一、淫羊藿甙与葛根素对血管平滑肌细胞凋亡影响的比较研究(论文文献综述)
李藤藤[1](2021)在《ICA通过调控miR-672-5p/AKT3/NF-κB信号通路抑制ox-LDL诱导的RAW264.7炎症反应》文中研究表明随着生活水平提高和生活方式的改变,动脉粥样硬化(AS)等心血管疾病病发率呈现逐年上升的趋势。AS是一种涉及平滑肌细胞、内皮细胞和巨噬细胞等多种细胞的慢性炎症性疾病,并伴随着一系列的并发症,给人们的生活带来诸多的困扰。淫羊藿是我国一种传统的药用植物,主要化学成分有黄酮、木脂素、苯酚苷、生物碱、多糖、挥发油、蒽醌、鞣质、甾醇、倍半萜等。淫羊藿苷(ICA)是淫羊藿的主要化学成分,是一种黄酮类的化合物,具有抗炎、抗肿瘤、抗衰老、抗骨质疏松、抗心肌缺血缺氧、促进免疫调节及促进生殖内分泌功能等多种药理作用。ICA具有抗AS的作用,目前多集中于ICA对平滑肌细胞增殖迁移、内皮细胞损伤等的研究,对巨噬细胞炎症反应的相关研究比较少。微小RNA(microRNA,miRNA)是一种短链非编码RNA,miRNA在细胞的增殖、分化,生物体的生长、发育及疾病治疗中发挥着越来越重要的作用。研究表明,miRNAs能够成为心血管疾病的治疗靶点、诊断标志。因此为我们寻找治疗、诊断AS提供了新思路和方法。本课题组前期实验研究已证实ICA具有抗AS的作用,并且构建了 ApoE-/-小鼠胸主动脉miRNA表达谱,但是有关ICA发挥抗AS的具体分子机制尚需进一步探索和研究。本研究从miRNA芯片入手,利用生物信息学分析构建了miR-672-5p/AKT3/NF-κB信号通路,并以该信号通路为切入点研究ICA对ox-LDL诱导的RAW264.7炎症反应及分子机制。本研究分为3部分:(1)ICA 抗 AS miRNAs 芯片生物信息学分析及 miR-672-5p/AKT3/NF-κB信号通路构建首先比较ApoE-/-小鼠胸主动脉MOD组/CON组miRNA芯片结果,将差异基因的条件设定为p<0.05且|log2 fold change|>1.32,筛选出差异表达的miRNAs共16个。为了寻找RAW264.7中ICA发挥抗AS的关键miRNAs,随机挑选6个miRNAs,利用qPCR技术进行miRNAs表达的验证并确定miR-672-5p作为研究对象。通过TargetScan和DAVID数据库对其靶基因进行预测、GO分析及KEGG分析,我们发现miR-672-5p与细胞增殖、凋亡,蛋白质的转录与翻译等生物学过程密切相关,在miR-672-5p富集的信号通路中PI3K-AKT通路p值较小、富集到其中的靶基因较多,同时AKT3 mRNA的3’ UTR处与miR-672-5p存在结合位点且靶向性较好,因此我们构建出miR-672-5p/AKT3/NF-κB信号通路。(2)ICA对ox-LDL诱导的RAW264.7炎症反应的作用及机制研究以ox-LDL诱导RAW264.7构建巨噬细胞源性泡沫细胞,同时加入ICA进行干预,通过 CCK-8、油红 O 染色、ELISA、qPCR 及 Western Blot 探讨 ICA 对 ox-LDL诱导RAW264.7炎症反应的作用,结果发现,ox-LDL可以降低RAW264.7细胞活力,诱导RAW264.7的泡沫化,增加培养上清IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。ICA可以逆转上述反应的变化。说明ICA可以抑制ox-LDL诱导RAW264.7炎症反应。进一步通过qPCR和Western Blot检测miR-672-5p/AKT3/NF-κB信号通路相关基因及蛋白表达,结果表明,ox-LDL可以降低RAW264.7中miR-672-5p的表达,提高AKT3 mRNA及蛋白的表达,并且上调IKK、IκBα及p65的磷酸化水平,而ICA可以逆转上述基因和蛋白表达的改变。说明ICA可能通过调控miR-672-5p/AKT3/NF-κB信号通路,从而抑制ox-LDL诱导RAW264.7的炎症反应。(3)miR-672-5p在ox-LDL诱导RAW264.7炎症反应中的作用构建过表达/沉默miR-672-5p的RAW264.7,利用油红O染色、ELISA、qPCR及Western Blot技术探讨miR-672-5p在ox-LDL诱导RAW264.7炎症反应的作用。结果发现,ox-LDL可以诱导RAW264.7的泡沫化,增加RAW264.7培养上清IL-1β、IL-6 及 TNF-α 的含量,降低 RAW264.7 miR-672-5p 的表达,提高 AKT3 mRNA及蛋白的表达,并且上调IKK、IκBα和p65的磷酸化水平。过表达miR-672-5p可以逆转ox-LDL的作用,而沉默miR-672-5p则增强ox-LDL的作用。说明miR-672-5p通过调控AKT3,介导NF-κB信号通路,从而抑制ox-LDL诱导RAW264.7炎症反应。综上所述,本实验证明ICA可能通过调控miR-672-5p/AKT3/NF-κB信号通路,抑制ox-LDL诱导的RAW264.7炎症反应,进而治疗AS。miR-672-5p是ICA治疗AS的分子靶点。
赵院院,汪引芳,张鹏[2](2019)在《中药调节平滑肌细胞内质网应激防治动脉粥样硬化研究进展》文中研究说明血管平滑肌细胞(VSMC)在病理因素诱导下异常增殖、迁移、表型改变是动脉粥样硬化(AS)发病的关键环节。与内质网应激(ERS)相关的凋亡途径可能导致VSMC增殖、凋亡失衡,从而在AS发生和发展中起到重要作用。中药干预调节VSMC异常增殖和凋亡在AS的预防和治疗中发挥重要作用。综述近年来中药单体和复方调节VSMS ERS从而防治AS的部分研究进展,以期进一步阐释与总结中医中药防治AS的作用特点与可能机制。
薛瑾[3](2014)在《基于特异性敲除技术的葛根素与葛根雌激素样和舒血管作用的相关性研究》文中指出中药的化学成分与其功效之间相关性的研究是中药研究的重点内容之一。对于绝大多数中药,选择其中典型的单体成分(即代表性成分)作为切入点深入研究,是当前中医药领域采用的主要研究策略之一,但这种方法忽视了中药发挥独特疗效的整体性:即所单体成分的“代表性”如何,是否与中药功效主治相关?因此需要探索完善、科学的方法和技术平台进行药效组分分析,阐明代表性成分与中药功效的相关性。中药小分子特异性敲除法是研究中药代表性成分与中药功效间相关性的新的技术方法。通过对比研究,分析代表性成分在整体药味中敲除前后药效的变化,揭示该成分与整体药效的相关性。葛根是一种古老而传统的常用中药,葛根素是葛根中具有代表性的异黄酮类化合物,也是葛根质量控制的主要成分。研究发现,异黄酮类化合物作为植物雌激素,能通过调节NO分泌保护心血管。葛根中葛根素等异黄酮类化合物具有不同程度的弱雌激素的作用和扩血管效应,是治疗心血管系统疾病的有效成分。本论文以葛根为研究对象,利用葛根素单抗建立特异性敲除葛根素的技术方法,获得特异性敲除葛根素的葛根水提物,借助与葛根传统主治功效和现代药理作用相对应的离体组织和细胞模型,以药效与生物学指标相结合的评价标准,探索葛根的代表成分葛根素在葛根雌激素样和血管舒张功效的相关性及机理。这不仅有利于深入地开展药理研究,还为葛根素作为葛根药材的质量控制等研究指标成分提供明确依据,奠定了利用特异性敲除法研究中药材指标成分与其功效的相关性研究的实验基础,从而使这一新的技术手段得以更广泛的利用。1敲除法探讨葛根素在葛根雌激素样活性中的作用[目的]比较研究葛根提取液(radix puerariae extract, RPE)、葛根素(puerarin, PRR)以及敲除葛根素的葛根提取液(PRR knock-out RPE, RRR-KO-RPE)对雌激素受体阳性人乳腺癌T47D细胞增殖、细胞周期及ERα, ERβ蛋白表达的影响,探讨葛根素在葛根雌激素样活性药效中的相关性。[方法]以T47D细胞为模板,采用MTT方法检测药物及ICI182,780干预下细胞增殖变化,应用流式细胞仪测定细胞周期变化,采用western blot法T47D细胞ERα、ERβ蛋白表达特点。[结果]1RPE、PRR和PRR-KO-RPE均具有与雌激素类似的促细胞增殖的作用,且呈现出一定的剂量-时间-效应关系。PRR敲除后细胞增殖显着降低。药物作用48h,ICI182,780对RPE增殖抑制率最强,敲除PRR后细胞抑制率降低。2三组药物均能降低细胞Go/G1期比例,增加S期细胞比例。RPE和PRR能不同程度提高细胞G2/M期的比例。PRR敲除后,G2/M期的比例及细胞增殖指数显着降低。3各组均能提高ERα、ERβ的相对表达水平。PRR敲除后,ER α表达无显着变化,ER β表达减低。ICI182,780对各药物ERα、ERβ的表达均有拮抗作用,PRR敲除后,细胞表达ER α的拮抗程度无明显改变。[结论]口葛根素在葛根雌激素样活性的药效中具有一定的相关性,其机理与细胞增殖及ERβ表达有关。2敲除法探讨葛根素在葛根舒血管药效中的作用[目的]比较研究RPE、PRR以及PRR-KO-RPE对SD大鼠胸主动脉血管环张力的影响,探讨葛根素在葛根舒血管药效中的作用。[方法]采用大鼠胸主动脉环体外实验,观察比较RPE、PRR和PRR-KO-RPE对内皮完整及内皮去除的血管环在基础状态(2g张力)以及去甲肾上腺素(NE)预收缩状态下的作用。[结果]1累积浓度的RPE、PRR和PRR-KO-RPE在对内皮完整和去内皮的胸主动脉血管环均有一定的舒张作用,并呈剂量依赖性舒张效应。葛根素敲除后,葛根对血管环的舒张程度显着降低。2末次给药后PRR较RPE可快速达到最大舒张效应。RPE舒张血管的整体时间较PRR和PRR-KO-RPE长。[结论]口葛根素在葛根内皮依赖性舒血管药效中具有一定的相关性。3敲除法探讨葛根素在葛根的雌激素样活性与内皮依赖性舒血管药效相关性及机理[目的]初步研究葛根素在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的分布和代谢特点,比较研究RPE. PRR以及PRR-KO-RPE对HUVECs增殖、NO分泌及eNOS、ERα、ERβ蛋白表达的影响,探讨葛根素在葛根舒血管雌激素样活性与内皮依赖性舒血管药效的关系及机理。[方法]以HUVECs为模板,采用细胞免疫组化法和葛根素免疫竞争ELISA法,比较研究葛根素单体及葛根提取液中的葛根素在HUVECs中的代谢分布特点,以及PRR的代谢与NO表达分泌的关系,MTT法测定三种药物及拮抗剂作用下对HUVECs的增殖及NO分泌的作用,western blot法检测HUVECs中ERα、ERβ和eNOS的表达影响。[结果]1葛根素能特异性结合在HUVEC细胞上,胞浆及细胞核周围可能是葛根素与HUVEVs特异性结合的位置。21.0μg/mL的RPE和PRR作用30min、10.0μg/mL的RPE和PRR作用20min时,HUVECs对葛根素单体的吸收程度明显高于对葛根中相同浓度葛根素的吸收。1.0μg/mL葛根素单体对HUVECs作用10min,分泌NO的含量高于相同葛根素含量的葛根提取液,60min后葛根提取液对细胞分泌NO的含量高于葛根素。l0μg/mL的葛根素单体对HUVECs作用10min,分泌NO的含量高于相同葛根素含量的葛根提取液,40min后葛根提取液对细胞分泌NO的含量高于葛根素。3RPE对细胞的分泌NO作用显着高于PRR和PRR-KO-RPE,敲除PRR后NO分泌减少。L-NAME和ICI182,780均可抑制RPE, PRR和PRR-KO-RPE对HUVECs分泌NO的作用。敲除PRR后L-NAME和ICI182,780对HUVECs分泌NO抑制程度均减弱。4RPE、PRR和PRR-KO-RPE可以通过eNOS途径和雌激素受体途径促进NO的分泌。RPE组、PRR组和PRR-KO-RPE组均能提高ERα的相对表达水平,敲除前后拮抗剂对ERα拮抗作用无显着改变。RPE组、PRR组和PRR-KO-RPE组均能提高ERβ的相对表达水平。敲除前后ICI182,780对ERβ的拮抗作用显着降低。[结论]口葛根素在内皮细胞的分布的不均一性和代谢的差异性可能导致其不同生物效应的基础。eNOS-NO途径和ERβ-NO途径可能是葛根素在葛根促进内皮细胞NO分泌的药效相关性的机制。
赵君玫,魏晏,毕红征,马一君[4](2010)在《淫羊藿甙对家兔血管平滑肌细胞凋亡相关基因表达水平的影响》文中研究指明目的:观察葡萄糖调节蛋白基因78(GRP78)在动脉粥样硬化组织中的表达,探讨淫羊藿甙防治动脉粥样硬化的可能机制。方法:淫羊藿甙诱导培养的兔血管平滑肌细胞凋亡,组织原位杂交观察凋亡基因GRP78在兔斑块组织中的表达水平。结果:兔斑块组织原位杂交显示该基因片段在动脉粥样硬化斑块组织中表达水平增高。结论:葡萄糖调节蛋白78基因在AS细胞质中表达增高,可能是淫羊藿甙作用靶点之一,如上调该基因促进则可促进平滑肌细胞凋亡,将对动脉粥样硬化治疗产生一定作用。
董军奎,刘慧敏[5](2009)在《血管平滑肌细胞的增殖 凋亡与高血压》文中提出血管平滑肌细胞(VSMC)是构成血管壁组织结构及维持血管张力的主要细胞成分,其异常增殖和凋亡在高血压的发病中具有重要的作用。现就高血压时血管平滑肌的增殖与凋亡以及相关中药对血管平滑肌增殖与凋亡的影响作一综述。
朱晓峰[6](2009)在《淫羊藿素对MC3T3-E1Subclone14细胞分化及相关信号通路的影响》文中研究说明目的:淫羊藿素为补肾强骨中药淫羊藿的主要成分淫羊藿苷在动物体内代谢后脱去糖基的活性成分,可能是淫羊藿口服吸收后主要发挥药理活性的成分,对其研究更符合淫羊藿临床多口服给药的用药方式。目前其对成骨细胞作用机理的研究尚未见报道。本研究观察淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14前体成骨细胞株增殖、分化的影响,以及观察它对与分化相关的雌激素受体信号通路、p38MAPK信号通路、BMPs/smads信号通路的影响,明确淫羊藿素作用于成骨细胞而影响骨代谢的具体靶点,对于评价淫羊藿治疗骨质疏松等骨代谢疾病的有效性提供细胞分子学依据。方法:1.MC3T3-ElSubclone14前体成骨细胞株的培养及活性观察。2.运用MTT法检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14的细胞毒性,确定实验用的药物剂量。3.应用WST-8细胞活力方法、BrdU流式细胞仪方法检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞增殖的影响。4.应用pNPP方法检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞碱性磷酸酶活性的影响,运用双抗夹心ELISA方法检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞Ⅰ型胶原和骨钙素的影响,运用茜素红染色计数矿化结节的方法评价淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞矿化的影响。5.运用ER受体阻断剂ICI182780阻断ER受体信号后,检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原和骨钙素的影响,评价ER受体信号在淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞分化过程中的作用。6.运用p38MAPK受体阻断剂SB203580阻断p38MAPK信号后,检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原和骨钙素的影响,评价p38MAPK信号在淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞分化过程中的作用。7.实时荧光PCR检测淫羊藿素对BMP-2、4、7mRNA的表达。运用BMPs受体阻断剂Noggin阻断BMPs/Smads信号后,检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞表达碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原和骨钙素的影响,评价BMPs/Smads信号在淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞分化过程中的作用。8.Western-blot检测ER受体阻断剂ICI182780阻断ER受体信号后,淫羊藿素对p38和Smad1/5/8的蛋白磷酸化情况,评价它们和ER受体信号的关系。结果:1.MC3T3-ElSubclone14前体成骨细胞株,在具有分化条件的培养基中可以向成骨细胞分化。2.淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞毒性的检测发现,IC50浓度为100.154mol/L,10-5.93mol/L浓度以下则对细胞基本上无抑制作用,因此实验药物浓度选择10-8、10-7、10-6mol/L 0.01μM、0.1μM、1μM)为梯度浓度。3.WST-8和BrdU流式细胞仪检测发现,淫羊藿素0.01μM、0.1μM、1μM浓度组的MC3T3-ElSubclone14的细胞活力和细胞增殖指数与对照组比较,在统计学上无显着差异(P>0.05)。4.在作用48或72小时后,淫羊藿素0.01μM、0.1μM、1μM浓度组MC3T3-ElSubclone14细胞的碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原和骨钙素与对照组比较,在统计学上有显着差异(P<0.01或0.05);淫羊藿素作用10天或14天后,各组的矿化结节计数和对照组比较,在统计学上有显着差异(P<0.01)。5.运用ER受体阻断剂ICI182780阻断ER受体信号后,1μM浓度的淫羊藿素促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化的特性明显下降,和单纯应用淫羊藿素组在统计学上有显着差异(P<0.01);运用p38MAPK受体阻断剂SB203580阻断p38MAPK信号后,1μM浓度的淫羊藿素促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化的特性明显下降,和单纯应用淫羊藿素组在统计学上有显着差异(P<0.01);运用BMPs受体阻断剂Noggin阻断BMPs/Smads信号后,1μM浓度的淫羊藿素促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化的特性明显下降,和单纯应用淫羊藿素组在统计学上有显着差异(P<0.01)。6.淫羊藿素可以提高BMP-2mRNA的表达,并随着浓度的增高而增高,和对照组比较,在统计学上有明显差异(P<0.01或0.05),1μM浓度的淫羊藿素可以提高BMP-4mRNA的表达(P<0.05),但对BMP-7mRNA无作用(P>0.01)。7.Western-blot检测发现运用ER受体阻断剂ICI182780阻断ER受体信号后,p38和Smad1/5/8的磷酸化明显减弱。结论:1.一定浓度(0.01μM、0.1μM、1μM)的ICT对MC3T3-ElSubclone14细胞增殖无明显促进作用。2.一定浓度(0.01μM、0.1μM、1μM)的ICT可以促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化,促进其矿化。3.ICT促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化和ER受体信号通路、p38MAPK信号通路、BMPs/Smads信号通路密切相关。4.在ICT促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化的过程中,ER受体信号通路在p38MAPK信号通路和BMPs/Smads信号通路的上游。5.实验结果提示ICT在MC3T3-ElSubclone14细胞分化过程中所显示的主要作用可能和它的类雌激素样活性有关。
张小玲[7](2009)在《葛根素与松针挥发油配伍对大鼠离体胸主动脉环作用及机制的研究》文中提出目的舒张血管是降低血压的重要途径之一,本实验采用离体血管张力记录实验方法,观察葛根素与松针挥发油以及两者配伍对大鼠离体胸主动脉血管反应性的影响并探讨其作用机制。方法采用离体血管张力记录法。将大鼠股动脉放血,开胸取出胸主动脉,剔除周围脂肪组织,剪成长度约3~4mm的血管环,血管环用两根不锈钢微型挂钩从管腔穿过,水平悬挂在浴槽内,下方固定,上方一细钢丝连于张力换能器,经计算机生物信号采集分析系统记录血管环的张力变化。浴槽内含有通95%O2+5%CO2、pH值为7.4、37℃的K-H液,基础张力调为2g,平衡1.5h后开始实验,记录加入不同血管活性物质后,血管环的张力变化。结果1、累积浓度的葛根素对去甲肾上腺素(NE)诱导的收缩有显着抑制作用(P<0.01),具有浓度依赖性且对内皮完整血管环的作用显着强于对去内皮血管环的作用(P<0.01),而对KCl诱导的收缩无明显影响(P>0.05)。2、松针挥发油能使NE量效曲线下移,最大反应降低且有浓度依赖性(P<0.01),对KCl诱导的收缩有明显抑制作用且具有浓度及时间依赖性(P<0.01),其舒张作用均与内皮无关(P均>0.05)3、在无钙液中,葛根素预孵去内皮血管环后,对NE诱导的收缩无明显影响(P>0.05),而对此基础上继续加入CaCl2诱导的收缩有明显的抑制作用(P<0.05)。2%松针挥发油预孵去内皮血管环后,对NE诱导的收缩和此基础上继续加入CaCl2诱导的收缩均有明显的抑制作用(P<0.01)。4、四乙胺(TEA),格列苯脲(Gli)预孵内皮完整血管环后,可显着减弱葛根素的血管舒张效应(P<0.01)。4-氨基吡啶(4-AP)预孵后,则与对照组无显着差异(P>0.05)。而TEA、Gli和4-AP预孵内皮完整血管环后,2%松针挥发油对血管的舒张效应与对照组均无显着差异(P>0.05)。5、10-4mol/L葛根素与4%松针挥发油配伍组,10-5mol/L葛根素与4%松针挥发油配伍组,10-6mol/L葛根素与4%松针挥发油配伍组舒张作用最显着(P<0.01),10-6mol/L葛根素与2%松针挥发油配伍组舒张作用也较明显(P<0.01),并且各配伍组明显优于单个药物的降压作用,具有协同效应(P<0.01)。结论1、葛根素的舒血管效应主要依赖于内皮,呈浓度依赖性,其机制涉及到抑制外钙的内流,主要是抑制受体操纵性钙通道(ROC),与电压依赖性钙通道(VDC)无关,对胞内钙的释放影响不大。其舒血管效应与钙激活性钾通道(KCa)和ATP敏感性钾通道(KATP)有关。2、松针挥发油的舒血管效应可能作用于血管平滑肌细胞,呈浓度依赖性,通过抑制细胞外钙内流和细胞内钙释放而实现,包括ROC和VDC。其舒血管效应可能与钾离子通道无关。3、葛根素与松针挥发油配伍具有协同效应。高浓度松针挥发油参与的配伍组具有很显着的舒血管效应,而低浓度葛根素与中浓度松针挥发油的配伍舒张血管作用也较明显。
李娌,王学美[8](2008)在《淫羊藿苷药理作用研究进展》文中研究表明淫羊藿苷是一种黄酮类化合物,在体内分布较为广泛,可通过血脑屏障。单体状态时符合开放型二室模型。复方状态时,复方中的其他成分对ICA有促进吸收和分布。体内主要代谢产物为其苷元。以往有大量关于淫羊藿苷对免疫系统、肿瘤组织以及生殖、内分泌系统作用的研究,证实了其强大的药理活性。近年来对于淫羊藿苷的药理研究集中在其对骨组织、心血管系统和神经系统作用等机制方面。
王维[9](2008)在《复元胶囊对气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响》文中认为目的:研究复元胶囊对气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞(Vascular Smooth Muscle Cell,VSMC)凋亡及bax、bcl-2凋亡相关因子表达的影响,从细胞凋亡分子生物学角度探讨复元胶囊治疗气虚血瘀证的机制。方法:(1)造模。在18月龄SD大鼠48只中随机抽取40只,采用游泳、饥饿、惊恐、寒冷及高脂饮食等方法制作成大鼠气虚血瘀证模型后,随机分为5组,即Ⅱ组—模型组,Ⅲ组—芪参胶囊组,Ⅳ组—复元胶囊小剂量组,Ⅴ组—复元胶囊大剂量组,Ⅵ组—复元胶囊中剂量组,每组8只。剩余8只作为空白对照组。(2)给药。对Ⅲ组大鼠给予芪参胶囊灌胃(剂量:0.52g·kg -1);Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组大鼠给予复元胶囊灌胃(剂量分别为:0.15g·kg -1,1.35g·kg -1,0.45g·kg -1);Ⅰ组和Ⅱ组给予等容量生理盐水。各组每天灌胃一次,每次灌胃容量为1.33ml·100g-1,持续给药4周。(3)标本采取。将各组大鼠麻醉后取胸主动脉血管一段,迅速固定于4%多聚甲醛中,制成石蜡切片,做凋亡及免疫组化检测。另取一段迅速固定于2.5%戊二醛中,置于4°C冰箱保存,备电镜观察血管平滑肌细胞形态。(4)形态学观察。A. HE染色,光镜下观察血管平滑肌内膜、中膜情况。B.应用透射电镜观察各组血管平滑肌细胞超微结构。(5)血管平滑肌细胞凋亡的检测。采用缺口末端标记(TUNEL)法检测VSMC凋亡,计算血管平滑肌细胞的凋亡指数(apoptotic index, AI )。(6)调控细胞凋亡信号因子的检测。应用免疫组化方法检测血管平滑肌细胞bax、bcl-2凋亡相关信号因子的表达。结果:(1)模型组与空白对照组比较,血管平滑肌细胞中的bcl-2蛋白表达明显增强(P<0.05),bax蛋白表达明显减弱(P<0.05),bcl-2/bax比值上升(P<0.05),AI明显下降(P<0.05)。(2)复元胶囊大、中、小剂量组和芪参胶囊组与模型组比较,VSMC的bcl-2蛋白表达减弱(P<0.05),bax蛋白表达明显增强(P<0.05),bcl-2/bax比值下降(P<0.05),AI上升(P<0.05)。其中,复元胶囊中剂量组bcl-2/bax比值及AI最接近正常组。结论:(1)气虚血瘀证大鼠VSMC存在严重凋亡不足,增殖和凋亡严重失调。(2)复元胶囊能改变bcl-2/bax表达比率,诱导细胞凋亡,从而改善了气虚血瘀证VSMC的增殖与凋亡平衡失调。(3)复元胶囊能保护性增加模型组大鼠VSMC的凋亡,调整增殖与凋亡平衡,其机制可能是通过调节凋亡相关因子bcl-2和bax的表达比率所致。
郭峰,赵纳[10](2007)在《淫羊藿药理作用的研究现状及展望》文中研究指明目的综述淫羊藿药理作用的研究现状及前景。方法参阅相关文献,进行分析归纳。结果与结论淫羊藿属植物的化学成分较多,其具有多种药理作用,有很高的研究价值和广泛的应用前景。
二、淫羊藿甙与葛根素对血管平滑肌细胞凋亡影响的比较研究(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、淫羊藿甙与葛根素对血管平滑肌细胞凋亡影响的比较研究(论文提纲范文)
(1)ICA通过调控miR-672-5p/AKT3/NF-κB信号通路抑制ox-LDL诱导的RAW264.7炎症反应(论文提纲范文)
前言 |
中文摘要 |
Abstract |
中英文缩写对照表 |
第1章 绪论 |
1.1 淫羊藿苷的药理学作用 |
1.1.1 对心血管系统的作用 |
1.1.2 对免疫调节的作用 |
1.1.3 抗肿瘤的作用 |
1.1.4 对骨代谢的作用 |
1.1.5 对神经系统的作用 |
1.1.6 对生殖系统的作用 |
1.2 miRNAs与动脉粥样硬化 |
1.2.1 miRNAs对内皮细胞的影响 |
1.2.2 miRNAs对平滑肌细胞的影响 |
1.2.3 miRNAs对巨噬细胞的影响 |
1.3 常见信号通路与动脉粥样硬化的关系研究 |
1.3.1 NF-κB信号通路 |
1.3.2 MAPK信号通路 |
1.3.3 Toll样受体通路 |
1.3.4 Janus激酶/信号转导及转录激活因子信号通路 |
1.3.5 PI3K/AKT信号通路 |
第2章 ICA抗AS miRNAs芯片生物信息学分析及miR-672-5p/AKT3/NF-κB信号通路构建 |
2.1 实验材料 |
2.1.1 药品及试剂 |
2.1.2 实验仪器 |
2.1.3 溶液配制 |
2.2 实验方法 |
2.2.1 细胞培养 |
2.2.2 差异miRNAs的筛选 |
2.2.3 差异miRNAs在RAW264.7中表达的验证及目的miRNA的确定 |
2.2.4 miR-672-5p的靶基因预测以及GO分析 |
2.2.5 KEGG通路分析、靶基因确定及信号通路构建 |
2.2.6 ApoE~(-/-)小鼠胸主动脉组织中miR-672-5p、AKT3 mRNA及蛋白的表达 |
2.2.7 统计学分析 |
2.3 实验结果 |
2.3.1 差异miRNAs的筛选 |
2.3.2 差异miRNAs在RAW264.7中表达的验证及目的miRNA的确定 |
2.3.3 miR-672-5p靶基因预测和功能富集结果 |
2.3.4 miR-672-5p/AKT3/NF-κB信号通路构建 |
2.3.5 miR-672-5p、AKT3基因及蛋白在ApoE-/-小鼠胸主动脉组织中的表达 |
2.4 本章小结 |
第3章 ICA对ox-LDL诱导RAW264.7炎症反应的作用及机制研究 |
3.1 实验材料 |
3.1.1 药品及试剂 |
3.1.2 实验仪器 |
3.1.3 溶液配制 |
3.2 实验方法 |
3.2.1 细胞培养 |
3.2.2 CCK-8检测RAW264.7细胞的增殖情况 |
3.2.3 油红O染色检测RAW264.7泡沫化的形成 |
3.2.4 ELISA检测RAW264.7培养上清IL-1β IL-6及TNF-α的含量 |
3.2.5 qPCR检测RAW264.7中miR-672-5p及AKT3 mRNA的表达 |
3.2.6 Western Blot检测RAW264.7中AKT3及相关信号通路蛋白的表达情况 |
3.2.7 统计学分析 |
3.3 实验结果 |
3.3.1 ox-LDL诱导巨噬细胞源性泡沫细胞模型最佳浓度、时间确定 |
3.3.2 ICA对ox-LDL诱导RAW264.7细胞活力影响的浓度确定 |
3.3.3 ICA对ox-LDL诱导RAW264.7泡沫化的影响 |
3.3.4 ICA对ox-LDL诱导RAW264.7培养上清IL-1β、IL-6及TNF-α含量的影响 |
3.3.5 ICA对ox-LDL诱导RAW264.7 miR-672-5p及AKTmRNA表达的影响 |
3.3.6 ICA对ox-LDL诱导RAW264.7中AKT3以及信号通路相关蛋白表达的影响 |
3.4 本章小结 |
第4章 miR-672-5p在ox-LDL诱导RAW264.7炎症反应中的作用 |
4.1 实验材料 |
4.1.1 药品及试剂 |
4.1.2 实验仪器 |
4.1.3 溶液配制 |
4.2 实验方法 |
4.2.1 miR-672-5p对AKT3靶向调控作用的验证 |
4.2.2 miR-672-5p对ox-LDL诱导RAW264.7炎症反应的影响 |
4.2.3 统计学分析 |
4.3 实验结果 |
4.3.1 miR-672-5p与AKT3靶向调控的验证 |
4.3.2 miR-672-5p对ox-LDL诱导RAW264.7炎症反应的影响 |
4.4 本章小结 |
第5章 讨论 |
5.1 ICA治疗ApoE~(-/-)小鼠AS的miRNA芯片的生物信息学分析及miR-672-5p/AKT3/NF-κB信号通路的构建 |
5.2 巨噬细胞源性泡沫细胞的构建 |
5.3 ICA改善ox-LDL诱导RAW264.7的炎症反应 |
5.3.1 ICA抑制ox-LDL诱导RAW264.7的泡沫化 |
5.3.2 ICA减少ox-LDL诱导RAW264.7培养上清IL-1β、IL-6及TNF-α的含量 |
5.4 ICA通过miR-672-5p/AKT3/NF-κB信号通路抑制ox-LDL诱导的RAW264.7炎症反应 |
5.4.1 miR-672-5p/AKT3的生物学作用 |
5.4.2 ICA通过miR-672-5p/AKT3/NF-κB信号通路抑制ox-LDL诱导的RAW264.7炎症反应 |
5.5 miR-672-5p作为ICA抑制RAW264.7炎症反应作用靶点的探讨 |
第6章 结论 |
创新点 |
参考文献 |
作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
致谢 |
(2)中药调节平滑肌细胞内质网应激防治动脉粥样硬化研究进展(论文提纲范文)
1 VSMC、ERS与AS的相关研究 |
1.1 VSMC与AS之间的关系 |
1.2 VSMC与ERS相关凋亡信号通路 |
2 中药单体、复方调节VSMC的ERS防治AS |
2.1 中药单体 |
2.1.1 淫羊藿苷 |
2.1.2 丹参酮ⅡA |
2.1.3 毒胡萝卜素 |
2.2 中药复方 |
2.2.1 丹参通脉方 |
2.2.2 丹蒌片 |
2.2.3 葛根通脉饮 |
3 小 结 |
(3)基于特异性敲除技术的葛根素与葛根雌激素样和舒血管作用的相关性研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
缩略词表 |
上篇 文献综述 |
综述1 植物雌激素的心血管保护作用及机制 |
一 植物雌激素的分类 |
二 雌激素受体分布及类型 |
三 植物雌激素与心血管疾病的相关性 |
四 植物雌激素心血管保护作用的机制 |
五 总结 |
参考文献 |
综述2 葛根雌激素及一氧化氮分泌作用的相关性研究 |
一 葛根的主要成分 |
二 几种主要的葛根异黄酮对血管NO分泌作用研究 |
三 总结 |
参考文献 |
综述3 基于组分删除技术的中药药效物质基础研究概述 |
一 中药有效成分研究现状 |
二 组分删除技术的中药药效物质基础研究概述 |
三 以葛根素特异性敲除为代表的中药小分子敲除技术 |
四总结 |
参考文献 |
下篇 实验研究 |
第一部分 敲除法探讨葛根素在葛根雌激素样活性中的作用 |
前言 |
实验一 RPE、PRR、PRR-KO-RPE对T47D细胞增殖的影响 |
材料和方法 |
结果 |
讨论 |
参考文献 |
实验二 RPE、PRR和PRR-KO-RPE对T47D细胞周期的影响 |
材料和方法 |
结果 |
讨论 |
实验三 RPE、PRR、PRR-KO-RPE对T47D细胞ER α、ER β表达的影响 |
材料和方法 |
结果 |
讨论 |
参考文献 |
第二部分 敲除法探讨葛根素在葛根舒血管药效中的作用 |
前言 |
实验一 RPE、PRR、PRR-KO-RPE对大鼠胸主动脉血管环舒张作用的影响 |
材料和方法 |
结果 |
讨论 |
参考文献 |
第三部分 敲除法探讨葛根素在葛根的雌激素样活性与内皮依赖性舒血管药效关系及机理 |
前言 |
实验一 HUVECs对PRR的代谢规律及与NO分泌关系 |
材料和方法 |
结果 |
讨论 |
实验二 RPE、PRR、PRR-KO-RPE及拮抗剂对HUVEC细胞增殖及NO分泌的影响 |
材料和方法 |
结果 |
讨论 |
参考文献 |
实验三 RPE、PRR和PRR-KO-RPE对HUVEC细胞eNOS、ER α、ER β表达的影响 |
材料和方法 |
结果 |
讨论 |
参考文献 |
结论 |
创新点 |
致谢 |
个人简历 |
(4)淫羊藿甙对家兔血管平滑肌细胞凋亡相关基因表达水平的影响(论文提纲范文)
1 材料 |
1.1 动物及药品 |
1.2 细胞及主要试剂 |
1.3 主要仪器 |
2 主要实验方法和步骤 |
2.1 淫羊藿甙诱导兔VSMC凋亡 |
2.2 复制AS动物模型 |
2.3 制备地高辛标记探针 |
2.4 胸主动脉组织原位杂交 |
3 实验结果 |
3.1 ICA对体外培养兔VSMC凋亡的影响 |
3.2 ICA对兔主动脉VSMC GRP78基因表达水平的影响 |
4 讨论 |
(5)血管平滑肌细胞的增殖 凋亡与高血压(论文提纲范文)
1 高血压时血管平滑肌细胞的增殖 |
2 高血压时血管平滑肌细胞的凋亡 |
3 中药对血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响 |
(6)淫羊藿素对MC3T3-E1Subclone14细胞分化及相关信号通路的影响(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
1 前言 |
1.1 淫羊藿概述 |
1.2 淫羊藿苷作用机理研究进展 |
1.3 淫羊藿素的来源与活性 |
1.4 问题分析和研究思路 |
2 实验1 淫羊藿素对MC3T3-E1Subclone14细胞增殖、分化的影响 |
2.1 实验材料 |
2.2 实验方法 |
2.3 实验结果 |
2.4 讨论 |
3 实验2 淫羊藿素通过ER受体和p38MAPK通路影响MC3T3-E1Subclone14细胞的分化活性 |
3.1 实验材料 |
3.2 实验方法 |
3.3 实验结果 |
3.4 讨论 |
4 实验3 淫羊藿素通过BMPs/Smads通路影响MC3T3-E1Subclone14细胞的分化活性 |
4.1 实验材料 |
4.2 实验方法 |
4.3 实验结果 |
4.4 讨论 |
结语 |
参考文献 |
附录 |
致谢 |
(7)葛根素与松针挥发油配伍对大鼠离体胸主动脉环作用及机制的研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
ABSTRACT |
引言 |
实验研究 |
1 实验材料 |
1.1 药品与溶液 |
1.2 溶液的配制 |
1.3 仪器 |
1.4 动物 |
2 方法 |
2.1 大鼠离体胸主动脉环标本的制备 |
2.2 累积浓度葛根素对内皮完整或内皮不全的血管环张力的影响 |
2.2.1 葛根素对NE预收缩血管环张力的作用 |
2.2.2 葛根素对KCl预收缩血管环张力的作用 |
2.3 松针挥发油对内皮完整或内皮不全的血管环张力的影响 |
2.3.1 松针挥发油对NE量效曲线的影响 |
2.3.2 松针挥发油对KCl预收缩血管环时效曲线的影响 |
2.4 葛根素和松针挥发油对涉及内钙释放与外钙内流引起的去内皮血管环收缩的影响 |
2.5 钾离子通道阻断剂对葛根素和松针挥发油舒血管作用的影响 |
2.6 葛根素与松针挥发油配伍对NE预收缩的血管环张力的影响 |
2.7 统计方法 |
3 结果 |
3.1 累积浓度葛根素对内皮完整或内皮不全的血管环张力的影响 |
3.1.1 葛根素对NE预收缩血管环张力的作用 |
3.1.2 葛根素对KCl预收缩血管环张力的作用 |
3.2 松针挥发油对内皮完整或内皮不全的血管环张力的影响 |
3.2.1 松针挥发油对NE量效曲线的影响 |
3.2.2 松针挥发油对KCl预收缩血管环时效曲线的影响 |
3.3 葛根素和松针挥发油对涉及内钙释放与外钙内流引起的去内皮血管环收缩的影响 |
3.4 钾离子通道阻断剂对葛根素和松针挥发油舒血管作用的影响 |
3.5 葛根素与松针挥发油配伍对NE预收缩的血管环张力的影响 |
4 讨论 |
4.1 葛根素与松针挥发油对预收缩血管环的影响 |
4.2 葛根素与松针挥发油对内钙释放和外钙内流诱导的收缩的影响 |
4.3 钾离子通道阻断剂对葛根素与松针挥发油舒血管作用的影响 |
4.4 葛根素与松针挥发油配伍对NE预收缩血管环张力的影响 |
结论 |
致谢 |
参考文献 |
综述 |
公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
(8)淫羊藿苷药理作用研究进展(论文提纲范文)
1 体内代谢过程和产物 |
2 药理作用 |
2.1 对免疫系统的作用 |
2.1.1 对于非特异性免疫的影响 |
2.1.2 对于特异性免疫的影响 |
2.1.3 对细胞因子的调节作用 |
2.2 抗肿瘤的作用 |
2.2.1 ICA诱导肿瘤细胞凋亡、分化 |
2.2.1.1 诱导肿瘤细胞凋亡作用 |
2.2.1.2 ICA对肿瘤的诱导分化作用 |
2.2.2 ICA抑制肿瘤细胞侵袭转移机制 |
2.2.2.1 ICA抑制肿瘤细胞对外基质的黏附性及侵袭力 |
2.2.2.2 ICA影响侵袭诱导基因和转移基因表达水平 |
2.3 对骨组织的作用 |
2.3.1 对成骨细胞的作用 |
2.3.2 对去卵巢大鼠骨组织作用 |
2.4 对生殖系统的作用 |
2.4.1 雄性 |
2.4.2 雌性 |
2.5 对内分泌系统的作用 |
2.6 对心血管系统的作用 |
2.6.1 对血流动力学的影响 |
2.6.2 对心血管组织的影响 |
2.7 对神经系统的作用 |
2.7.1 对β淀粉样蛋白模型的影响 |
2.7.2 对氧化损伤模型的影响 |
2.7.3 对血管性痴呆 (vascular dementia, VD) 大鼠学习记忆的影响 |
(9)复元胶囊对气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响(论文提纲范文)
符号说明 |
中文摘要 |
英文摘要 |
论文正文:复元胶囊对气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响 |
前言 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
参考文献 |
全文总结 |
创新点及其意义 |
思考与展望 |
附图 |
文献综述一 |
文献综述二 |
文献综述三 |
致谢 |
攻读学位期间发表的论文 |
四、淫羊藿甙与葛根素对血管平滑肌细胞凋亡影响的比较研究(论文参考文献)
- [1]ICA通过调控miR-672-5p/AKT3/NF-κB信号通路抑制ox-LDL诱导的RAW264.7炎症反应[D]. 李藤藤. 吉林大学, 2021(01)
- [2]中药调节平滑肌细胞内质网应激防治动脉粥样硬化研究进展[J]. 赵院院,汪引芳,张鹏. 河北中医, 2019(10)
- [3]基于特异性敲除技术的葛根素与葛根雌激素样和舒血管作用的相关性研究[D]. 薛瑾. 北京中医药大学, 2014(09)
- [4]淫羊藿甙对家兔血管平滑肌细胞凋亡相关基因表达水平的影响[J]. 赵君玫,魏晏,毕红征,马一君. 中医学报, 2010(03)
- [5]血管平滑肌细胞的增殖 凋亡与高血压[J]. 董军奎,刘慧敏. 辽宁中医药大学学报, 2009(06)
- [6]淫羊藿素对MC3T3-E1Subclone14细胞分化及相关信号通路的影响[D]. 朱晓峰. 暨南大学, 2009(09)
- [7]葛根素与松针挥发油配伍对大鼠离体胸主动脉环作用及机制的研究[D]. 张小玲. 成都中医药大学, 2009(S1)
- [8]淫羊藿苷药理作用研究进展[J]. 李娌,王学美. 中国中药杂志, 2008(23)
- [9]复元胶囊对气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响[D]. 王维. 重庆医科大学, 2008(01)
- [10]淫羊藿药理作用的研究现状及展望[J]. 郭峰,赵纳. 中国药业, 2007(24)