-42平均光密度值（MOD）升高（P<0.01）,而Neu N平均光密度值降低（P<0.01）;6M针灸组小鼠海马齿状回Aβ1-42平均光密度值（MOD）低于6M模型组（P<0.01）而Neu N平均光密度值高于6M模型组（P<0.05）。与10M正常组相比,10M模型组小鼠海马齿状回Aβ1-42平均光密度值（MOD）升高（P<0.05）,而Neu N平均光密度值降低（P<0.05）;10M针灸组小鼠海马齿状回Aβ1-42平均光密度值（MOD）低于10M模型组（P>0.05）,而Neu N平均光密度值高于10M模型组（P>0.05）,差异均无统计学意义。比较Aβ1-42平均光密度值（MOD）在各月龄小鼠中的增龄性变化,结果显示:3M正常组<6M正常组<10M正常组;3M模型组<6M模型组<10M模型组;3M针灸组<6M针灸组<10M针灸组。比较Neu N平均光密度值（MOD）在各月龄小鼠中的增龄性变化,结果显示:10M正常组<6M正常组<3M正常组;10M模型组<6M模型组<3M模型组;10M针灸组<6M针灸组<3M针灸组。Western blot实验结果显示,与3M正常组相比,3M模型组小鼠海马区Tau蛋白相对表达量升高（P<0.01）;3M针灸组小鼠海马区Tau蛋白相对表达量相对表达量低于3M模型组（P<0.01）。与6M正常组相比,6M模型组小鼠海马区Tau蛋白相对表达量升高（P<0.01）;6M针灸组小鼠海马区Tau蛋白相对表达量相对表达量低于6M模型组（P<0.05）。与10M正常组相比,10M模型组小鼠海马区Tau蛋白相对表达量升高（P<0.01）;10M针灸组小鼠海马区Tau蛋白相对表达量相对表达量低于10M模型组（P<0.05）。比较Tau蛋白相对表达量在各月龄小鼠中的增龄性变化,结果显示:3M正常组<6M正常组<10M正常组;3M模型组<6M模型组<10M模型组;3M针灸组<6M针灸组<10M针灸组。3.各组小鼠海马齿状回PCNA/Neu N、PCNA/DCX阳性细胞表达情况免疫荧光双标检测结果显示:与3M正常组相比,3M模型组小鼠海马齿状回PCNA/Neu N阳性细胞表达降低（P<0.01）,而PCNA/DCX阳性细胞表达增高（P<0.01）;3M针灸组小鼠海马齿状回PCNA/Neu N阳性细胞表达高于3M模型组（P<0.01）,PCNA/DCX阳性细胞表达高于3M模型组（P<0.05）。与6M正常组相比,6M模型组小鼠海马齿状回PCNA/Neu N阳性细胞表达降低（P<0.05）,而PCNA/DCX阳性细胞表达增高（P<0.01）;6M针灸组小鼠海马齿状回PCNA/Neu N阳性细胞表达高于6M模型组（P<0.01）,PCNA/DCX阳性细胞表达高于6M模型组（P<0.01）。与10M正常组相比,10M模型组小鼠海马齿状回PCNA/Neu N阳性细胞表达降低（P<0.01）,而10M模型组小鼠海马齿状回PCNA/DCX阳性细胞表达增高（P<0.05）;10M针灸组小鼠海马齿状回PCNA/Neu N阳性细胞表达高于10M模型组（P>0.05）,PCNA/DCX阳性细胞表达高于10M模型组（P>0.05）,差异无统计学均意义。比较PCNA/Neu N、PCNA/DCX阳性细胞表达在各月龄小鼠中的增龄性变化,结果显示:10M正常组<6M正常组<3M正常组;10M模型组<6M模型组<3M模型组;10M针灸组<6M针灸组<3M针灸组。4.各组小鼠海马齿状回神经元新生功能比较PCNA/Neu N阳性率记为A、PCNA/DCX阳性率记为B,C=B/（A+B）,C值代表海马齿状回神经元新生功能。C3M正常组>C3M针灸组>C3M模型组;C6M正常组>C6M针灸组>C6M模型组;C10M正常组>C10M针灸组>C10M模型组。比较C值在各月龄小鼠中的增龄性变化,结果显示C3M正常组>C6M正常组>C10M正常组;C3M模型组>C6M模型组>C10M模型组;C3M针灸组>C6M针灸组>C10M针灸组。【结论】伴随月龄增加,在行为学方面,SAMP8小鼠空间学习记忆能力和工作记忆能力逐渐下降,并出现焦虑抑郁等消极情绪;在病理学方面,SAMP8小鼠海马齿状回Aβ1-42表达增加、海马区Tau蛋白表达水平升高、海马齿状回Neu N表达减少,揭示了SAMP8小鼠关于AD的病理变化即Aβ沉积、神经元纤维缠结、神经元丢失均呈增龄性加重,SAMP8小鼠海马齿状回PCNA/Neu N、PCNA/DCX阳性细胞表达随着月龄增加而减少,进一步提示海马齿状回神经元新生数量减少,出现渐进性神经元新生障碍,揭示了AD病理下海马齿状回神经元新生障碍的特点即新生的神经元过少无以补偿损失的神经元。针灸治疗可上调SAMP8小鼠海马齿状回Neu N、DCX表达,使神经元新生数量增加,改善海马神经元新生障碍,延缓AD病理进程,提高SAMP8小鼠学习记忆能力。且根据统计学结果可以确定针灸对3月龄、6月龄SAMP8小鼠的治疗效果均优于10月龄SAMP8小鼠,可能提示针灸最佳干预点在6月龄之前。
谭爱华[5]（2021）在《痰瘀同治 清热解毒法防治AD的理论探讨及其调控HSP70介导的神经保护机制研究》文中认为目的:通过理论研究初步提出较为系统的AD病变全过程的病机演变规律,探析由因虚生热和痰瘀化热导致的“热”推动AD病变发展这一重要病机,及AD病理变化的四个关键过程:“虚生痰瘀-痰瘀化热-热结酿毒-毒损脑络”,探讨AD病理进程中的“热”和“毒”的理论内涵,梳理痰瘀同治、清热解毒法防治AD的理论依据。通过实验研究探索建立稳定可靠的AD-痰瘀互结病证结合动物模型,解析痰瘀同治、清热解毒法对AD-痰瘀互结病证结合动物模型的干预作用及其可能的作用机制,阐明痰、瘀在AD的病理变化过程中存在“化热”这一关键过程,并尝试揭示“痰瘀化热酿毒”“毒损脑络”的生物学过程以及“热”和“毒”可能的生物学基础,初步证实痰瘀同治、清热解毒法可通过调控HSP70介导的神经保护机制发挥改善脑神经炎症、改善海马神经元突触结构和可塑性、抑制神经元凋亡等作用。方法:1、理论研究方法:以《古今图书集成医部全录》、《四库全书》子部、《中华医典》（第5版）为主要工具,综合古今医家之言,系统梳理虚、痰、瘀及痰瘀互结、化热酿毒、毒损脑络这些因素和环节与AD的关联,整理中医学对AD病变全过程的病机演变认识,探析“热”和“毒”的理论内涵,梳理痰瘀同治、清热解毒法防治AD的的理论依据。2、实验研究方法:（1）以3月龄APP/PS1双转基因小鼠作为AD的疾病模型动物,用D12492高脂饮食饲喂,改变其血脂指标,以模拟中医“痰”证的病理状态;用0℃冰水浴处理,改变其血液流变指标,以模拟中医“瘀”证的病理状态;二者结合模拟同时存在“痰”“瘀”的病理状态,分别建立AD-痰、瘀、痰瘀互结病证结合动物模型。通过比较各组小鼠的学习与记忆能力,舌色客观变化,以及血脂、血液流变学、脑神经炎症、AD相关病理变化的指标来评价模型,探索建立稳定可靠的AD-痰、瘀、痰瘀互结病证结合动物模型。（2）复制AD-痰瘀互结证病证结合动物模型,分为5个组:不予给药处理的模型组、给予痰瘀同治的益智温胆汤组、给予清热解毒的黄连解毒汤组、同时给予痰瘀同治和清热解毒的益智温胆汤+黄连解毒汤组,以及作用机制对照药物替普瑞酮组,并以同系遗传背景的非转基因C57小鼠作为空白对照组,分别处理40天。Morris水迷宫法检测各组小鼠学习记忆能力;刚果红染色法、甘氨酸镀银染色法、透射电镜法、高尔基染色法等方法分别观察各组小鼠海马区SP、NFTs、神经元超微结构变化、突触和树突棘的改变等;使用免疫荧光标记法,Western Blot法检测各组小鼠海马组织内相关蛋白的表达和共定位关系,比较各组小鼠的病理改变、脑神经炎症、凋亡、突触、线粒体功能等的变化情况。结果:1、实验一结果（1）Morris水迷宫:与AD-Model组比较,各组小鼠的平均游泳速度差异无统计学意义。Control组小鼠游泳总路程和上平台潜伏期明显更短,穿越平台次数明显更多,其余各组小鼠的游泳总路程、上平台潜伏期和穿越平台次数差异无统计学意义。（2）舌色对比:与AD-Model组小鼠相比,Control组小鼠舌色偏淡红,其余各组小鼠舌色偏暗红。AD-Pbs组小鼠的舌色r值最小。（3）血液流变学指标检测:与AD-Model组小鼠相比,Control组小鼠全血黏度和血浆黏度更低。其余各组小鼠的全血黏度和血浆黏度均有不同程度升高。而与AD-Model组小鼠相比,AD-Bss组和AD-Pbs组小鼠的全血黏度和血浆黏度更高。（4）血脂指标检测:与AD-Model组小鼠相比,Control组小鼠血脂指标差异无统计学意义。其余各组小鼠的血脂指标均有不同程度升高,与AD-Model组小鼠相比,AD-Ps组和AD-Pbs组小鼠的各项血脂指标更高,但其差异不具有统计学意义。（5）Western Blot:与Control组小鼠相比,各组小鼠的海马组织TNF-α、IL-1β和T-Tau均明显升高。与AD-Model组小鼠比较,AD-Pbs组小鼠海马组织中的TNF-α、IL-1β和T-Tau的差异具有统计学意义。2、实验二结果:（1）Morris水迷宫:与Control组比较,各组小鼠游泳总路程和上平台潜伏期明显延长,穿越平台次数明显减少。与Model组比较,各组小鼠平均游泳速度差异无统计学意义,各给药组小鼠游泳总路程和上平台潜伏期均缩短,穿越平台次数有不同程度的增加。（2）跳台实验:与Control组比较,各组小鼠潜伏期明显缩短、出错次数增加;与Model组比较,各给药组小鼠潜伏期延长、出错次数减少。3、实验三结果:（1）刚果红染色:Control组小鼠海马区和皮层中几乎没有观察到SP,而Model组小鼠海马区和皮层中散在分布着许多SP,各给药组SP均有不同程度的减少。（2）甘氨酸银浸镀:与Control组小鼠相比,Model组小鼠海马区染色明显加深,镜下可见大量被染成黑色条状的NFTs,以CA3区最为明显;各给药组小鼠海马区的NFTs有不同程度减少。（3）透射电镜:Control组小鼠海马神经元细胞结构完整,染色质团聚在核内,线粒体丰富,核糖体和粗面内质网均匀散在分布在胞质中。Model组小鼠海马神经元出现细胞死亡现象,镜下可见细胞核塌陷,边界破解甚至消失,染色质固缩或消失,视野内可见若干凋亡小体分布,线粒体数量明显减少,且大部分线粒体出现肿胀甚至破裂,粗面内质网结构松散,仅可见少量零星分布的核糖体。各给药组小鼠海马神经元也存在不同程度的损伤,但细胞核整体形态正常、结构完整,镜下可见部分线粒体肿胀,粗面内质网排列松散,核糖体减少等现象。（4）Western Blot:与Control组小鼠比较,各组小鼠总Tau蛋白和三个不同位点磷酸化的Tau蛋白含量均有不同程度的升高,与Model组小鼠相比,各给药组小鼠总Tau蛋白和三个不同位点磷酸化的Tau蛋白均有不同程度的减少。4、实验四结果:（1）免疫荧光:与Control组小鼠相比:Model组小鼠海马区Aβ1-42、GFAP、Iba-1、的荧光数量和强度均明显上升,DG区Aβ1-42蛋白的周围分布着大量的GFAP蛋白和Iba-1蛋白;PSD95荧光数量和强度明显减少;Model组小鼠皮层和海马区均可见大量HSP70荧光,各给药组小鼠皮层和海马各个区域的HSP70荧光数量和强度均有不同程度的增强,CA3区和DG区更为明显。与Model组小鼠相比,各个给药组小鼠海马区Aβ1-42蛋白、GFAP蛋白和Iba-1蛋白荧光数量和荧光强度均不同程度的降低,PSD95荧光数量和强度有不同程度增加。（2）HSP70和Aβ1-42、Tau荧光共定位:胞内外均可见由HSP70的红色荧光和Aβ1-42的绿色荧光重叠的黄色荧光。由红色荧光的HSP70和绿色荧光的Tau重叠的黄色荧光,几乎都分布在胞外。（3）Western Blot:与Control组相比:Model组小鼠海马组织中的TNF-α、IL-1β、IL-10等脑神经炎症指标和HSF1、HSP70均明显上升;各组小鼠Bcl-2蛋白表达均有不同程度的下调、Bax蛋白和c-Caspase-3蛋白表达均有不同程度的上调、均有不同程度的上调,Model组小鼠尤其明显,而YZ+HL组与Control组的差异不具有统计学意义;Model组小鼠海马组织中的均明显上升。与Model组相比:各给药组小鼠海马组织中的促炎因子TNF-α、IL-1β有明显的下调,IL-10除GGA组的差异具有统计学意义外,其余各给药组与Model组的差异均无统计学意义;各给药组小鼠的Bcl-2蛋白均有上调,Bax蛋白和c-Caspase-3蛋白均有下调;YZ+HL组和GGA组小鼠海马组织中HSF1有明显的上调;其余各给药组与Model组相比,HSP70蛋白的差异均具有高度统计学意义;对YZ+HL和GGA组进行LSD分析,两者在HSF1表达的差异具有统计学意义,HSP70表达的差异无统计学意义。（4）高尔基染色:与Control组比较,Model组小鼠脑组织中神经元数量和树突棘均明显减少,镜下可见CA3和DG区的神经元丢失情况最为明显。与Model组相比,各给药组小鼠脑组织中神经元数量、树突棘数量均有不同程度的增多,各给药组海马区神经元树突棘均有明显增加,其差异均具有统计学意义。结论:1、虚是AD发生的根本,痰、瘀是AD的病理过程中的重要推动因素,痰瘀化热酿毒进一步加速了AD的发生发展。“虚生痰瘀-痰瘀化热-热结酿毒-毒损脑络”是AD发生发展的四个关键过程。2、起于病之始的“因虚生热”和现于病之中的“痰瘀化热”导致了“热”可能是推动AD病变发展的重要因素。3、痰瘀热化酿毒,毒损脑络是AD的最终环节。“痰瘀化热酿毒”的生物学过程可能是错误折叠沉积的Aβ蛋白和异常磷酸化的Tau过度活化了小胶质细胞和星形胶质细胞,诱发了脑神经炎症,促进了SP和NTFs的形成;“毒损脑络”的生物学过程可能是具有神经毒性的寡聚态Aβ蛋白、异常磷酸化的Tau和它们引起的各种致炎因子释放,导致了神经元的凋亡和突触的损伤。“毒”的生物学基础可能是神经损害性错误折叠沉积的Aβ蛋白形成SP和异常磷酸化的Tau形成的NTFs;“热”的生物学基础可能是脑神经炎症反应过程中产生和释放的各种致炎因子。4、痰瘀同治、清热解毒法可以有效改善AD-痰瘀模型小鼠的学习记忆能力和病理改变,其可能的作用机制是通过调控HSP70介导的神经保护机制,抑制了Aβ的生成和沉积、Tau的异常磷酸化,进而抑制了星形胶质细胞和小胶质细胞的激活,减轻了脑神经炎反应,减少了神经元的凋亡,保护了海马神经元和树突棘,发挥了神经保护作用。
岳瑞珍[6]（2021）在《热敏灸对AD模型大鼠Aβ转运代谢功能的研究》文中提出研究目的本研究以Aβ1-42诱导的AD模型大鼠为对象,用艾灸的方法,观察艾灸热敏与否对AD模型大鼠认知行为、海马神经元的形态、Aβ代谢转运酶的影响,探讨热敏灸对AD模型大鼠的干预效果及作用机制。研究方法本实验研究采用雄性SD大鼠为对象,适应3d后,将其随机分为空白对照组（A组）,假手术组（B组）,其余予以Aβ1-42进行诱导来造模。AD模型建立方法:使用3%戊巴比妥钠对大鼠进行麻醉,麻醉后剃除其位于颅顶部位的毛发以便后续进一步手术,再采用脑立体定位仪固定大鼠脑部,并用碘伏对大鼠的伤口消毒,将其皮下肌肉组织与皮毛分离后,用洁净的干棉球拭去其残留血迹,将其颅骨中线及前囟暴露。参照包新民《大鼠脑立体定位图谱》,侧脑室注射位点以前囟为基点,后移0.8mm,中线旁开1.2mm,以牙科钻钻开颅骨,用10μL微量注射器自脑表面垂直向下进针4 mm,回针1mm,预留一定的注射空间,左右两侧分别缓慢注入5μL的Aβ1-42(含5μg Aβ1-42),5min内注射完毕,注射后留针5min以保证溶液充分弥散后缓慢撤针。手术尾声时以骨蜡密封手术所造成的骨窗,并随即以青霉素在其局部进行喷洒以达到消毒的目的,最终将事先分离的皮肤进行缝合。值得注意的是,在整个手术过程内,接受手术的大鼠体温应当保持在36.5-37.5℃的恒定范围之内。通过水迷宫实验进一步筛选出造模成功的AD模型大鼠,并将其分为AD模型组（C组）,阳性对照组（G组）,其余大鼠给予艾灸治疗。艾灸组每天艾灸1次,每次艾灸40分钟;阳性对照组每天给予药物1次;治疗共持续28天。根据艾灸热敏程度自然分为艾灸热敏组（D组）、艾灸不热敏组（E组）、艾灸迟发热敏组（F组）。艾灸热敏组（D组）:艾灸治疗过程中平均尾温升高>1℃;在采取艾灸手段对AD模型大鼠进行治疗之前,按照实验大鼠腧穴图谱中的定位,事先将大鼠“大椎”穴处的毛发剃去。整个治疗过程之中,将艾条（江西中医药大学附属医院,规格:直径1cm,长12cm,）垂直悬空于“大椎”穴约3 cm的高处予以温和灸,1次/日,每次持续灸40min,共28天。同时将室温控制于25±2℃的恒定温度。艾灸开始前,大鼠被置于特制鼠笼中安静30分钟。用医用红外额温计（调为物温模式）分别在艾灸准备开始前及艾灸开始后每5分钟测量一次大鼠中段的尾温,直至第40分钟,艾灸结束。大鼠尾温为同一时间点3次测量的平均温度。艾灸不热敏组（E组）:艾灸治疗过程中平均尾温升高≤1℃;操作步骤与艾灸热敏组相同。艾灸迟发热敏组（F组）:艾灸治疗过程中前7天平均尾温升高≤1℃,后随着治疗时间的延长,逐渐出现平均尾温升高>1℃;操作步骤与艾灸热敏组相同。阳性对照组（G组）:给予模型大鼠多奈哌齐0.5mg/kg/d腹腔注射。在28d疗程结束后,以水迷宫法对每组大鼠的行为学展开观测。并采取HE组织切片染色法对每组大鼠海马区的神经元形态与排列情况进行观测。采用ELISA法检测各组大鼠脑组织中α-分泌酶、β-分泌酶、γ-分泌酶含量。同时采用Western Blot法对每组大鼠海马组织中的IDE、NEP、ECE-1、ACE2、LPL、Apo E、LRP1、RAGE和RAP蛋白表达情况进行检测。研究结果1.水迷宫法观测结果:假手术组大鼠与对照组相比,水迷宫逃避潜伏期、第六天穿越次数、平台象限时间占比均无显着差异。与模型组相比,艾灸热敏组第1～5d的逃避潜伏期降低明显,第六天水迷宫穿越次、平台象限时间占比均显着升高,结果同阳性对照组;艾灸不热敏组与艾灸迟发热敏组大鼠水迷宫逃避潜伏期变化无统计学意义,艾灸迟发热敏组大鼠水迷宫第六天水迷宫穿越次数与平台象限时间占比显着性升高,艾灸不热敏组大鼠水迷宫平台象限时间占比显着升高。与艾灸不热敏组比较,艾灸热敏组的逃避潜伏期明显缩短,第六天水迷宫穿越次数和平台象限时间占比均显着性升高,而艾灸迟发热敏组逃避潜伏期无明显改变,第六天水迷宫穿越次数和平台象限时间占比均显着性升高。2.HE组织切片染色法观测结果:对照组与假手术组大鼠的海马神经元及其胶质细胞未出现异常现象且其排列均匀整齐,细胞质丰富,无间质出血,无坏死。而AD模型组大鼠的脑组织出现严重损伤的现象,具体表现为其神经元细胞的排列出现一定程度上的紊乱,且其细胞形态出现严重的肿胀及变形,同时神经元大量丢失,严重者出现神经元大量死亡,并伴随有部分细胞核出现溶解、固缩的现象。与AD模型组大鼠相比,进行治疗后,各组大鼠的脑组织损伤出现减轻的现象,其中艾灸热敏组和阳性对照组减轻明显,脑组织形态较正常,无炎细胞浸润,排列整齐;迟发热敏组的细胞紊乱和炎症细胞浸润程度也有所减轻;艾灸不热敏组无明显改善。HE半定量评分显示:与模型组相比,艾灸热敏组、艾灸迟发热敏组与阳性对照组大鼠脑组织HE半定量评分显着下降,艾灸不热敏组大鼠脑组织HE半定量评分变化无统计学意义。与艾灸不热敏组比较,艾灸热敏组和艾灸迟发热敏组大鼠脑组织HE半定量评分显着下降,差异有统计学意义;且艾灸热敏组优于艾灸迟发热敏组。3.ELISA法测定结果:与对照组比较,模型组大鼠脑海马组织中α-分泌酶、β-分泌酶、γ-分泌酶含量均显着升高;与模型组比较,艾灸热敏组、艾灸迟发热敏组和阳性对照组大鼠脑组织中β-分泌酶、γ-分泌酶含量均有不同程度的降低,α-分泌酶的含量均有不同程度的升高,而艾灸不热敏组α-分泌酶无升高,β-分泌酶、γ-分泌酶无下降,差异无统计学意义。与艾灸不热敏组比较,艾灸热敏组α-分泌酶的含量明显升高,β-分泌酶、γ-分泌酶含量明显降低;艾灸迟发热敏组β-分泌酶含量明显降低,γ-分泌酶含量下降无统计学意义。4.WB结果显示:与空白对照组大鼠比较,假手术组的大鼠海马组织中的NEP、IDE、ECE-1、ACE2、LPL、Apo E、LRP1、RAGE和RAP蛋白的表达水平均无显着变化,而模型组中IDE、NEP、ECE-1、Apo E、ACE2和LRP1蛋白表达下降明显,RAGE和RAP蛋白的表达水平均呈现出显着的升高现象。而与此同时,LPL蛋白表达水平并无呈现出明显的变化趋势。较之于AD模型组大鼠,艾灸热敏组、艾灸迟发热敏组和阳性对照组的NEP、IDE、ECE-1、ACE2、Apo E和LRP1蛋白的表达水平均呈现出显着的升高现象,且海马组织中RAP、和RAGE蛋白表达水平均明显下降,艾灸不热敏组的大鼠脑海马组织中NEP、ECE-1、ACE2、LPL、Apo E、LRP1和RAP蛋白的表达水平均无显着变化,IDE表达显着升高,RAGE表达显着降低。与艾灸不热敏组比较,艾灸热敏组和艾灸迟发热敏组NEP、ECE-1、ACE2、Apo E、LRP1蛋白表达水平均显着升高,RAP蛋白表达水平均明显下降,而RAGE蛋白表达下降不明显,艾灸热敏组IDE蛋白表达明显升高,艾灸迟发热敏组IDE蛋白表达升高不明显。结论1.热敏灸干预能够提高AD模型大鼠的空间学习和记忆能力。2.热敏灸干预能提高AD模型大鼠的空间学习和记忆能力,可能与其改善AD模型大鼠海马区神经元及胶质细胞的排列结构和形态有关。3.热敏灸干预能提高AD模型大鼠的空间学习和记忆能力,可能与其升高AD模型大鼠海马组织中α-分泌酶的含量,降低β-分泌酶、γ-分泌酶含量从而使Aβ沉积减少有关。4.热敏灸干预能提高AD模型大鼠的空间学习和记忆能力,可能与其调节Aβ转运代谢相关蛋白有关。
葛辰杰[7]（2020）在《类脑计算模型在智能医疗中的研究与应用》文中进行了进一步梳理随着人工智能技术的蓬勃发展,医疗保健也得到极大的进步,因为人工智能可以胜任很多过去需要专业知识才能从事的工作,在某些领域例如疾病的早期检测诊断以及辅助生活,甚至超越了人类的表现。受人工智能取得巨大成功的启发,本文研究了一系列类脑计算模型,也就是直接受人脑处理数据启发的人工智能算法,来处理智能医疗中的相关应用问题。本文的主要贡献在于:1.提出了一种新的方法用于检测一组图像中的共同显着目标,也就是协同显着性区域检测。在该方法里,协同显着性被考虑成一个两阶段显着性能量传播任务。成对图像中的显着性值通过超像素之间颜色相似性进行传播,然后协同显着的前景先验和背景先验被一起考虑用于生成对比增强的协同显着性图。所提出的协同显着性检测方法在三个公开数据集上与九种主流方法的对比展示了其先进性。它进而被用于强化视频中人体行为的区域,提高了人体跌倒检测的准确率。2.受当前视觉假体中视觉感知的限制,有必要强化其功能性来帮助假体佩戴者完成诸如避障等具有挑战性的任务。脉冲神经网络模型被首次引入到障碍物识别任务中,通过对时空视频数据进行建模和分类。与障碍物相关的特征被从低分辨率的视觉假体图像中提取出来,输入到集成的脉冲神经网络模型中,它包含脉冲串编码,输入变量匹配,无监督的神经池训练以及有监督的分类器训练。基于脉冲计算的高效性使直接用现有的神经形态芯片嵌入到视觉假体中,提升其性能成为可能。3.提出了一种多通道多尺度卷积网络,用于提取MRI脑图像多分辨率的特征用于老年痴呆症的检测。本方法采用若干并行的三维多尺度卷积网络,每个网络应用于一种脑组织（灰质,白质或者脑脊液）。此外,还采用两层级的特征融合,第一层级是对同一脑组织不同尺度的特征做融合,第二层级是融合来自于不同脑组织的特征。为了进一步降低特征维数减轻过拟合,一种基于XGBoost的特征选择方法被用于筛选其中重要的特征用于分类。所提出方法在ADNI公开数据集上取得了98.29%的平均分类准确率。4.为了应对大脑胶质瘤数据集通常不够大以及伴有缺失模态图像的问题,提出一种基于成对生成对抗网络的MRI脑图像合成策略用于扩充训练集提升胶质瘤分类性能。成对生成对抗网络能以跨模态的方式合成逼真的MRI脑图像。还提出一种两阶段由粗到精的训练策略,以合成图像预训练分类网络接着用真实图像做微调。为了获得基于三维MRI图像的诊断结果,还采用一种后处理策略通过多数投票结合基于二维切片图像的分类结果。所提出方法在分子级别的胶质瘤分类任务中取得了88.82%的平均分类准确率。5.目前的脑胶质瘤数据集经常伴有缺失标记的情况。一种深度半监督学习方法被提出用于充分利用未标记数据。深度卷积特征被结合到一个基于图的半监督学习框架中,其中还增加了三维到二维标记连续性的约束,确保对来自同一三维脑扫描图像中的二维图像切片能做出相同的标记预测。深度学习分类器通过使用已标记数据和未标记数据以及它们的预测标记,最终对胶质瘤进行分类。所提出方法在胶质瘤分级任务中取得了90.70%的平均分类准确率,在分子级别的胶质瘤分类任务中分类准确率达到了86.53%。
李雪霞[8]（2020）在《Zn2+对阿尔茨海默症的损伤机制及干预药物的研究》文中认为阿尔茨海默症（Alzheimer’s disease,AD）,俗称老年痴呆症,是一种慢性神经退行性疾病。其发病机制极其复杂,目前尚未完全阐明,亦无有效的治疗药物,是一个棘手的社会和医疗问题。AD有两个典型的病理特征,分别是淀粉样蛋白Aβ在胞外聚集形成的老年斑,以及过度磷酸化的tau蛋白在胞内聚集形成的神经纤维缠结。长期以来,无论是在临床药物开发还是在基础科学研究中,Aβ淀粉样蛋白级联假说一直占据主要地位。然而与Aβ相比,tau蛋白的病理变化与临床症状相关度更高,且由于靶向Aβ药物的接连失败,人们的注意力开始转向tau蛋白。Tau蛋白包括两大主要结构域:N-端的外伸结构域和C-端的微管结合结构域,后者决定了tau的生物学功能及AD病理发生。金属离子如铜、铁、锌、铝等的动态平衡与AD的发生发展密切相关,特别是Aβ聚集形成老年斑的过程和磷酸化tau蛋白聚集形成神经纤维缠结的过程,此外金属离子还与氧化应激、突触可塑性、神经毒性、自噬和凋亡等机制有关。然而Zn2+离子与tau蛋白微管结合域第三段重复序列（tau-R3）的研究尚未见文献报导。因此,论文的第一部分,是应用一系列先进的实验手段从分子、细胞和动物三个层次上较为系统地研究了Zn2+对tau-R3的聚集和毒性的影响及分子机制。结果指出2分子tau-R3结合1分子Zn2+,其亲和力（Kd）为14.7 μM;Zn2+可以加速tau-R3的聚集,诱导tau-R3形成毒性更强的寡聚体;Tau-R3和Zn2++R3均可以进入N2A细胞,且Zn2++R3进入细胞的量更多,这可能是其对神经细胞毒性更强的原因之一;Zn2++R3增加了神经细胞p-tau的含量,对神经元树突棘的形态、突触素的含量、线粒体的损伤（如膜电位,形成ATP能力,能量代谢相关蛋白）等均有显着的影响;并能触发小鼠神经母细胞瘤（Neuro-2a,N2A）细胞的自噬起始,同时抑制了自噬的下游通路,引起了 N2A细胞的自噬障碍。基于上述结果我们用小鼠脑定位注射Zn2++R3的方法构建了能体现散发型AD症状的小鼠模型,在注射1.5个月后即出现AD的典型病理特征,多种行为学实验指出该小鼠产生了明显的认知障碍。非常有趣的是通过检测实验鼠血液的生化指标,我们发现Zn2++R3除了对AD的二个风险因子总胆固醇（TC/CHO）和血糖水平有所升高外,对其他指标均无影响,完全符合构建模型鼠的所有要素,因此有望发展成一种能广泛应用的散发型AD小鼠模型。本文的第二部分是研究具有干预早期AD效果的中药复方。长期以来AD的治疗药物仅有乙酰胆碱酶抑制剂及谷氨酸受体拮抗剂两类,但疗效均不理想。长期以来国外着名药企投以巨资研究新药,但进入二、三期临床后几乎全部失败,靶点单一及动物模型不合适是主要原因。关于中药治疗AD虽己发表很多论文,但尚无一种明确能防治AD的中成药被批准用于临床。我们的研究思路是从文献己报道对AD有明确防治作用的中药有效成分中选取,并按中医组方原理（君、臣、佐和使）组成小复方,希能起到协同作用。同时为了降低药物的毒副作用,所选用的组分主要来自国家公布的《药食同源》清单中。最终我们所选用的四种中药为:a人参总皂苷,b淫羊藿苷,c姜黄素（为了增加生物利用度添加了胡椒碱）和d漆黄素。我们将这些单方组成两组复方,分别为姜黄素,胡椒碱,淫羊藿苷,和人参总皂苷;及漆黄素,胡椒碱,淫羊藿苷,和人参总皂苷。每种小复方各分为高低两种剂量。小鼠正常饮食喂养至四月龄后,采用相应的含复方的饲料继续喂养四个月至八月龄,再详细进行小鼠行为学和多种AD病理特征及生化指标的检测。结果指出该两组小复方对AD均有明显的改善作用,降低了 AD小鼠脑组织中Aβ寡聚体、p-tau蛋白及神经纤维缠结的含量,增加了突触相关蛋白的含量并降低了神经元的死亡。总体而言,高剂量组优于低剂量组,漆黄素组优于姜黄素组。经生化分析证明该小复方对AD小鼠无肝肾毒性,并可显着降低AD小鼠的血脂水平;有望成为潜在的AD治疗药物。
刘珍洪[9]（2020）在《基于髓鞘及少突胶质细胞损伤探讨参枝苓口服液对AD的保护作用》文中研究指明目的本课题从中医心脑相关理论出发,选用“从心论治”代表方参枝苓口服液,基于髓鞘及少突胶质细胞损伤探讨其干预阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）的作用机制。AD是老年痴呆症最常见的类型。临床可表现为记忆、情志和行为障碍,对患者家庭、护理人员造成了沉重的经济和精神负担。近年来研究表明,髓鞘损伤与AD、帕金森疾病（Parkinson’sdisease,PD）和中风等神经退行性疾病相关。其中发现AD与髓鞘的破坏和丢失关系密切。研究发现髓鞘损伤早于认知障碍、老年斑（Senileplaque,SPs）和神经纤维缠结（Neurofibrillary tangles,NFTs）等病理改变,髓鞘损伤可能在AD早期认知障碍中发挥关键作用。PI3K/Akt-mTOR通路是髓鞘形成的强大驱动力,是CNS髓鞘蛋白表达的主要驱动因素。一些研究显示神经元PI3K/Akt-mTOR信号传导的异常和持续激活是AD的早期特征。mTOR在构成髓鞘的少突胶质细胞中对脂质合成,转录因子调节,和细胞骨架具有显着作用,这是少突胶质细胞发育不可或缺的过程。除外,表观遗传阻滞、脂质代谢异常皆与AD的病理密切相关。本研究通过体内实验探索参枝苓口服液是否有改善损伤髓鞘的作用,同时观察体外是否能通过保护Aβ42损伤的少突胶质细胞进而维持髓鞘完整性而防治早期AD。并基于PI3K/Akt-mTOR信号通路、表观遗传调控及脂质代谢探讨其可能机制,为参枝苓口服液保护髓鞘提供可能的证据。方法1.36只3月龄雄性APPswe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组,多奈哌齐组,参枝苓口服液组,每组12只。同背景、同月龄野生型C57BL/6J小鼠12只作为正常组。多奈哌齐组给予多奈哌齐（0.92mg.kg-1·d-1）灌胃给药,参枝苓口服液组给予参枝苓口服液（2.9ml·kg-1·d-1）灌胃给药。正常组和模型组灌予等体积的0.5%CMC。2.利用Y迷宫实验研究参枝苓口服液灌胃3个月后对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠空间识别和记忆能力的影响。3.利用透射电镜研究参枝苓口服液灌胃3个月后对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠海马中淀粉样斑块、髓鞘及少突胶质细胞超微结构的影响。4.利用免疫组化和Western blot方法研究参枝苓口服液灌胃3个月后对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠海马中髓鞘相关蛋白MBP、PLP和MAG与Aβ42蛋白的表达变化影响。5.40只雄性SD成年大鼠（200±20g）随机分为正常组和参枝苓口服液组,参枝苓口服液组以成人（70kg）等效剂量的2倍量进行灌胃,正常组灌服等体积0.5%CMC,每天1次,连续7d,制备参枝苓口服液含药血清。6.UHPLC-MRM-MS/MS方法检测参枝苓口服液含药血清主要有效成分。7.Aβ42损伤OLN-93少突胶质细胞,建立拟AD体外细胞模型。8.利用CCK-8法筛选参枝苓口服液含药血清及阳性药多奈哌齐对OLN-93少突胶质细胞的安全剂量和有效剂量。9.利用Western blot、RT-qRCR法、免疫荧光研究参枝苓口服液含药血清对Aβ42损伤OLN-93少突胶质细胞髓鞘相关蛋白和PI3K/Akt-mTOR信号通路蛋白及mRNA表达影响。10.利用PI3K/Akt-mTOR信号通路抑制剂LY294002（PI3K抑制剂）及Rapamycin（mTOR抑制剂）进一步确认PI3K/Akt-mTOR信号通路在参枝苓口服液髓鞘保护中的参与作用。11.利用染色质免疫共沉淀（CHIP）实验观察参枝苓口服液对Aβ42损伤少突胶质细胞OLN-93的乙酰化组蛋白与MBP基因相互作用。12.利用LC-MS/MS法观察参枝苓口服液对Aβ42损伤少突胶质细胞OLN-93脂质代谢的影响。结果1.体内动物实验参枝苓口服液和阳性对照药多奈哌齐连续灌胃3个月后可以明显延长APPswe/PS1dE9双转基因小鼠在新异臂中活动的路程和持续时间。透射电镜下可观察到在损伤的少突胶质细胞附近淀粉样斑块的沉积,而正常组和治疗组未观察到。同时,透射电镜下观察到参枝苓口服液和多奈哌齐可以明显改善髓鞘板层的结构、髓磷脂的崩解以及少突胶质细胞的结构破坏。在此基础上,对各组小鼠海马进行免疫组化及Western blot实验结果也显示,参枝苓口服液和多奈哌齐可以明显上调APPswe/PS1dE9双转基因小鼠海马中髓鞘相关蛋白MBP、PLP和MAG的蛋白表达。同时,APPswe/PS1dE9双转基因模型小鼠海马中观察到Aβ42的蛋白表达上调,参枝苓口服液和多奈哌齐可以明显下调小鼠海马中Aβ42的蛋白表达。2.UHPLC-MRM-MS/MS方法检测参枝苓口服液及参枝苓含药血清主要有效成分参枝苓口服液中,芍药内酯苷、肉桂酸、甘草酸、甘草苷和芍药苷这5种代谢物都能检测到。且浓度含量:甘草酸>芍药苷>芍药内酯苷>肉桂酸>甘草苷。参枝苓口服液大鼠含药血清中,可以检测到肉桂酸、甘草酸、甘草苷和芍药苷这4种代谢物。浓度含量:甘草酸>肉桂酸>芍药苷>甘草苷。芍药内酯苷虽然在质谱中可以检测到峰,但是信号可能与噪音相似,定量检测未检测出含量。提示,参枝苓口服液确实可以经过灌胃入血发挥作用,参枝苓口服液髓鞘保护作用可能与肉桂酸、甘草酸、甘草苷和芍药苷这4种成分密切相关。3.体外细胞实验Aβ42可以诱导OLN-93少突胶质细胞引起损伤,100μMAβ42孵育细胞16h以及1μM、10μM和100μM的Aβ42孵育细胞24h和48h后可以明显降低细胞活力。同时,1～100μM的Aβ42孵育细胞24h,细胞的损伤率明显增加。1～100μM的Aβ42孵育24h可以对细胞形态造成破坏,引起细胞固缩,碎裂,死亡。并且,Aβ42孵育24h可以显着升高OLN-93细胞的凋亡水平。用CCK-8法筛选参枝苓口服液含药血清和多奈哌齐的安全剂量、给药时间范围结果显示,1%～20%浓度的参枝苓口服液含药血清孵育3～48h对正常OLN-93细胞不具有细胞毒性,甚至16%和20%浓度的参枝苓口服液含药血清孵育24h和48h可以显着提高正常OLN-93细胞的细胞活力。多奈哌齐对正常OLN-93细胞的安全剂量及时间为:孵育 3h（0.01μM,0.1μM,1 μM,10μM,100μM）;孵育 24h（0.01 μM,0.1 μM,1μM,10μM,100μM）;孵育 48h（0.01 μM,0.1μM,1 μM,10μM）。CCK-8法筛选参枝苓口服液含药血清和多奈哌齐的有效剂量、给药时间范围,16%,20%参枝苓口服液含药血清孵育24h及48h。1 μM,10μM和100μM多奈哌齐孵育3h或24h;0.1μM,1μM和10μM多奈哌齐孵育48h。Aβ42损伤OLN-93少突胶质细胞,与体内动物实验一致,表现为Aβ42明显下调少突胶质细胞髓鞘相关蛋白MBP、PLP、MAG和MOG的表达,并且下调MBP和PLP的mRNA表达水平,而参枝苓口服液含药血清和多奈哌齐干预后可以明显逆转这些蛋白和mRNA的表达水平。另一方面,Aβ42损伤OLN-93少突胶质细胞还表现为引起PI3K/Akt-mTOR信号通路的异常。Aβ42不仅可以下调PI3K,Akt及mTOR的蛋白和mRNA表达水平,还可以明显下调p-PI3K,p-Akt及p-mTOR的蛋白表达水平,而参枝苓口服液含药血清和多奈哌齐干预后可以明显逆转这些蛋白和mRNA的表达水平。参枝苓口服液含药血清和多奈哌齐对Aβ42损伤OLN-93少突胶质细胞的保护作用可以被PI3K/Akt-mTOR信号通路的抑制剂完全逆转,具体表现为,无论是使用LY294002,Rapamycin还是联合使用LY294002与Rapamycin都可以完全逆转参枝苓口服液含药血清和多奈哌齐上调MBP的能力。CHIP实验显示:Aβ42损伤OLN-93少突胶质细胞后组蛋白H3乙酰化水平升高。多奈哌齐和参枝苓口服液含药血清下调组蛋白H3乙酰化水平。同时,Aβ42损伤OLN-93少突胶质细胞后,更多的基因MBP发生了组蛋白H3乙酰化。多奈哌齐和参枝苓口服液含药血清可以下调组蛋白H3乙酰化的MBP基因水平。脂质代谢结果显示:正常组的CL、PA、PC、PE、PG、PI、PS显着高于模型组。模型组的Cer、DG、SM和TG显着高于正常组。两组Cerp、Hex2Cer、HexCer和Sphingosine含量均等。多奈哌齐的Cer、CL、PA、PC、PE、PG、PI、PS显着高于模型组。模型组的SM和TG明显高于多奈哌齐组。参枝苓口服液的Cer、DG、CL、PA、PC、PE、PG、PI、PS、SM显着高于模型组。模型组的TG明显高于参枝苓口服液组。结论参枝苓口服液具有改善损伤髓鞘的作用,同时参枝苓口服液含药血清能保护Aβ42损伤的少突胶质细胞进而维持髓鞘完整性而防治早期AD。参枝苓口服液的髓鞘保护作用与PI3K/Akt-mTOR信号通路、表观遗传调控及脂质代谢密切相关。首先,参枝苓口服液可能通过上调PI3K,Akt及mTOR mRNA的水平,引起PI3K,Akt及mTOR蛋白的表达水平上调,增加PI3K,Akt及mTOR的磷酸化,增强PI3K/Akt-mTOR信号通路的活性,从而发挥少突胶质细胞及髓鞘保护作用。其次,参枝苓口服液通过下调组蛋白H3乙酰化水平、下调组蛋白H3乙酰化的MBP基因水平从而保护少突胶质细胞。再者,参枝苓口服液通过上调CL、PA、PC、PE、PG、PI、PS的含量,下调TG含量,调整脂质代谢紊乱从而保护少突胶质细胞。最后,参枝苓口服液髓鞘保护作用的物质基础则可能与肉桂酸、甘草酸、甘草苷和芍药苷这4种成分密切相关。
黄斌[10]（2020）在《头顶一颗珠对SCOP诱导AD模型大鼠认知功能障碍的影响研究》文中认为目的:探讨头顶一颗珠醇提物防治东莨菪碱（SCOP）诱导的AD模型大鼠认知记忆障碍及突触可塑性的影响及其可能的作用机制研究。方法:将60只SD大鼠分为6组:正常组、AD模型组、头顶一颗珠醇提物治疗组（低剂量组、中剂量组、高剂量组）、盐酸多奈哌齐阳性对照组（n=10）,适应性喂养一周后,头顶一颗珠治疗组给予等体积蒸馏水溶解后的头顶一颗珠醇提物灌胃两周,阳性对照组灌胃盐酸多奈哌齐,AD模型组及正常对照组灌胃等体积的蒸馏水。在灌胃第8天进行水迷宫训练,在水迷宫训练的同时除正常对照组腹腔注射生理盐水其余各组均注射东莨菪碱2 mg/kg,注射半小时后进行水迷宫训练,灌胃第14天即腹腔注射治疗的第7天开始进行水迷宫测试,观察大鼠的空间学习记忆能力。行为学测试后进行灌流并取大鼠脑海马组织匀浆,用ELISA酶联免疫反应法及比色法检测大鼠脑海马组织胆碱能系统酶活性情况,免疫印迹实验检测突触相关蛋白表达水平;运用尼氏染色法检测大鼠脑海马CA1和CA3区尼氏体损伤情况;通过高尔基染色法观察各组大鼠脑海马CA1区树突棘形态及密度变化情况。结果:1.水迷宫实验结果显示东莨菪碱模型组大鼠较正常组逃避潜伏期延长且穿越平台次数明显减少,而头顶一颗珠用药组能够缩短其逃避潜伏期,增加穿越求生平台的次数,说明头顶一颗珠醇提物能改善AD模型大鼠的认知功能;2.ELISA结果显示头顶一颗珠醇提物可降低AD模型大鼠脑海马乙酰胆碱酯酶活性的表达;比色法结果显示头顶一颗珠醇提物可升高乙酰胆碱转移酶活性;3.免疫印迹实验显示头顶一颗珠用药组大鼠脑海马组织中Synapsin-1、Synaptophysin、NMDA等突触蛋白及突触相关激酶表达水平均增高,并对药物具有剂量依赖性;4.尼氏染色结果表明头顶一颗珠醇提物可增加海马尼氏体数量,促进神经元修复,且具有剂量依赖性;5.高尔基染色结果显示头顶一颗珠醇提物可增加AD模型大鼠脑海马树突棘密度及复杂性。结论:头顶一颗珠醇提物可有效改善东莨菪碱诱导的AD模型大鼠空间学习记忆能力,其可能机制是通过抑制脑海马乙酰胆碱酯酶活性,提高乙酰胆碱转移酶活性调节胆碱能系统,同时能够提高AD模型大鼠脑海马组织中突触蛋白水平,促进神经元及突触发育并增加树突棘密度。
二、老年痴呆的早期信号（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、老年痴呆的早期信号（论文提纲范文）
（1）基于古今医案的痴呆中医因机证治规律研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 痴呆古代文献梳理 |
| 一、病名溯源 |
| (一)痴呆释义 |
| (二)痴呆别名 |
| (三)痴呆内涵 |
| 二、病因病机 |
| (一)痴呆病因 |
| (二)痴呆病机 |
| (三)痴呆病位 |
| 三、治疗沿革 |
| (一)针灸疗法 |
| (二)中药疗法 |
| 四、小结 |
| 第二部分 痴呆古今医案研究 |
| 一、研究目的 |
| 二、研究内容 |
| (一)研究对象 |
| (二)选案标准 |
| 三、研究方法 |
| (一)规范化处理 |
| (二)建立数据库 |
| (三)统计分析方法 |
| 四、研究结果 |
| (一)医案梳理 |
| (二)数据结果 |
| 五、结果分析 |
| (一)医案一般情况分析 |
| (二)因机证治规律分析 |
| 六、小结 |
| 第三部分 近10年痴呆(阿尔茨海默病)中医研究的文献计量学分析 |
| 一、资料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、小结 |
| 第四部分 痴呆(阿尔茨海默病)的中西医研究进展 |
| 一、阿尔茨海默病的西医学研究进展 |
| (一)流行病学调查 |
| (二)发病机制 |
| (三)风险因素 |
| (四)临床表现及诊断 |
| (五)治疗现状 |
| 二、阿尔茨海默病的中医学研究进展 |
| (一)文献记载 |
| (二)病因病机 |
| (三)症状证型 |
| (四)治疗现状 |
| 三、小结 |
| 第五部分 讨论 |
| 一、病因病机 |
| 二、症状证型 |
| 三、类证鉴别 |
| 四、治则治法 |
| 五、治疗方法 |
| 六、各时期杰出医家思想 |
| 七、中医药治疗痴呆的现状 |
| 不足与展望 |
| 结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 附录1 医案来源 |
| 附录2 证素表 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表论文情况 |
| 个人简历 |
（2）解毒益智方对阿尔茨海默病双转基因小鼠行为学及大脑皮层内β-淀粉样蛋白沉积及BACE1表达影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 综述一 AD的病因病机及治疗进展 |
| 1 中医学对痴呆的系统认识及研究进展 |
| 1.1 中医学对痴呆病名由来及发展的认识 |
| 1.2 中医学对痴呆病因病机的古代认识 |
| 1.3 中医学对痴呆辨证论治及相关研究的认识 |
| 1.4 中医学对痴呆治疗的古今认识 |
| 综述二 西医学对AD的发病机制及治疗进展研究 |
| 1 现代医学对AD的认识及研究进展 |
| 1.1 AD的概述及流行病学 |
| 1.2 现代医学对AD发病因素的认识及研究 |
| 1.3 现代医学对AD发病相关机制的认识 |
| 2 现代医学对AD治疗的认识 |
| 2.1 乙酰胆碱酯酶抑制剂(AchEIs) |
| 2.2 兴奋性氨基酸受体拮抗剂 |
| 2.3 甘露特纳胶囊 |
| 2.4 其他非药物治疗 |
| 3 问题与展望 |
| 综述三 Aβ在脑内异常沉积的机制 |
| 1.Aβ的产生、分布与清除、传递与运输的研究进展 |
| 1.1 Aβ的产生 |
| 2 Aβ的清除 |
| 2.1 细胞的清除作用 |
| 2.2 Aβ被降解酶的清除作用 |
| 2.3 中枢Aβ的清除途径 |
| 2.4 血液成分介导的Aβ清除 |
| 综述四 解毒益智方在阿尔茨海默病中的应用 |
| 1 解毒益智方的创立 |
| 1.1 脑髓理论 |
| 1.2 髓虚毒损 |
| 1.3 补肾益髓,活血化痰解毒法 |
| 2 解毒益智方通过调节SIRT1/AMPK通路抑制BACE1表达改善Aβ的沉积 |
| 3 解毒益智方对阿尔茨海默病的临床应用 |
| 实验研究 |
| 第一章 CCP对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤保护性的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠行为学的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠脑内Aβ水平变化的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠脑内BACE1表达的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 附录1 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（3）黄连解毒汤治疗阿尔茨海默病的临床观察及实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 研究概况 |
| 1.现代医学对AD的认识 |
| 1.1 AD的临床诊断 |
| 1.2 AD发病机制的研究进展 |
| 1.3 AD的临床药物治疗与新药研发 |
| 2.中医学对AD的认识 |
| 2.1 AD的中医病因病机 |
| 2.2 AD的毒损脑络理论 |
| 2.3 AD的中药治疗方案 |
| 3.黄连解毒汤治疗AD |
| 3.1 黄连解毒汤对AD的临床疗效 |
| 3.2 黄连解毒汤治疗AD的可能性机制 |
| 第二部分 黄连解毒汤治疗AD的临床观察 |
| 1.临床资料 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 剔除标准 |
| 1.6 脱落标准 |
| 1.7 中止试验标准 |
| 2.方法 |
| 2.1 治疗方案 |
| 2.2 观察方法和评价指标 |
| 2.3 统计学方法 |
| 3.结果 |
| 3.1 患者招募完成情况 |
| 3.2 基线资料 |
| 3.3 两组各时间点疗效指标比较 |
| 3.4 两组疗效的维持效应 |
| 3.5 中医证候要素与认知功能、日常生活活动能力、生活质量的相关性 |
| 3.6 黄连解毒汤对中医证候的影响 |
| 3.7 安全性观察 |
| 3.8 依从性观察 |
| 4.讨论 |
| 4.1 黄连解毒汤治疗AD的临床依据 |
| 4.2 黄连解毒汤的临床疗效分析 |
| 4.3 中医证候与整体认知功能、日常生活活动能力、生活质量的相关性 |
| 4.4 黄连解毒汤对AD患者的中医证候的影响 |
| 4.5 黄连解毒汤的安全性评价及依从性评价 |
| 5.小结 |
| 第三部分 黄连解毒汤干预AD模型小鼠的实验研究 |
| 实验一 黄连解毒汤对AD模型小鼠学习记忆能力的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 实验动物及饲养环境 |
| 1.2 实验主要药物 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.5 统计方法 |
| 2.实验结果 |
| 2.1 定位航行实验结果 |
| 2.2 空间探索实验结果 |
| 3.讨论 |
| 3.1 动物模型与水迷宫检测选择依据 |
| 3.2 黄连解毒汤对Tau/APP/PS1三转基因小鼠学习记忆的影响 |
| 4.小结 |
| 实验二 黄连解毒汤对AD模型小鼠海马组织Aβ及相关炎性因子表达的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 实验主要仪器 |
| 1.2 实验主要试剂 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 统计方法 |
| 2.实验结果 |
| 2.1 黄连解毒汤对AD小鼠海马组织Aβ1-40及Aβ1-42 水平的影响 |
| 2.2 黄连解毒汤对AD小鼠海马组织IL-1β、IL-18表达的影响 |
| 3.讨论 |
| 3.1 黄连解毒汤对AD小鼠海马组织Aβ水平的影响 |
| 3.2 黄连解毒汤对AD小鼠海马组织IL-1β、IL-18 的影响 |
| 4.小结 |
| 实验三 黄连解毒汤对AD模型小鼠海马组织形态学及小胶质细胞活化情况的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 主要实验仪器 |
| 1.2 主要实验试剂 |
| 1.3 实验动物、分组、干预方法 |
| 1.4 标本制备 |
| 1.5 苏木素-伊红(HE)染色的主要操作步骤 |
| 1.6 免疫组化(IHC)方法的主要操作步骤 |
| 1.7 统计分析方法 |
| 2.实验结果 |
| 2.1 HE染色观察五组小鼠海马CA1区组织形态 |
| 2.2 免疫组化观察五组小鼠海马CA1区小胶质细胞活化情况 |
| 3.讨论 |
| 3.1 黄连解毒汤对AD小鼠海马组织形态的保护作用 |
| 3.2 黄连解毒汤对AD小鼠海马小胶质细胞活化的调节作用 |
| 4.小结 |
| 实验四 黄连解毒汤对AD模型小鼠海马NLRP3 炎性小体相关蛋白及mRNA表达的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 主要仪器与设备 |
| 1.2 主要实验试剂 |
| 1.3 实验动物、分组、干预方法 |
| 1.4 标本制备 |
| 1.5 指标检测 |
| 1.6 统计方法 |
| 2.实验结果 |
| 2.1 黄连解毒汤对AD小鼠海马组织NLRP3、ASC、Pro-caspase-1、Caspase-1 p20蛋白表达的影响 |
| 2.2 黄连解毒汤对AD小鼠海马组织NLRP3、ASC、Caspase-1mRNA表达的影响 |
| 3.讨论 |
| 3.1 NLRP3/ASC/Caspase-1在AD病理机制中的作用 |
| 3.2 黄连解毒汤对Tau/APP/PS1小鼠海马NLRP3炎性小体相关蛋白及mRNA表达的影响 |
| 4.小结 |
| 第四部分 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 小胶质细胞与NLRP3炎性小体在阿尔茨海默病病理过程中的作用 |
| 参考文献 |
| 在校期间公开发表的学术论文及科研成果 |
| 致谢 |
（4）针灸对不同月龄SAMP8小鼠行为学及海马齿状回神经元新生障碍的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词对照表 |
| 前言 |
| 实验一 针灸对不同月龄SAMP8小鼠行为学的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验器材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 干预方法 |
| 2.3 行为学检测 |
| 2.4 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组小鼠一般情况观察 |
| 3.2 各组小鼠行为学检测 |
| 4.讨论 |
| 实验二 针灸对不同月龄SAMP8小鼠海马齿状回Aβ_(1-42)沉积、Tau蛋白水平及神经元数目的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验器材 |
| 1.3 实验试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 干预方法 |
| 2.3 标本采集与检测 |
| 2.4 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 各月龄组小鼠海马齿状回Aβ_(1-42)蛋白表达比较 |
| 3.2 各月龄组小鼠海马齿状回Neu N表达比较 |
| 3.3 各月龄组小鼠海马内Tau蛋白水平的比较 |
| 4.讨论 |
| 实验三 针灸对SAMP8小鼠海马齿状回神经元新生的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验器材 |
| 1.3 实验试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 干预方法 |
| 2.3 标本采集与检测 |
| 2.4 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 免疫荧光双标法检测各组小鼠海马齿状回PCNA/NeuN阳性细胞表达 |
| 3.2 免疫荧光双标法检测各组小鼠海马齿状回PCNA/DCX阳性细胞表达 |
| 3.3 各组小鼠海马齿状回神经元新生功能比较 |
| 4 讨论 |
| 讨论 |
| 1 祖国医学对AD的认识 |
| 2 关于AD的主要发病机制学说 |
| 3 AD海马神经元新生障碍机制学说 |
| 4 针灸对AD海马神经元新生障碍的影响 |
| 5 本实验存在的问题及展望 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录一 文献综述 促进神经元新生治疗阿尔茨海默病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录二 攻读硕士期间已发表论文及参与课题 |
| 致谢 |
（5）痰瘀同治 清热解毒法防治AD的理论探讨及其调控HSP70介导的神经保护机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 理论探讨 |
| 1.中医学对AD的基本认识 |
| 2.古籍文献中的AD病名浅析 |
| 2.1 侧重症状描述 |
| 2.2 次症掩盖主症 |
| 2.3 兼夹其它疾病 |
| 2.4 名为“痴呆”并非AD |
| 2.5 “痴呆”即指AD相关病证 |
| 3.痰瘀同治、清热解毒法防治AD的理论探讨 |
| 3.1 脏腑虚衰为AD之始 |
| 3.2 内生痰瘀为AD之标 |
| 3.3 化热酿毒为AD之变 |
| 3.4 损伤脑络为AD之末 |
| 4.益智温胆汤源流浅析 |
| 5.黄连解毒汤源流浅析 |
| 6.HSP70 与AD的关系 |
| 6.1 HSP70 功能概述 |
| 6.2 热休克蛋白家族在AD中的作用 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 AD与痰、瘀病证结合动物模型的建立与评价 |
| 1.实验动物及材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验器材及试剂 |
| 2.病证结合动物模型的建立 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 实验动物造模 |
| 3.模型评价 |
| 3.1 Morris水迷宫法检测各组小鼠行为学变化 |
| 3.2 各组小鼠舌色客观变化 |
| 3.3 各组小鼠血液流变学变化 |
| 3.4 各组小鼠血脂变化 |
| 3.5 Western Blot法检测各组小鼠海马组织相关蛋白含量 |
| 4.统计学方法 |
| 5.实验结果 |
| 5.1 Morris水迷宫实验结果 |
| 5.2 舌色客观化比较实验结果 |
| 5.3 血液流变学检测实验结果 |
| 5.4 血脂检测实验结果 |
| 5.5 Western Blot实验结果 |
| 实验二 痰瘀同治、清热解毒法对AD-痰瘀模型小鼠行为学的影响 |
| 1.实验动物及材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验器材 |
| 1.3 实验用药及其制备 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 实验动物造模 |
| 2.3 实验动物给药 |
| 3.行为学检测 |
| 3.1 Morris水迷宫实验 |
| 3.2 跳台实验 |
| 4.统计学方法 |
| 5.实验结果 |
| 5.1 Morris水迷宫实验结果 |
| 5.2 跳台实验结果 |
| 实验三 痰瘀同治、清热解毒法对AD-痰瘀模型小鼠病理改变的影响 |
| 1.实验动物及材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验器材 |
| 1.3 实验试剂 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 刚果红染色法检测小鼠海马区SP |
| 2.2 甘氨酸银浸镀法检测小鼠海马区NFTs |
| 2.3 透射电镜法观察小鼠海马神经元超微结构 |
| 2.4 Western Blot法检测小鼠海马区AD相关蛋白含量 |
| 3.统计学方法 |
| 4.实验结果 |
| 4.1 刚果红染色实验结果 |
| 4.2 甘氨酸银浸镀实验结果 |
| 4.3 透射电镜实验结果 |
| 4.4 Western Blot实验结果 |
| 实验四 痰瘀同治、清热解毒法对AD-痰瘀模型小鼠脑神经炎症的影响 |
| 1.实验动物及材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验器材 |
| 1.3 实验试剂 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 免疫荧光标记法检测小鼠相关蛋白表达及共定位关系 |
| 2.2 Western Blot法检测小鼠海马区相关蛋白含量 |
| 2.3 高尔基染色法观察小鼠海马神经元树突棘 |
| 3.统计学方法 |
| 4.实验结果 |
| 4.1 免疫荧光实验结果 |
| 4.2 Western Blot实验结果 |
| 4.3 高尔基染色实验结果 |
| 讨论 |
| 1.病证结合动物模型建立的思路与意义 |
| 2.痰瘀化热酿毒是AD的重要病理过程 |
| 3.痰瘀同治、清热解毒法可改善AD痰瘀模型小鼠的学习记忆能力 |
| 4.痰瘀同治、清热解毒法能有效改善AD痰瘀模型小鼠的病理形态 |
| 5.痰瘀同治、清热解毒法可调控HSP70 介导的神经保护机制 |
| 结语 |
| 1.结论 |
| 2.创新点 |
| 3.研究展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 AD研究进展及热休克蛋白在AD中的作用 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间科研经历、学术成果及获得奖励情况 |
| 致谢 |
（6）热敏灸对AD模型大鼠Aβ转运代谢功能的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 祖国医学对阿尔茨海默病的研究现状 |
| 1.阿尔茨海默病的概念 |
| 2.阿尔茨海默病的病因病机 |
| 3.阿尔茨海默病的针灸治疗 |
| 第二节 现代医学对阿尔茨海默病的研究现状 |
| 1.阿尔茨海默病的概念 |
| 2.阿尔茨海默病的病因及致病机理 |
| 3.阿尔茨海默病的发病机制 |
| 4.阿尔茨海默病的西医治疗 |
| 第三节 热敏灸研究现状 |
| 1.热敏灸理论研究现状 |
| 2.热敏灸基础研究现状 |
| 3.热敏灸临床研究现状 |
| 参考文献 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 水迷宫测定造模研究 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.水迷宫测定AD大鼠造模结果 |
| 第二节 热敏灸对Aβ_(1-42)诱导的AD模型大鼠空间学习记忆能力的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果与分析 |
| 第三节 热敏灸对AD模型大鼠海马区形态学的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果与分析 |
| 3.小结 |
| 第四节 热敏灸对AD模型大鼠脑组织中α-分泌酶、β-分泌酶、γ-分泌酶含量的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果与分析 |
| 3.小结 |
| 第五节 热敏灸对AD模型大鼠脑海马组织中Aβ代谢及转运相关蛋白表达的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果与分析 |
| 3.小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 分析与讨论 |
| 1 动物模型的选择依据 |
| 2 治疗方法的选择依据 |
| 3 艾灸时间的选择依据 |
| 4 穴位的选择依据 |
| 5 热敏灸干预AD模型大鼠Aβ转运代谢的机制探讨 |
| 6 不同组别之间治疗结果的差异及分析 |
| 7 影响实验的因素及其控制方法 |
| 8 本研究的创新性 |
| 9 研究不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
（7）类脑计算模型在智能医疗中的研究与应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究背景及意义 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.3 本文贡献及章节安排 |
| 第二章 基于协同视觉显着性和循环神经网络的老人跌倒检测算法 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 基于图像间和图像内显着性能量传播的协同显着性检测 |
| 2.2.1 预处理 |
| 2.2.2 图像间显着性能量传播 |
| 2.2.3 图像内显着性能量传播 |
| 2.2.4 协同显着性融合 |
| 2.3 基于协同显着性和循环卷积网络的跌倒检测 |
| 2.3.1 方法总览 |
| 2.3.2 循环卷积网络 |
| 2.3.3 基于协同显着性的人行为区域增强 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 基于图像间和图像内显着性能量传播的协同显着性检测 |
| 2.4.2 基于协同显着性和循环卷积网络的跌倒检测 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 基于脉冲神经网络的盲人视觉假体避障算法 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 提出的方法 |
| 3.2.1 时空特征提取 |
| 3.2.2 数据编码 |
| 3.2.3 Neu Cube模型初始化 |
| 3.2.4 无监督神经池训练 |
| 3.2.5 全监督分类器训练 |
| 3.3 实验设计和结果 |
| 3.3.1 实验设计 |
| 3.3.2 NeuCube可视化 |
| 3.3.3 所提出方法中不同步骤的影响 |
| 3.3.4 参数优化 |
| 3.3.5 与其他计算智能方法的对比 |
| 3.3.6 计算效率 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 基于多通道多尺度深度卷积网络的老年痴呆症检测算法 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 提出的方法 |
| 4.2.1 应用于不同脑组织上的多通道网络 |
| 4.2.2 对每种脑组织应用的多尺度网络 |
| 4.2.3 两层级的特征融合 |
| 4.2.4 特征选择 |
| 4.2.5 算法实施细节 |
| 4.3 实验设计和结果 |
| 4.3.1 实验设置和数据集 |
| 4.3.2 本方法不同训练阶段的表现 |
| 4.3.3 通过选择不同脑组织的结合决定输入通道数量 |
| 4.3.4 所提出方法的表现 |
| 4.3.5 不同网络和参数设置对结果的影响 |
| 4.3.6 与主流方法的比较 |
| 4.3.7 运行时间 |
| 4.3.8 对实验结果的讨论 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 基于成对生成对抗网络和深度半监督学习的脑胶质瘤分类算法 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 基于成对生成对抗网络的脑胶质瘤分类 |
| 5.2.1 基于成对生成对抗网络的数据扩充 |
| 5.2.2 用于三维MRI脑图像诊断的后处理 |
| 5.2.3 算法实施细节 |
| 5.3 基于深度半监督学习的脑胶质瘤分类 |
| 5.3.1 基于图的深度半监督学习 |
| 5.3.2 算法实施细节 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 基于成对生成对抗网络的脑胶质瘤分类 |
| 5.4.2 基于深度半监督学习的脑胶质瘤分类 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 总结与展望 |
| 6.1 全文总结 |
| 6.2 未来工作展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间已发表或录用的论文 |
| 攻读博士学位期间参与的项目 |
（8）Zn2+对阿尔茨海默症的损伤机制及干预药物的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 引言 |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 AD的重要性 |
| 1.2 AD研究概况的可视化分析 |
| 1.2.1 Citespace简介 |
| 1.2.2 数据收集 |
| 1.2.3 关键词共现分析 |
| 1.2.4 研究热点和前沿趋势分析 |
| 1.2.5 核心作者共现图谱分析 |
| 1.2.6 高产研究机构共现图谱分析 |
| 1.3 阿尔茨海默症的发病机制 |
| 1.3.1 淀粉样蛋白级联假说 |
| 1.3.2 Tau蛋白异常磷酸化假说 |
| 1.3.3 金属离子代谢紊乱假说 |
| 1.3.4突触损伤与AD |
| 1.3.5 线粒体功能障碍与AD |
| 1.3.6 自噬障碍与AD |
| 1.4 天然产物(中药)对阿尔茨海默症的防治作用 |
| 1.4.1 中药干预阿尔茨海默症研究的可视化分析 |
| 1.4.2 本论文选用的几种代表性天然产物简介 |
| 1.5 选题的意义和目的 |
| 第2章 金属离子与tau-R3的作用机制研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料 |
| 2.3 方法 |
| 2.3.1 等温滴定量热法 |
| 2.3.2 紫外分光光度法 |
| 2.3.3 硫磺素T荧光法 |
| 2.3.4 圆二色谱法 |
| 2.3.5 原子力显微镜观察tau-R3的聚集形态 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 金属离子与tau-R3的结合 |
| 2.4.2 金属离子对tau-R3聚集的影响 |
| 2.4.3 金属离子对tau-R3二级结构的影响 |
| 2.4.4 原子力显微镜观察tau-R3聚集体的形态 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第3章 Zn~(2+)+R3对神经细胞的作用机制研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料 |
| 3.3 方法 |
| 3.3.1 主要试剂的配制方法 |
| 3.3.2 细胞分组及前处理过程 |
| 3.3.3 细胞系培养 |
| 3.3.4 tau-R3-FITC和Zn~(2+)+R3-FITC在N2A细胞中的定位 |
| 3.3.5 细胞器荧光探针标记 |
| 3.3.6 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法检测细胞活力 |
| 3.3.7 流式细胞术检测ROS |
| 3.3.8 原代神经元培养 |
| 3.3.9 细胞免疫荧光 |
| 3.3.10 免疫印迹试验 |
| 3.3.11 线粒体超氧化物的检测 |
| 3.3.12 线粒体耗氧量测试 |
| 3.3.13 线粒体膜电位检测 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 Zn~(2+)加剧了tau-R3对神经细胞的毒性 |
| 3.4.2 Zn~(2+)+R3在细胞中的定位 |
| 3.4.3 Zn~(2+)+R3对神经细胞tau病理的影响 |
| 3.4.4 Zn~(2+)+R3对神经细胞神经突触的影响 |
| 3.4.5 Zn~(2+)+R3对神经细胞线粒体的影响 |
| 3.4.6 Zn~(2+)+R3对神经细胞自噬的影响 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第4章 散发型AD小鼠模型的构建 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料 |
| 4.3 方法 |
| 4.3.1 小鼠分组与处理 |
| 4.3.2 药物的分组与制备 |
| 4.3.3 鼠脑立体定位注射 |
| 4.3.4 旷场实验 |
| 4.3.5 Morris水迷宫实验 |
| 4.3.6 高架十字迷宫实验 |
| 4.3.7 新物体识别实验 |
| 4.3.8 场景恐惧实验 |
| 4.3.9 血脂和血糖水平的检测 |
| 4.3.10 冰冻切片 |
| 4.3.11 神经纤维缠结染色 |
| 4.3.12 尼氏染色 |
| 4.3.13 透射电镜 |
| 4.3.14 小鼠脑组织ATP的检测 |
| 4.4 结果 |
| 4.4.1 Zn~(2+)+R3对小鼠行为学认知能力的影响 |
| 4.4.2 生化指标的检测 |
| 4.4.3 Zn~(2+)+R3对小鼠脑组织tau病理的影响 |
| 4.4.4 Zn~(2+)+R3对小鼠脑组织神经突触的影响 |
| 4.4.5 Zn~(2+)+R3对小鼠脑组织线粒体的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第5章 中药复方早期干预AD的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料 |
| 5.2.1 小鼠模型与药物 |
| 5.2.2 实验试剂 |
| 5.2.3 实验仪器 |
| 5.3 方法 |
| 5.3.1 小鼠分组与处理 |
| 5.3.2 免疫荧光检测小鼠脑内Aβ的表达与分布 |
| 5.4 结果 |
| 5.4.1 旷场实验检测小鼠的自发活动与探索能力 |
| 5.4.2 小鼠血清生化指标的检测 |
| 5.4.3 小鼠脑内Aβ病理相关指标的检测 |
| 5.4.4 小鼠脑内tau病理相关指标的检测 |
| 5.4.5 小鼠脑内突触病理相关指标的检测 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 第6章 总结与展望 |
| 6.1 总结 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
（9）基于髓鞘及少突胶质细胞损伤探讨参枝苓口服液对AD的保护作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 综述一“从心论治”阿尔茨海默病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 PI3K/Akt及其相关信号通路在AD中研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 参枝苓口服液对APP~(swe)/PS1~(dE9)双转基因AD模型小鼠认知行为及髓鞘的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 参枝苓口服液对Aβ_(42)致少突胶质细胞OLN-93损伤的保护作用机制 |
| 参考文献 |
| 实验一 UHPLC-MRM-MS/MS方法检测参枝苓口服液含药血清主要化学成分 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 Aβ_(42)损伤少突胶质细胞OLN-93拟AD体外模型的建立 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 参枝苓口服液含药血清及多奈哌齐对OLN-93细胞安全剂量及有效剂量筛选 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 参枝苓口服液含药血清对Aβ_(42)损伤OLN-93细胞髓鞘相关蛋白及PI3K/Akt-mTOR通路的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验五 参枝苓口服液对Aβ_(42)损伤少突胶质细胞OLN-93的乙酰化组蛋白与MBP基因相互作用影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验六 参枝苓口服液对Aβ_(42)损伤少突胶质细胞OLN-93脂质代谢的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 存在问题和不足 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（10）头顶一颗珠对SCOP诱导AD模型大鼠认知功能障碍的影响研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果、参加学术会议及获奖 |
| 致谢 |
四、老年痴呆的早期信号（论文参考文献）
- [1]基于古今医案的痴呆中医因机证治规律研究[D]. 宋晓晨. 黑龙江中医药大学, 2021(01)
- [2]解毒益智方对阿尔茨海默病双转基因小鼠行为学及大脑皮层内β-淀粉样蛋白沉积及BACE1表达影响的研究[D]. 朱晓婷. 长春中医药大学, 2021(01)
- [3]黄连解毒汤治疗阿尔茨海默病的临床观察及实验研究[D]. 高炎. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [4]针灸对不同月龄SAMP8小鼠行为学及海马齿状回神经元新生障碍的影响[D]. 刘欣媛. 湖北中医药大学, 2021
- [5]痰瘀同治 清热解毒法防治AD的理论探讨及其调控HSP70介导的神经保护机制研究[D]. 谭爱华. 湖北中医药大学, 2021
- [6]热敏灸对AD模型大鼠Aβ转运代谢功能的研究[D]. 岳瑞珍. 江西中医药大学, 2021(01)
- [7]类脑计算模型在智能医疗中的研究与应用[D]. 葛辰杰. 上海交通大学, 2020(01)
- [8]Zn2+对阿尔茨海默症的损伤机制及干预药物的研究[D]. 李雪霞. 中国科学技术大学, 2020(01)
- [9]基于髓鞘及少突胶质细胞损伤探讨参枝苓口服液对AD的保护作用[D]. 刘珍洪. 北京中医药大学, 2020(04)
- [10]头顶一颗珠对SCOP诱导AD模型大鼠认知功能障碍的影响研究[D]. 黄斌. 湖北民族大学, 2020(12)