一、意大利黑麦草,草地羊茅与它们的属间杂种后代F_2、F_3和F_4的比较试验（论文文献综述）
陈霞[1]（2019）在《木薯有性四倍体杂种优势及其机理研究》文中提出木薯（Manihot esculenta Crantz）起源于南美洲,现普遍种植于热带和亚热带地区,木薯块茎根富含淀粉,在已知淀粉作物中淀粉含量最高,加上其对生长环境的高适应性,木薯已成为重要的经济和能源等多用途作物。随着木薯淀粉及其深加工业产品的需求量不断增加,木薯的产量无法适应市场的需求,因此选育优良的木薯品种显得尤为重要。利用多倍体育种进行木薯遗传改良,选育符合市场需求的新种质具有很大的潜力,特别是通过有性多倍化,促进不同的优良基因组间遗传物质重组,产生杂种优势,可加速对目标性状的筛选及对优良品种的选育。本研究以前期工作中得到的木薯有性四倍体（ST）及其母本华南5号、父本华南10号为主要供试材料,在确定木薯有性四倍体倍性纯合和稳定的基础上,对有性四倍体及其双亲的基本农艺性状、生理生化指标、抗逆性、块根亚显微结构和块根酒精发酵转化率等展开系统的比较分析,阐明了木薯有性四倍体产生的杂种优势,并结合转录组学等手段揭示了其中较显着杂种优势块根性状早熟和抗采后生理衰变的变异机理,为筛选木薯优良性状提供理论依据和研究方向。主要研究结果如下:1、采用流式细胞术和叶片染色体计数法测定了木薯有性四倍体的细胞DNA含量及染色体数,明确了其为纯合四倍体,且倍性具有稳定性。对田间种植的木薯有性四倍体及其双亲SC5/SC10生长发育不同时期的基本农艺性状进行了比较分析,连续测定三代无性繁殖系F1/F2/F3。结果显示:木薯有性多倍化后,农艺性状产生了一定的杂种优势。其株型产生巨大性效应,其株高、茎粗及地上部分鲜重在发育的各个时期都显着高于双亲,且无分枝现象。叶片相关指标也呈现巨大性特征,其叶型指数、叶面积、叶柄长在发育的各个时期都显着高于双亲;叶柄颜色变为紫红色,但叶片数量显着低于双亲。块根相关指标也发生了显着变化,其块根直径在发育的各个时期显着高于父本,与母本无显着性差异;块根长度与双亲无显着差异;块根鲜重在膨大期显着高于双亲;块根干物率在膨大期显着高于双亲,于成熟期略低于双亲;块根淀粉含量积累时期发生变化,表现为提早于双亲,缩短了块根的成熟期,于膨大期淀粉含量显着高于双亲,且直链/支链比与双亲差异较大,即淀粉成分发生改变。2、对木薯有性四倍体及其双亲成熟期植株进行叶片光合特性和叶绿素含量进行测定。结果显示:木薯有性四倍体叶片净光合速率、蒸腾速率、气孔导度以及水分利用率均显着高于双亲,其中净光合速率、水分利用率分别比母本SC5高39.48%、5.74%,比父本SC10高63.72%、20.11%;叶片总叶绿素、叶绿素a、叶绿素b含量也均显着高于两亲本,与光合特性参数相吻合。采用高效液相法对木薯有性四倍体及其双亲不同发育时期功能叶、茎秆韧皮部汁液、块根可溶性糖测定比较,分析发现ST在生长发育的不同时期其叶片中的蔗糖、葡萄糖、果糖的含量变化趋势与两亲本相似,其中蔗糖含量在植后130 d后均显着高于双亲;ST在生长发育的前期其茎秆中的蔗糖运输较3、多,含量显着高于两亲本,而发育后期块根对蔗糖利用能力降低抑制了蔗糖的运输,茎秆中蔗糖含量减少;ST在生长发育的不同时期其块根中蔗糖、葡萄糖、果糖的含量变化趋势与两亲本不一致,表现为发育前期蔗糖含量利用率快,块根中蔗糖含量显着低于双亲;发育后期蔗糖利用能力降低,块根中蔗糖逐渐积累,并高于双亲。表明木薯有性四倍体对蔗糖的分解利用模式发生了改变,利用蔗糖进行淀粉积累的时期主要为块根膨大前期。4、分别对木薯有性四倍体及其二倍体亲本进行耐旱、耐阴、耐盐和块根抗采后生理衰变等抗逆性指标评价。结果表明:在干旱胁迫下ST的生长发育较二倍体亲本被抑制程度较低,并可响应落叶机制来减少水分的利用与蒸发;避光胁迫下ST相对于二倍体亲本对避光的耐受力具有明显的优势,其在遮光胁迫下可继续生长发育较长时间,叶片变形但可保持生命力,而二倍体亲本则植株叶片黄化临近死亡;盐胁迫下,ST组织培养幼苗叶片生长发育比二倍体亲本缓慢,但根系更为粗壮,ST由于苗茎更粗壮,相对于二倍体具有一定的耐盐抗逆性,但其本身耐盐性也较低;ST块根相对于双亲具有很强的耐采后生理腐烂能力（PPD）,其薯块可在室温下储藏5 w以上保持薯肉新鲜,双亲则在2 w内完全腐烂变质。5、采用透射电子显微镜和扫描电子显微镜观察木薯有性四倍体及其双亲块根淀粉粒的内部结构及表面大小形态。观察发现ST淀粉粒中“斑马条纹”的密度与双亲不同,即ST淀粉粒的内部结构发生了变化,ST淀粉粒大小介于两亲本之间,淀粉粒外部形态与双亲无明显差异。另外ST膨大期块根淀粉粒填充程度显着高于双亲而成熟期淀粉填充程度与双亲无显着差异,且与膨大后期基本一致,表明ST淀粉颗粒填充时期提前,与淀粉含量积累趋势一致。6、采用气相色谱法分别测定木薯有性四倍体及其双亲块根发酵全过程的酒精含量。结果显示ST块根的酒精转化率趋势与双亲基本一致,在发酵开始的前32 h,酒精含量增加较快,之后增长变缓,36 h后酒精不再增加。发酵停止后,其酒精含量略高于双亲,但差异不显着。此外,发酵8-12h时期内ST的酒精转化速率具有明显的加速阶段。7、对木薯有性多倍体及其双亲膨大期块根进行转录组学比较分析,结果发现ST有性多倍体化后基因表达发生了变化。与母本SC5相比,有2934个差异表达基因,其中1385个基因上调,1549个基因下调;与父本SC10相比,有3171个差异表达基因,其中1592个基因上调,1579个基因下调。这些差异表达基因主要涉及参与生物调节,代谢过程,定位,应激反应和发育过程等。Pathway富集分析显示,ST与双亲相比在“类黄酮生物合成物”和“糖酵解/糖异生”代谢途径显着富集。“类黄酮生物合成物”代谢途径可能与ST抗逆性增强和块根表皮颜色变化相关,“糖酵解/糖异生”代谢途径可能与ST块根淀粉积累和干物率发生变化有关,需要进一步研究验证。7、结合转录组学手段对ST块根早熟杂种优势机理进行研究,结果表明ST与父母本相比,差异表达基因主要集中在块根中蔗糖的分解利用阶段,包括4个基因显着上调表达,分别为转化酶基因:MeNINV8/MeVINV3、蔗糖合成酶基因:MeSuSy2、已糖激酶:MeHXK 2,其中已糖激酶基因MeHXK2差异表达达到极显着水平;1个基因下调表达（转化酶基因:MeVINV2）。而块根中淀粉的合成阶段关键酶基因表达无显着差异。表明ST膨大期块根淀粉含量高于亲本主要是通过对蔗糖的代谢阶段进行调控。进一步对ST及其亲本生长发育不同时期淀粉积累关键酶活性进行测定,证明了 ST块根淀粉提早填充和块根提前膨大成熟主要由块根中转化酶和己糖激酶进行调控。8、分别从生理生化、细胞、分子基因水平上研究了 ST块根抗采后生理衰变（PPD）杂种优势机理。结果显示:ST块根在储存过程中其品质指标干物率、β-胡萝卜素和淀粉含量都比双亲更稳定。在采后生理衰变胁迫下,ST及其双亲都会通过调节与抗逆性相关的代谢酶活系统来清除活性氧,延迟腐烂变质,但ST相对于双亲的酶活系统响应更为活跃,且储藏60 h和2w是ST清除活性氧的酶活调控代谢的关键时期。此外,ST块根抗PPD的最主要响应机制为在染色体加倍基因重组后其块根恢复了类似于其他薯类伤修复的功能,来响应抗采后生理衰变,通过相关酶代谢调控合成木质素来加固细胞壁的结构以此抵御微生物的侵染,从而达到耐储藏,Wiesner染色实验也验证了伤修复产物木质素的存在。进一步对与木质素合成相关的关键酶基因家族的表达进行统计研究,共获得木薯木质素合成途径关键酶10个基因家族（PAL1-6,C4H,4CL,C3H,CCoACMT 1-11,CCR 1-2,F5H 1-2,COMT1-4,CAD1-3,POD1-7）,ST 块根储藏过程中 PAL2/5/6、4CL、C3H、CCoAOMT 1/6、CCR 2、CAD 2、POD3基因与双亲相比显着上调,表明这些基因是响应木质素合成的关键基因,而COMT和F5H基因家族主要呈现下调趋势,表明ST倾向于合成G型木质素单体形成结构较紧密的木质素类型,来抵御细胞壁受微生物的侵染。
云岚[2]（2009）在《新麦草多倍体诱导及细胞学研究》文中研究表明新麦草（Psathyrostachys juncea （Fisch.） Nevski）是小麦族中少有的二倍体物种,因其低倍性,适宜用染色体加倍方法进行遗传改良。研究旨在利用离体组织培养并诱导同源四倍体对新麦草进行染色体加倍。首先以2品种新麦草为材料,建立新麦草高效再生体系。分别以幼穗、幼胚和成熟胚为外植体。结果表明,1～3cm幼嫩穗、授粉后14～17d长度为1mm的幼胚最适于愈伤诱导,但2品种有一定差异。幼胚需4℃预处理1～5d,成熟胚需10℃下浸泡48h。2,4-D在愈伤组织诱导阶段作用最显着。大于4cm幼穗和成熟胚需添加0.3～0.5 mg/LABA抑制花器官分化和胚萌发。CH可促进愈伤组织生长,但对外植体细胞分化方向没有决定作用。胚性愈伤容易分化和再生,而非胚性愈伤在添加低浓度2,4-D和6-BA的培养基上经2次以上继代改造可部分转化为胚性愈伤。愈伤组织分化再生过程中NAA和6-BA均起重要作用,胚性愈伤分化率均达80%以上。建立新麦草高效再生体系的关键步骤是外植体筛选、诱导愈伤组织形成和胚性愈伤组织的改造。用秋水仙素处理新麦草萌动种子、分蘖芽和愈伤组织诱导染色体加倍,处理后的植株用根尖压片法进行染色体倍性鉴定。结果表明,在30℃下,用1500mg/L秋水仙素和1.5%DMSO处理4h诱导萌动种子获得了混倍体植株,平均2n=28细胞突变率为24.4%;以500 mg/L秋水仙素和1.5%DMSO在25℃处理幼苗分蘖芽48h加倍诱导率更高,四倍体细胞平均比例为42.65%,此外还发现突变为单倍体、三倍体、非整倍体的细胞,总比例为8.88%;以100mg/L秋水仙素和1.5%DMSO、在25℃处理72h诱导愈伤组织加倍效率最高,平均四倍体细胞比例为53.58%,并得到8株四倍体细胞在80%以上材料。Pendimethalin处理后的愈伤组织没有得到再生植株。形态比较和气孔保卫细胞观察表明,新麦草加倍植株叶片长、宽均较二倍体有所增加。四倍体叶片气孔保卫细胞长度比二倍体增加13.52%,差异显着。气孔之间距离显着增大。比较诱导形成的同源四倍体新麦草光合作用和叶绿素荧光动力学。测定结果用直线回归和Farquhar模型进行拟合。结果表明,四倍体光补偿点、光饱和点、最大净光合速率高于二倍体,气孔导度值整体低于二倍体,表明四倍体对强光的适应性好于二倍体。四倍体CO2补偿点、CO2饱和点、最大羧化速率、最大电子传递速率和最大磷酸丙糖利用速率也显着高于二倍体,表明四倍体在高光强和高CO2浓度下比二倍体具有更大的光合潜力。叶绿素荧光观测结果表明,四倍体原初光能转化效率高于二倍体,干旱胁迫下四倍体PSⅡ实际光化学效率、光化学淬灭系数qP和非光化学淬灭系数qN低于二倍体,说明干旱胁迫下二倍体的光保护机制作用更明显。统计2个二倍体品种新麦草根尖细胞染色体,其中具14条染色体的细胞占统计细胞总数的86.25%。染色体顺次C-分带与45S rDNA分子原位杂交（FISH）,结果表明,新麦草7对染色体可根据各自独特的带型而彼此区分开来。新麦草染色体组成为2n=2x=14=8m+6sm,核型对称类型属于2A。根据带型可以将7对染色体分为3组,同时也发现存在带型多态性。FISH结果显示45S rDNA在二倍体新麦草染色体上有6个主要分布位点,均位于染色体短臂端部,某些染色体中部和长臂末端也存在弱的杂交信号,可能属于次缢痕以外的rDNA分布位点。新麦草加倍细胞28条染色体上共存在12个主45S rDNA位点。顺次C-分带与原位杂交结果将3对45S rDNA位点初步定位于新麦草的Ⅰ、Ⅲ以及Ⅴ染色体短臂末端,推测这3对染色体可能是NOR染色体。
李小雷[3]（2008）在《几种披碱草种间杂种F1遗传特性及冰草分子图谱构建研究》文中研究表明披碱草属和冰草属均为禾本科小麦族多年生植物,它们具有适应性广、抗逆性强、优质高产等特性,是禾草及麦类作物品种改良的重要基因资源。这两个属的多数种既是优良的人工栽培饲草,又是重要的水土保持植物。为创造能结合双亲优良特性的禾草新种质（新品种）,我们将老芒麦与紫芒披碱草、加拿大披碱草与肥披碱草、蒙古冰草与航道冰草相组配进行远缘杂交,成功获得了种间杂种F1代,并对蒙古冰草×航道冰草杂种F1套袋自交得到了F2群体。本试验对老芒麦与紫芒披碱草正、反交杂种F1、加拿大披碱草×肥披碱草杂种F1的生育及分子细胞遗传学等特性进行了研究,并利用AFLP、RAPD标记技术构建冰草分子遗传图谱,同时对株高、分蘖数、单株鲜重等10个重要农艺性状进行了QTL定位分析。主要结果如下:1.老芒麦与紫芒披碱草正交F1生长速度明显超过双亲,反交F1生长速度介于双亲之间;正交F1株高143.2cm,反交F1株高129.7cm,正、反交F1的穗型均呈双亲中间型,花粉高度不育;正、反交F1均为五倍体（2n=5x=35）,正交F1染色体构型为6.90Ⅰ+14.02Ⅱ,反交F1染色体构型为7.82Ⅰ+13.59Ⅱ,染色体配对行为不规则是造成杂种F1高度不育的细胞遗传学原因。亲本老芒麦、紫芒披碱草和其正、反交杂种F1代分蘖期幼叶的EST酶谱表型差异明显,是蛋白质水平鉴定杂种的重要依据。2.加拿大披碱草与肥披碱草种间杂种F1植株生长势强,生长速度明显超过其双亲,平均株高146.07cm;F1株型倾向其母本加拿大披碱草,穗型呈双亲的中间型,杂种F1植株完全不育;染色体数目为35条（2n=5x=35）,其PMC MⅠ平均染色体构型为5.79Ⅰ+14.31Ⅱ+0.17Ⅲ,染色体联会较松弛、单价体和多价体频率高是导致杂种F1不育的原因。试验筛选出适宜于加拿大披碱草×肥披碱草F1及其双亲的RAPD扩增引物16个,共扩增出215个位点,多态性位点占72.1%;亲本加拿大披碱草和肥披碱草之间的遗传距离为0.7122,杂种F1与加拿大披碱草的遗传距离为0.6643,而与肥披碱草的遗传距离为0.2329,杂种F1偏父本遗传。试验建立了加拿大披碱草×肥披碱草F1幼穗外植体组培再生体系,最适愈伤组织诱导培养基为MS+2.0mg /L 2,4-D,最适幼苗分化培养基为MS+ 2.0mg/L 6-BA + 0.4mg/L NAA,最适生根培养基为MS+0.5mg/L IBA。该组培再生体系成功建立,为秋水仙碱诱导杂种F1愈伤组织染色体加倍提供了必要条件。3.对蒙古冰草、航道冰草亲本材料进行多态性检测,筛选出AFLP适宜引物16对、RAPD适宜引物19个,用这些引物对F2群体扩增得到248个多态性位点,其中AFLP多态性位点211个,RAPD多态性位点37个。对F2群体AFLP、RAPD标记分离分析发现,来源于两个亲本的标记位点分离比例接近1:1,在P<0.05的条件下,248个标记中有49个偏离3:1的孟德尔分离比例,占标记位点总数的19.8%,说明该F2群体适于遗传作图。4.利用二倍体蒙古冰草、航道冰草杂种F2分离群体首次构建了冰草分子遗传图谱,它包含7个连锁群、175个分子标记,其中AFLP标记152个,RAPD标记23个,图谱全长416cM,平均图距2.47cM。5.对二倍体冰草10个重要农艺性状共检测到13个QTL,其加性效应各不相同,各位点的遗传贡献率介于10.1%～33.9%,13个QTL分布于6个连锁群上。控制株高的QTL1个,控制叶长的QTL1个,控制单株鲜重的QTL1个,控制单株干重的QTL2个,控制叶宽的QTL1个,控制分蘖数的QTL1个,控制茎粗的QTL 2个,控制叶片数的QTL 1个,控制茎叶比的QTL 2个,控制穗长的QTL 1个。
马艳红[4]（2007）在《几种小麦族禾草远缘杂交后代育性恢复研究》文中指出小麦族多年生禾草的多数种具有耐瘠薄、抗逆性强、优质高产等特性,是禾草及麦类作物品种改良的宝贵基因库。为创造结合双亲优良特性的饲草新种质,我们将引自北美洲草原具高产优质特性的加拿大披碱草分别与产于内蒙古草原抗逆性强的野大麦、披碱草、圆柱披碱草进行种属间远缘杂交,获得了高度不育的杂种F1代。本研究利用秋水仙碱诱导染色体加倍法和回交法克服这3个杂种的不育性,并从形态及生物学、细胞学、同工酶及AFLP不同水平分别对加拿大披碱草—野大麦染色体加倍后代、加拿大披碱草—披碱草F1和加拿大披碱草—圆柱披碱草F1及其BC1代进行了鉴定分析。主要结果如下:1.秋水仙碱处理三倍体加拿大披碱草—野大麦F1分蘖苗的适宜浓度和时间范围分别为0.15%～0.20%和12～24h,获得染色体加倍植株17个,并在田间发现了16个染色体自然加倍株丛。2.加拿大披碱草—野大麦染色体自然加倍植株及其加倍F1代、秋水仙碱加倍植株的PMCMⅠ染色体构型分别为0.04Ⅰ+20.96Ⅱ、0.03Ⅰ+20.98Ⅱ和0.03Ⅰ+20.97Ⅱ,花粉可育率分别为84.97%、94.08%和90.21%,自然结实率分别为77.51%、83.87%和80.13%,育性较高。3.加拿大披碱草—野大麦染色体加倍植株及其后代的生长势强,生育期均为147d,开花持续期和果后营养期长,枯黄期晚,株高、叶长、叶宽、穗长、穗宽等形态特征明显优于杂种F1,继承了父本野大麦分蘖性和耐盐性强的特性。4.加拿大披碱草—野大麦染色体加倍植株及其加倍F1在同一发育阶段的EST、POD和SOD 3种同工酶酶谱表征具有一致性,而在不同发育阶段同工酶酶谱表征存在明显差异,可作为染色体加倍后代育性恢复鉴定的遗传标记。5.用19个AFLP适宜引物对加拿大披碱草—野大麦染色体加倍植株及其加倍F1～F4、亲本及杂种F1扩增出的多态性位点比率为84.60%;聚类分析表明,亲本加拿大披碱草与野大麦遗传差异最大,杂种F1与♀加拿大披碱草遗传差异相对较小,染色体加倍植株及其加倍F1～F4代间的遗传差异最小。6.加拿大披碱草—披碱草F1生长速度明显超过双亲、加拿大披碱草—圆柱披碱草F1生长速度介于双亲之间,其生育期分别为139d和132d,株高分别为150.05cm和143.67cm,株型均偏向♀加拿大披碱草,叶片长而宽大,叶量丰富,穗子大,分蘖能力强。7.加拿大披碱草—披碱草F1、加拿大披碱草—圆柱披碱草F1均为五倍体,其PMCMⅠ染色体构型分别为19.04Ⅰ+7.45Ⅱ+ 0.28Ⅲ+0.02Ⅳ和5.82Ⅰ+14.31Ⅱ+ 0.15Ⅲ,染色体配对行为不规则是造成杂种不育的重要原因。8.用13个AFLP适宜引物对加拿大披碱草—披碱草F1、加拿大披碱草—圆柱披碱草F1及其双亲扩增的多态性位点比率为83.56%,各材料间的AFLP指纹图谱差异明显,可作为杂种F1与其各自亲本识别的分子依据;聚类分析显示,亲本加拿大披碱草与披碱草的遗传差异比与圆柱披碱草的差异大,2个杂种F1与各自父本的遗传差异相对较小。9.建立了加拿大披碱草—披碱草F1、加拿大披碱草—圆柱披碱草F1组培再生体系,即以MS为基本培养基,愈伤组织诱导、继代、幼苗分化、生根的最适培养基浓度组合分别为:400mg/L CH +3.0mg/L 2,4-D、400mg/L CH + 1.0mg/L 6BA+0.5 mg/L 2,4-D、400mg/L CH +3.0mg/L 6BA +0.5mg/L NAA和0.5mg/L NAA + 0.5mg /L IBA;在此基础上,用秋水仙碱诱导2个杂种F1的愈伤组织各获得4个变异植株。10.获得[加拿大披碱草×披碱草]×加拿大披碱草BC1植株4个、[加拿大披碱草×圆柱披碱草]×加拿大披碱草BC1植株3个,其染色体数目均趋向加拿大披碱草。
梁蕊芳[5]（2005）在《利用基因枪轰击法将NHX1、CBF耐逆相关基因导入高羊茅（Festuca arundinacea Schreb.）》文中研究表明高羊茅（Festuca arundinacea Schreb.）是一种优质的草坪草,利用基因工程进行遗传改良的研究一直备受人们关注。我们在建立并研究了高效的高羊茅组培再生体系的基础之上,通过基因枪法转化来自拟南芥的 AtNHX1、CBF3 和 CBF4 基因,获得转基因株系,以期为生物技术培育抗旱、抗寒、耐盐草坪型高羊茅奠定基础。主要研究结果如下: 1.对高羊茅再生体系的研究与建立。利用幼苗下胚轴建立了高羊茅植株再生体系,当高羊茅种子以次氯酸钠为主要消毒剂时,其最适的浓度和时间分别为次氯酸钠50%（V/V）处理 20 min,种子发芽率为 80%,污染率为 0%。同时发现用高羊茅下胚轴诱导愈伤组织时,下胚轴的不同的切法对愈伤组织诱导有影响,从一端切的诱导愈伤率为 74.7%,比从两端切（55.8%）高出 18.9%。以下胚轴为外植体,2,4-D 的浓度为 9 mg·L-1时,愈伤组织诱导率最高,高羊茅愈伤组织的分化再生率可达 80.7%。 2. 利用基因枪法转化来自拟南芥的 AtNHX1 基因,PCR 检测再生植株 80 株,其中29 株为阳性。随机抽取 PCR 检测阳性植株 Western-blotting 检测也为阳性。同时,对转基因植株进行了草丁膦涂抹实验发现,转基因植株对除草剂的耐性也提高。 3. 拟南芥 CBF4 基因为干旱专一诱导的转录因子 CBF 家族成员,用诱导型启动子RD29A 驱动,含有草丁膦抗性选择标记的 pGreen0229-RD29A-CBF4-DHA 植物表达载体,利用基因枪法轰击高羊茅的胚性愈伤组织,得到 24 株 PCR 检测为阳性的转基因植株。 4. 分别用诱导型启动子 RD29A 和组成型启动子 CaMV35S 驱动,将 CBF3 基因插入到质粒载体 pGreen0229 中,得到含有草丁膦抗性选择标记的植物表达载体pGreen0229-35S-CBF3-DHA 和 pGreen0229-RD29A-CBF3-DHA。利用基因枪法转化高羊茅的胚性愈伤组织,分别都得到 22 株转基因植株,经 PCR 和 Western-blotting 检测表明,CBF3 基因已经整合到高羊茅基因组中。
宁婷婷[6]（2004）在《三种冷季型草坪草的遗传多样性研究》文中认为多年生黑麦草（Lolium perenne L.）,草地早熟禾（Poa pratensis L.）,高羊茅（Festuca arundinaceae Schreb.）是我国应用最为广泛的三种主要冷季型草坪草,因为其快速建植,良好的分蘖能力,以及优良的坪用表现在我国的园林绿化中起到重要的作用。但是品种间复杂的遗传关系阻碍了更多品种的培育;为了评价其遗传多样性,指导草坪草的育种和建植,我们采用了RAPD的分子标记结合形态学观察的方法对这三个种的十几个品种进行了遗传多样性分析。结果表明: （1）61个引物在黑麦草的16品种中共扩增出408条带,多态条带比率（PPB）为89.95%。聚类分析结果表明多年生黑麦草品种之间的相似系数分布于50%～95%之间。一年生黑麦草的2个牧草品种Top One和Avance没有单独聚成一类,而是与14个多年生黑麦草的草坪品种混合聚在一起。品种之间的聚类关系与表型特征没有明确的对应关系。 （2）早熟禾16个品种选用了25个引物进行了RAPD分析,共扩增出218条带,多态条带比率（PPB）为89.91%。聚类分析结果表明草地早熟禾品种之间的遗传多样性较低,相似性集中在66%～98%。加拿大早熟禾的1个品种单成一支,与其他草地早熟禾的品种相似性较低;品种之间的聚类关系与表型特征呈现不完全相关性。 （3）高羊茅选取了7个坪用品质有代表性且育种来源已知的品种,11个引物共扩增出69条带,多态条带比率（PPB）为76.81%。聚类分析结果表明高羊茅品种之间的遗传多样性很低,除了国际种子公司的Houndog2另成一支,与其他品质之间的相似性较低之外,其他6个品种之间的相似系数集中在89.89%～96.84%之间。分析结果显示聚类结果与育种目的及表型性状没有相关性;对三种冷季型草坪草的育种方法进行了讨论。
H.KALTOFEN,E.WOJAHN,西力布[7]（1981）在《意大利黑麦草,草地羊茅与它们的属间杂种后代F2、F3和F4的比较试验》文中研究指明在饲草育种工作中,对意大利黑麦草（Lolium multiflorum Lam）和草地羊茅（Festuca pratensis Huds.）属间杂种的兴趣日益增高。这项研究的目的是探讨这种属间杂种的某些农艺特性以及这些特性是否函代（由这一代向下一代）发生变异。在四种施氮肥剂量下,对F2、F3及F4作了两年的盆栽试验观察。每年刈割四次。F2、F3和F4都是来自F1单株的代裔,因此,尽管这些杂种是开放传粉的,但必须把近亲繁殖效果考虑进去。杂种的繁殖力是函代提高的。在春季播种后,较高的氮肥条件下草地羊茅第一年的产量大大低于意大利黑麦草,在最高的施氮肥条件下草地羊茅几乎全都死亡了。在较低的施氮肥条件下,杂种植株的产量超过草地羊茅,甚至高于意大利黑麦草。在非常高的施氮肥条件下,这些杂种植株的耐肥力比草地羊茅好得多,但不如黑麦草。在越冬后,生长的第二年,这些杂种植株的产量几乎无例外的高于草地羊茅和黑麦草。一般,在各次刈割中这些杂种植株的产量分配比意大利黑麦草均匀。在两年中,这些杂种植株的产量多半明显高于两个亲本种。在不同施氮肥剂量下,由于干物质产量增加了,粗蛋白质含量显得较低,而碳水化合物的含量常常是较高的。一般来讲,杂种植株的粗纤维含量略高于意大利黑麦草,而不如草地羊茅高。就产量,品质和对氮素的反应而论,在杂种后代的延续各世代中没有出现很明显的变异。这些杂种后代没有出现向某一亲本方向返祖变异的证据。这些实验结果促使植物育种工作者对这种杂种寄于更大的关注。
二、意大利黑麦草,草地羊茅与它们的属间杂种后代F_2、F_3和F_4的比较试验（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、意大利黑麦草,草地羊茅与它们的属间杂种后代F_2、F_3和F_4的比较试验（论文提纲范文）
（1）木薯有性四倍体杂种优势及其机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 植物多倍体育种研究进展 |
| 1.1.1 植物多倍体的起源与分类 |
| 1.1.2 植物多倍体的生物学特征 |
| 1.1.3 多倍体在植物育种中应用 |
| 1.1.4 多倍体杂种优势研究进展 |
| 1.2 木薯及其多倍体育种研究进展 |
| 1.2.1 木薯概况 |
| 1.2.2 木薯多倍体育种研究进展 |
| 1.3 木薯块根研究进展 |
| 1.3.1 木薯块根淀粉合成研究进展 |
| 1.3.2 木薯块根抗采后生理衰变(PPD)研究进展 |
| 1.3.3 木薯块根酒精产业研究进展 |
| 1.4 目的意义及研究思路 |
| 1.5 技术路线 |
| 2 实验材料与方法 |
| 2.1 供试材料 |
| 2.2 杂交后代幼苗倍性鉴定 |
| 2.2.1 流式细胞仪检测 |
| 2.2.2 叶片染色体数目检测 |
| 2.3 木薯有性四倍体及其双亲生长发育不同时期基本农艺性状测定 |
| 2.3.1 株型相关指标 |
| 2.3.2 叶片相关指标 |
| 2.3.3 块根相关指标 |
| 2.3.4 淀粉含量 |
| 2.4 木薯有性四倍体及其双亲生理生化指标测定 |
| 2.4.1 功能叶光合特性测定 |
| 2.4.2 功能叶叶绿素含量测定 |
| 2.4.3 高效液相色谱法测定功能叶/茎秆韧皮部汁液/块根可溶性糖 |
| 2.5 木薯有性四倍体及其亲本抗逆性实验 |
| 2.5.1 干旱胁迫 |
| 2.5.2 遮阴胁迫 |
| 2.5.3 盐胁迫 |
| 2.5.4 采后块根生理衰变胁迫 |
| 2.6 木薯有性四倍体及其亲本块根亚显微结构观察 |
| 2.6.1 块根膨大期淀粉粒透射电镜观察 |
| 2.6.2 块根成熟期淀粉粒树脂半薄切片制片 |
| 2.6.3 块根成熟期淀粉粒扫描电镜观察 |
| 2.7 木薯有性四倍体块根酒精转化率分析 |
| 2.7.1 酿酒酵母的活化 |
| 2.7.2 种子液制备 |
| 2.7.3 酒精发酵液的制备方法 |
| 2.7.4 气相色谱法测定样品中的酒精含量 |
| 2.8 木薯有性四倍体及其亲本膨大期块根转录组学分析 |
| 2.8.1 RNA提取、cDNA文库的构建及转录组测序 |
| 2.8.2 比对参考基因组及转录本组装 |
| 2.8.3 表达量统计 |
| 2.8.4 差异表达基因(DEGs)统计及其GO功能注释/KEGG Pathway分析 |
| 2.8.5 与糖酵解/糖异生相关基因的Q-PCR验证 |
| 2.9 木薯有性四倍体块根淀粉提前填充分析 |
| 2.9.1 木薯块根淀粉积累相关的代谢通路及其关键基因筛选 |
| 2.9.2 块根中蔗糖与淀粉代谢关键酶活性测定 |
| 2.10 木薯有性四倍体采后块根抗生理衰变(PPD)分析 |
| 2.10.1 采后块根处理及取样 |
| 2.10.2 采后储藏不同时间块根重要品质指标测定 |
| 2.10.3 采后储藏不同时间块根生理生化指标测定 |
| 2.10.4 采后储藏不同时间块根与木质素合成相关的关键酶基因的表达分析 |
| 2.10.5 新鲜块根细胞壁亚显微结构透射电子显微镜观察 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 杂交后代倍性及稳定性鉴定 |
| 3.2 木薯有性四倍体及其双亲基本农艺性状比较分析 |
| 3.2.1 株高比较分析 |
| 3.2.2 茎粗比较分析 |
| 3.2.3 分枝高/分枝数比较分析 |
| 3.2.4 地上部分重比较分析 |
| 3.2.5 叶片长比较分析 |
| 3.2.6 叶片单片裂叶宽比较分析 |
| 3.2.7 叶柄长比较分析 |
| 3.2.8 叶面积比较分析 |
| 3.2.9 叶片数比较分析 |
| 3.2.10 块根长度比较分析 |
| 3.2.11 块根直径比较分析 |
| 3.2.12 块根鲜重比较分析 |
| 3.2.13 块根干物率比较分析 |
| 3.2.14 淀粉含量比较分析 |
| 3.3 木薯有性四倍体及其双亲生理生化指标比较分析 |
| 3.3.1 叶片光合特性比较分析 |
| 3.3.2 叶片叶绿素含量比较分析 |
| 3.3.3 功能叶、茎秆韧皮部汁液、块根可溶性糖比较分析 |
| 3.4 木薯有性四倍体及其亲本抗逆性观察分析 |
| 3.4.1 抗旱性比较分析 |
| 3.4.2 抗遮阴性比较分析 |
| 3.4.3 耐盐性比较分析 |
| 3.4.4 块根抗采后腐烂变质比较分析 |
| 3.5 块根亚显微结构观察 |
| 3.5.1 膨大期块根淀粉粒透射电镜观察比较 |
| 3.5.2 成熟期块根淀粉粒半薄切片观察比较 |
| 3.5.3 成熟期块根淀粉粒扫描电镜观察比较 |
| 3.6 木薯有性四倍体及其亲本块根酒精转化率比较分析 |
| 3.7 木薯有性四倍体及其亲本块根转录组学比较分析 |
| 3.7.1 转录组测序及数据统计 |
| 3.7.2 木薯有性四倍体及其亲本差异表达基因(DEGs)分析 |
| 3.7.3 品种间差异表达基因Go/ Pathway功能分析 |
| 3.7.4 Q-PCR验证 |
| 3.8 木薯有性四倍体块根淀粉提前填充机理分析 |
| 3.8.1 淀粉与蔗糖代谢通路中差异表达的关键酶基因筛选 |
| 3.8.2 蔗糖与淀粉代谢关键酶活性比较分析 |
| 3.9 木薯有性四倍体块根抗采后生理衰变(PPD)机理 |
| 3.9.1 采后生理衰变观察比较 |
| 3.9.2 采后块根品质指标干物率比较 |
| 3.9.3 采后块根品质指标β-胡萝卜素比较 |
| 3.9.4 采后块根品质指标淀粉含量比较 |
| 3.9.5 多酚含量及多酚氧化酶活性比较 |
| 3.9.6 H_2O_2含量及抗氧化酶(SOD/CAT/POD)活性比较 |
| 3.9.7 木质素含量及PAL酶活性比较 |
| 3.9.8 块根横切面细胞壁木质素成分染色观察 |
| 3.9.9 采后储藏不同时间木薯块根总RNA的提取 |
| 3.9.10 与木质素合成相关的关键酶基因家族统计 |
| 3.9.11 与木质素合成相关的关键酶基因家族的表达分析 |
| 3.9.12 新鲜块根细胞壁厚度及透射电镜观察 |
| 4 讨论 |
| 4.1 多倍化对木薯生长特性的影响 |
| 4.2 有性多倍化提高了木薯叶片光合特性及叶绿素含量 |
| 4.3 木薯有性多倍体根茎叶中蔗糖动态变化与淀粉含量的关系及其早熟机理探讨 |
| 4.4 木薯有性多倍体抗逆性具有明显的杂种优势 |
| 4.5 多倍体杂种优势与基因调控 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）新麦草多倍体诱导及细胞学研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 植物多倍体育种的意义 |
| 1.2 牧草多倍体育种概况 |
| 1.3 多倍体诱导的常规方法 |
| 1.4 植物外植体培养与多倍体诱导 |
| 1.4.1 植物外植体培养技术的发展 |
| 1.4.2 植物组织培养技术在遗传育种领域的应用 |
| 1.4.3 牧草的组织培养研究 |
| 1.4.4 诱导植物离体组织染色体加倍 |
| 1.4.4.1 诱导材料和诱导方式 |
| 1.4.4.2 化学诱导剂类型 |
| 1.4.4.3 诱导离体多倍体的其它方法 |
| 1.5 染色体加倍植株的倍性鉴定 |
| 1.5.1 染色体直接计数法 |
| 1.5.2 扫描细胞光度仪鉴定 |
| 1.5.3 细胞形态学鉴定法 |
| 1.5.4 逆境胁迫法 |
| 1.5.5 植物形态学鉴定法 |
| 1.6 染色体加倍对植物光合与叶绿素荧光特性的影响 |
| 1.6.1 植物光合作用研究方法 |
| 1.6.2 植物光合作用与染色体倍性 |
| 1.7 染色体C-分带与荧光原位杂交在植物染色体分析中的应用 |
| 1.7.1 染色体C-分带技术 |
| 1.7.2 染色体荧光原位杂交（FISH) |
| 1.7.2.1 植物FISH 的原理与应用 |
| 1.7.2.2 RDNA 分子原位杂交 |
| 1.8 新麦草属牧草研究概况 |
| 1.8.1 新麦草分类地位 |
| 1.8.2 新麦草的植物学特征与生物学特性 |
| 1.8.3 新麦草育种研究 |
| 1.8.4 新麦草外植体培养研究 |
| 1.8.5 新麦草的远缘杂交及细胞遗传学研究 |
| 1.9 研究目的与意义 |
| 第二章 新麦草外植体培养与高效再生体系建立 |
| 2.1 试验材料与方法 |
| 2.1.1 试验材料简介 |
| 2.1.2 愈伤组织诱导培养 |
| 2.1.2.1 幼胚 |
| 2.1.2.2 幼穗 |
| 2.1.2.3 成熟胚 |
| 2.1.3 愈伤组织继代培养 |
| 2.1.4 分化与再生培养 |
| 2.1.5 数据统计 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 外植体取材与筛选 |
| 2.2.1.1 幼穗成熟度对愈伤组织诱导的影响 |
| 2.2.1.2 幼胚胚龄及低温处理对愈伤组织诱导的影响 |
| 2.2.1.3 种子预处理对成熟胚愈伤组织诱导的影响 |
| 2.2.2 基本培养基筛选 |
| 2.2.3 外源激素对愈伤组织诱导的影响 |
| 2.2.3.1 生长素2,4-D 与细胞分裂素6-BA 及其互作 |
| 2.2.3.2 脱落酸（ABA）对愈伤组织诱导的影响 |
| 2.2.4 水解酪蛋白（CH）对愈伤组织培养的影响 |
| 2.2.5 愈伤组织的继代改造 |
| 2.2.6 愈伤组织的分化与再生 |
| 2.2.7 再生小植株生根与移栽 |
| 2.2.8 基因型差异对新麦草外植体培养的影响 |
| 2.2.9 新麦草三种外植体培养过程的比较 |
| 2.3 讨论与小结 |
| 第三章 新麦草染色体加倍与倍性鉴定 |
| 3.1 试验材料与方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 染色体加倍诱导方法 |
| 3.1.2.1 诱导萌动种子染色体加倍 |
| 3.1.2.2 诱导分蘖芽染色体加倍 |
| 3.1.2.3 诱导愈伤组织染色体加倍 |
| 3.1.3 加倍材料的倍性鉴定 |
| 3.1.3.1 根尖细胞染色体计数法 |
| 3.1.3.2 形态学鉴定 |
| 3.1.3.3 气孔保卫细胞鉴定 |
| 3.1.4 数据分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 诱导萌动种子染色体加倍 |
| 3.2.2 诱导分蘖芽染色体加倍 |
| 3.2.3 诱导愈伤组织染色体加倍 |
| 3.2.4 染色体计数倍性鉴定 |
| 3.2.5 染色体加倍植株形态鉴定 |
| 3.2.6 气孔保卫细胞比较 |
| 3.3 讨论与小结 |
| 第四章 新麦草加倍植株光合作用与叶绿素荧光分析 |
| 4.1 试验材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.1.2.1 叶片光合作用光响应曲线测定 |
| 4.1.2.2 叶片光合作用CO_2响应曲线测定 |
| 4.1.2.3 光响应曲线和CO_2响应曲线拟合与参数估计 |
| 4.1.2.4 叶片叶绿素荧光参数对干旱胁迫的响应 |
| 4.1.2.5 数据统计分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 不同倍性植株叶片光合速率对光辐射强度的响应 |
| 4.2.2 气孔导度、胞间CO_2浓度及蒸腾速率对光强的响应 |
| 4.2.3 光合速率对胞间CO_2浓度的响应 |
| 4.2.4 气孔导度、蒸腾速率及水分利用效率对胞间C02浓度的响应 |
| 4.2.5 叶绿素荧光对干旱胁迫的响应分析 |
| 4.3 讨论与小结 |
| 第五章 新麦草细胞学分析 |
| 5.1 试验材料与方法 |
| 5.1.1 试验材料 |
| 5.1.2 体细胞染色体数目统计 |
| 5.1.3 染色体C-分带及核型分析 |
| 5.1.4 染色体45S RDNA 分子原位杂交(FISH) |
| 5.1.4.1 标记探针 |
| 5.1.4.2 染色体制片与变性 |
| 5.1.4.3 原位杂交 |
| 5.1.4.4 染色及镜检 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 染色体数目与形态 |
| 5.2.2 染色体C-分带与核型分析 |
| 5.2.3 染色体45SRDNA 分子原位杂交(FISH) |
| 5.3 讨论与小结 |
| 第六章 综合讨论与结论 |
| 6.1 讨论 |
| 6.2 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附表 |
| 附图 |
| 作者简介 |
（3）几种披碱草种间杂种F1遗传特性及冰草分子图谱构建研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 饲草新品种开发的必要性 |
| 2 小麦族多年生饲草及其远缘杂交育种研究概况 |
| 3 遗传标记的发展概况 |
| 3.1 形态标记 |
| 3.2 细胞学标记 |
| 3.3 生化标记 |
| 3.4 DNA 分子标记 |
| 3.4.1 基于DNA-DNA 杂交的DNA 标记 |
| 3.4.2 基于PCR 技术的DNA 标记 |
| 3.4.3 基于限制性酶切和PCR 的DNA 标记 |
| 3.4.4 基于单个核苷酸多态性的DNA 标记 |
| 4 作物遗传图谱研究进展 |
| 4.1 DNA 标记的选择 |
| 4.2 作图群体的建立 |
| 4.2.1 亲本的选配 |
| 4.2.2 分离群体类型的选择 |
| 4.2.3 作图群体大小 |
| 4.2.4 遗传连锁群的构建 |
| 4.2.5 与遗传作图有关的计算机软件 |
| 4.3 遗传图谱的研究意义 |
| 4.3.1 QTL 分析 |
| 4.3.2 标记辅助育种 |
| 4.3.3 图位克隆 |
| 4.4 饲草遗传图谱研究进展 |
| 5 本研究的内容及目的意义 |
| 第一章 老芒麦与紫芒披碱草杂种F1生育及细胞遗传学等特性的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 供试材料及试验地概况 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.2.1 生长发育及形态观测 |
| 1.2.2 花粉育性和结实性 |
| 1.2.3 染色体观察 |
| 1.2.4 EST 同工酶分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 植株生长及形态 |
| 2.2 花粉育性与结实性 |
| 2.3 细胞染色体特征 |
| 2.3.1 RTC 染色体 |
| 2.3.2 PMC MⅠ染色体 |
| 2.4 亲本及其正、反交杂种F1 同工酶酶谱特征 |
| 2.4.1 EST 同工酶酶谱 |
| 3 讨论与小结 |
| 第二章 加拿大披碱草与肥披碱草杂种F1 的生育及细胞学分析 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 供试材料 |
| 1.2 研究方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 植株生长速度、株型、穗型比较 |
| 2.2 花粉育性和结实性观察结果 |
| 2.3 细胞染色体特征 |
| 2.3.1 RTC 染色体 |
| 2.3.2 PMC MⅠ染色体 |
| 3 讨论与小结 |
| 第三章 加拿大披碱草、肥披碱草及其杂种F1的RAPD 分析 |
| 1 试验材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 基因组DNA 的提取及纯度检测 |
| 1.2.2 RAPD 试验流程 |
| 1.2.3 DNA 谱带的统计 |
| 1.3 遗传多样性与遗传结构分析 |
| 1.3.1 多态性位点百分率 |
| 1.3.2 种群间的遗传距离和遗传相似度 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 DNA 的纯度 |
| 2.2 RAPD 扩增结果 |
| 2.3 种间遗传相似系数和遗传距离 |
| 3 讨论与小结 |
| 第四章 加拿大披碱草×肥披碱草杂种F1幼穗组培再生体系研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.2.1 培养基设置 |
| 1.2.2 外植体处理及培养过程 |
| 1.2.3 炼苗与移栽 |
| 1.2.4 数据处理 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 杂种F1 组培再生体系的建立 |
| 2.1.1 愈伤组织的诱导及继代培养 |
| 2.1.2 愈伤组织的分化 |
| 2.1.3 生根培养基的筛选 |
| 3 讨论与小结 |
| 第五章 冰草遗传图谱的构建 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 供试材料 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.2.1 田间取样 |
| 1.2.2 DNA 提取与检测 |
| 1.3 AFLP、RAPD 引物 |
| 1.3.1 AFLP 引物及其来源 |
| 1.3.2 RAPD 引物及其来源 |
| 1.3.3 AFLP 分子标记试验流程 |
| 1.3.4 RAPD 试验流程 |
| 1.3.5 数据的统计 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 各材料DNA 纯度检测 |
| 2.2 AFLP 预扩增检测 |
| 2.3 AFLP 引物筛选及多态性分析 |
| 2.4 RAPD 引物筛选及多态性分析 |
| 2.5 F_2 群体AFLP、RAPD 标记的分离 |
| 2.6 利用冰草F_2 群体构建的AFLP、RAPD 分子遗传图谱及其基本特征 |
| 3 讨论与小结 |
| 3.1 关于亲本的选配及群体构建 |
| 3.2 关于AFLP 标记的作图效率 |
| 3.3 分子标记的偏分离及偏分离产生的机制 |
| 第六章 冰草重要农艺性状的QTL 分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 供试材料 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.2.1 农艺性状观测 |
| 1.2.2 数据统计处理 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 性状在双亲间的差异及在F_2 群体的分离 |
| 2.2 F_2 群体中各性状间的相互关系 |
| 2.3 冰草重要农艺性状的定位与分析 |
| 3 讨论与小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 作者简介 |
（4）几种小麦族禾草远缘杂交后代育性恢复研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 饲草新品种开发的重要性 |
| 2 小麦族多年生禾草及其作用 |
| 3 小麦族多年生禾草远缘杂交育种研究概况 |
| 4 植物远缘杂交种育性恢复研究概况 |
| 4.1 回交法 |
| 4.2 染色体加倍法 |
| 4.2.1 秋水仙碱处理法 |
| 4.2.2 秋水仙碱处理适宜的浓度、时间和温度 |
| 4.3 克服杂种不育的其它方法 |
| 5 远缘杂种F1 育性恢复后代鉴定方法研究进展 |
| 5.1 形态学鉴定 |
| 5.2 细胞遗传学鉴定 |
| 5.3 同工酶鉴定 |
| 5.4 DNA 分子标记鉴定 |
| 5.4.1 RFLP |
| 5.4.2 RAPD |
| 5.4.3 SSR |
| 5.4.4 AFLP |
| 6 本研究的内容及目的意义 |
| 第一章 加拿大披碱草—野大麦F1染色体加倍及加倍后代育性和细胞遗传学鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料及试验地概况 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.2.1 秋水仙碱诱导染色体加倍处理 |
| 1.2.2 根尖细胞（RTC）染色体观察 |
| 1.2.3 花粉母细胞减数分裂中期Ⅰ（PMCMⅠ）染色体的观察 |
| 1.2.4 花粉育性 |
| 1.2.5 结实性 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 秋水仙碱处理分蘖苗加倍情况 |
| 2.2 根尖染色体（RTC）鉴定 |
| 2.3 花粉母细胞减数分裂中期Ⅰ（PMCMⅠ）染色体鉴定 |
| 2.4 加倍植株的花粉可育率和结实率鉴定 |
| 3 讨论与小结 |
| 3.1 加拿大披碱草×野大麦杂种F1 秋水仙碱诱导染色体加倍条件筛选 |
| 3.2 加拿大披碱草×野大麦杂种F1 自然加倍现象分析 |
| 3.3 加拿大披碱草×野大麦杂种F1 染色体加倍植株细胞学及育性鉴定可靠性. |
| 第二章 加拿大披碱草—野大麦F1染色体加倍后代的形态及生物学特性研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.2.1 生育期的观测 |
| 1.2.2 生长速度及株高的测定 |
| 1.2.3 分蘖能力的测定 |
| 1.2.4 形态特征观测 |
| 1.2.5 幼苗耐盐性鉴定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 生育期观测结果 |
| 2.2 植株生长速度 |
| 2.3 植株表观特征和分蘖特性 |
| 2.4 穗型特征 |
| 2.5 染色体加倍植株与亲本及杂种F1 耐盐性比较 |
| 2.5.1 细胞膜相对透性差异 |
| 2.5.2 过氧化物酶（POD）活性差异 |
| 2.5.3 游离脯氨酸含量差异 |
| 2.5.4 表观生长状况比较 |
| 3 讨论与小结 |
| 3.1 染色体加倍植株及其后代形态生物学特性的遗传表现 |
| 3.2 染色体加倍植株及其后代耐盐性的遗传表现 |
| 第三章 加拿大披碱草—野大麦F1染色体加倍后代的同工酶分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.2.1 酶液提取 |
| 1.2.2 电泳 |
| 1.2.3 染色 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 EST 同工酶酶谱特征 |
| 2.2 POD 同工酶酶谱特征 |
| 2.3 SOD 同工酶酶谱特征 |
| 3 讨论与小结 |
| 第四章 加拿大披碱草—野大麦F1染色体加倍后代的AFLP 分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.2.1 DNA 提取与检测 |
| 1.2.2 AFLP 分子标记试验流程 |
| 1.2.3 AFLP 标记的数据处理 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 各材料DNA 质量、AFLP 预扩增检测及适宜引物筛选 |
| 2.2 AFLP 扩增结果 |
| 2.3 各供试材料的遗传距离及聚类分析 |
| 2.4 加拿大披碱草—野大麦加倍F1 代单株的AFLP 扩增结果分析 |
| 3 讨论与小结 |
| 3.1 AFLP 适宜条件及适宜引物的筛选 |
| 3.2 染色体加倍植株与亲本及杂种F1 的AFLP 图谱特征分析 |
| 第五章 加拿大披碱草与披碱草、圆柱披碱草2 个种间杂种F1的形态及生物学、细胞学及AFLP 分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 研究方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 加拿大披碱草与披碱草、圆柱披碱草2 种间杂种F1 形态生物学特性 |
| 2.1.1 生育期观测结果 |
| 2.1.2 植株生长速度 |
| 2.1.3 植株表观特征和分蘖特性 |
| 2.1.4 穗型特征 |
| 2.2 育性及细胞学特性 |
| 2.2.1 花粉育性和结实性 |
| 2.2.2 根尖染色体（RTC）观察 |
| 2.2.3 花粉母细胞减数分裂中期Ⅰ（PMCMⅠ）染色体观察 |
| 2.3 加拿大披碱草与披碱草、圆柱披碱草2 个种间杂种F1 的AFLP 分析 |
| 2.3.1 各供试材料的DNA 质量检测 |
| 2.3.2 AFLP 扩增结果 |
| 2.3.3 各供试材料的遗传距离和聚类分析 |
| 3 讨论与小结 |
| 第六章 加拿大披碱草与披碱草、圆柱披碱草2 个种间杂种F1 育性恢复初步研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.2.1 2 个杂种F1 的组织培养再生体系建立 |
| 1.2.2 秋水仙碱处理愈伤组织诱导染色体加倍 |
| 1.2.3 回交方案及回交BC1 代植株染色体鉴定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 杂种F1 组培再生体系的建立 |
| 2.1.1 愈伤组织的诱导及继代培养 |
| 2.1.2 愈伤组织分化成苗 |
| 2.1.3 生根培养及炼苗移栽 |
| 2.2 秋水仙碱处理愈伤组织诱变结果 |
| 2.3 回交结果 |
| 2.4 回交BC1 植株体细胞（RTC）染色体鉴定 |
| 3 讨论与小结 |
| 3.1 愈伤组织的诱导及组培再生体系建立 |
| 3.2 秋水仙碱诱导愈伤组织变异效果 |
| 3.3 回交效果 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 作者简介 |
（5）利用基因枪轰击法将NHX1、CBF耐逆相关基因导入高羊茅（Festuca arundinacea Schreb.）（论文提纲范文）
| 第一章 引言 |
| 1 草坪草研究进展 |
| 1.1 草坪草育种及国内外研究概况 |
| 1.2 草坪草植株再生体系 |
| 1.2.1 愈伤组织培养 |
| 1.2.2 悬浮细胞培养 |
| 1.2.3 原生质体培养 |
| 1.3 草坪草植株转化体系 |
| 1.3.1 硅碳纤维介导的直接基因转化 |
| 1.3.2 电击融合法和 PEG 介导的 DNA 直接转移导入原生质体 |
| 1.3.3 基因枪法介导的直接基因转化 |
| 1.3.4 农杆菌介导的转化法 |
| 2. 选择标记基因与启动子 |
| 3. 抗渗透胁迫 |
| 3.1 Na~+/H~+反向运转蛋白(Na~+/H~+ ANTIPORTOR PROTEIN) |
| 3.1.1 质膜Na~+/H~+反向运转蛋白 |
| 3.1.2 液泡膜Na~+/H~+反向运转蛋白 |
| 3.2 CBF/DREB 转录因子及其在提高植物耐逆性中的作用 |
| 3.2.1 转录因子的组成和表达 |
| 3.2.2 CBF/DREB 转录因子在提高植物耐逆中的作用 |
| 4 存在问题与展望 |
| 5 研究的目的和意义 |
| 第二章 高羊茅组培再生系统的研究与建立 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 种子的消毒 |
| 1.2.2 下胚轴的获得 |
| 1.2.3 愈伤组织的诱导 |
| 1.2.4 高羊茅的再生 |
| 1.2.5 炼苗和移栽 |
| 1.2.6 数据处理 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 种子表面消毒方法的选择 |
| 2.2 下胚轴的两个品种的不同切法对愈伤组织诱导率的影响 |
| 2.3 不同的2，4－D 浓度对愈伤组织诱导的影响 |
| 3 讨论与结论 |
| 第三章 基因枪轰击法获得转ATNHX1和CBF基因高羊茅植株 |
| 第一节 高羊茅ATNHX1和CBF 4基因的遗传转化 |
| 1 材料 |
| 1.1 受体材料 |
| 1.2 质粒和菌株 |
| 1.3 试剂和仪器 |
| 1.3.1 试剂 |
| 1.3.2 仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 高羊茅基因转化 |
| 2.1.1 受体的准备 |
| 2.1.2 质粒的提取和纯化 |
| 2.1.3 基因枪法转化 |
| 2.2 转化体筛选和植株再生 |
| 2.3 再生植株的检测 |
| 2.3.1 PCR 检测 |
| 2.3.2 WESTERN-BLOTTING 杂交检测 |
| 2.3.3 植株草丁膦抗性分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 基因枪转化后的抗性筛选及抗性愈伤组织分化苗 |
| 3.2 转基因植株的 PCR 检测 |
| 3.3 WESTERN-BLOTTING 杂交检测 |
| 3.4 转基因植株草丁膦抗性 |
| 第二节 CBF3 基因表达载体的构建及对高羊茅的遗传转化 |
| 1 材料 |
| 1.1 受体材料（同前） |
| 1.2 质粒和菌株 |
| 1.3 试剂和仪器（同前） |
| 2 方法 |
| 2.1 质粒表达载体的构建 |
| 2.1.1 碱裂解法小量提取质粒 |
| 2.1.2 酶切 |
| 2.1.3 回收 |
| 2.1.4 连接 |
| 2.1.5 转化 |
| 2.2 质粒载体的鉴定 |
| 2.3 高羊茅基因转化方法(同前) |
| 3. 结果与分析 |
| 3.1 载体的酶切鉴定和 PCR 鉴定 |
| 3.2 PCR 检测 |
| 3.3 WESTERN-BLOTTING 杂交检测 |
| 第三节 讨论与结论 |
| 1 讨论 |
| 2 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（6）三种冷季型草坪草的遗传多样性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 草坪草的概念及分类 |
| 1.2 草坪草的育种方法 |
| 1.2.1 自然条件下丰富的种内及种间变异是草坪草选育的基础 |
| 1.2.2 草坪草的系统选育方法 |
| 1.2.3 异源二倍体在草坪草育种中的应用 |
| 1.2.4 分子生物学技术在草坪草育种中的应用 |
| 1.3 国内外草坪草研究的现状 |
| 1.3.1 国际上草坪草的研究现状 |
| 1.3.2 国内草坪草的研究现状 |
| 1.3.3 三种主要冷季型草坪草介绍 |
| 1.4 遗传标记的概念及种类 |
| 1.4.1 基于DNA-DNA杂交的DNA标记 |
| 1.4.2 基于PCR的DNA标记 |
| 1.4.3 基于PCR与限制性酶切技术结合的DNA标记 |
| 1.4.4 基于单核苷酸多态性的DNA标记 |
| 1.5 分子标记技术在草坪草品种遗传多样性方面的应用 |
| 1.5.1 分子标记技术在系统发生分析中的应用 |
| 1.5.2 分子标记技术在群体遗传结构研究中的应用 |
| 1.5.3 分子标记技术在品种鉴定及品种间遗传多样性研究方面的应用 |
| 1.5 本研究的目的意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 材料的种植 |
| 2.2.2 抗性鉴定标准 |
| 2.2.3 基因组总DNA提取 |
| 2.2.3 DNA浓度测定和质量检测 |
| 2.2.4 RAPD分析 |
| 2.2.5 数据分析 |
| 第三章 试验结果 |
| 3.1 形态学观察结果 |
| 3.1.1 黑麦草形态学观察结果 |
| 3.1.2 早熟禾形态学观察结果 |
| 3.1.2 高羊茅形态学观察结果 |
| 3.2 基因组DNA提取结果 |
| 3.3 品种间遗传多样性: |
| 3.3.1 黑麦草品种之间的遗传多样性: |
| 3.3.2 早熟禾品种之间的遗传多样性 |
| 3.3.3 高羊茅品种间的遗传多样性 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 三种冷季型草坪草品种间遗传多样性的比较 |
| 4.2 聚类结果与表型特征的比较 |
| 4.3 混播建植草坪时应该综合考虑外部形态特征和遗传关系。 |
| 4.4 长期引种栽培对于草坪草品种间遗传多样性的影响 |
| 4.5 草地早熟禾的育种方法 |
| 4.6 多年生黑麦草品种之间错综复杂的遗传关系 |
| 4.7 意大利黑麦草和多年生黑麦草种间关系 |
| 4.8 RAPD进行种间遗传分析的可行性 |
| 4.9 综合种遗传多样性研究时所须样本群体的大小 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表和待发表的研究论文 |
| 致谢 |
四、意大利黑麦草,草地羊茅与它们的属间杂种后代F_2、F_3和F_4的比较试验（论文参考文献）
- [1]木薯有性四倍体杂种优势及其机理研究[D]. 陈霞. 海南大学, 2019
- [2]新麦草多倍体诱导及细胞学研究[D]. 云岚. 内蒙古农业大学, 2009(09)
- [3]几种披碱草种间杂种F1遗传特性及冰草分子图谱构建研究[D]. 李小雷. 内蒙古农业大学, 2008(12)
- [4]几种小麦族禾草远缘杂交后代育性恢复研究[D]. 马艳红. 内蒙古农业大学, 2007(03)
- [5]利用基因枪轰击法将NHX1、CBF耐逆相关基因导入高羊茅（Festuca arundinacea Schreb.）[D]. 梁蕊芳. 内蒙古农业大学, 2005(05)
- [6]三种冷季型草坪草的遗传多样性研究[D]. 宁婷婷. 武汉大学, 2004(05)
- [7]意大利黑麦草,草地羊茅与它们的属间杂种后代F2、F3和F4的比较试验[A]. H.KALTOFEN,E.WOJAHN,西力布. 第十四届国际草地会议论文集（上册）, 1981